資源簡(jiǎn)介

中小學(xué)教育資源及組卷應(yīng)用平臺(tái)
第一章第2節(jié)
二
微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
教學(xué)設(shè)計(jì)
課題
微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
單元
第一章
學(xué)科
生物
年級(jí)
高二
學(xué)習(xí)目標(biāo)與核心素養(yǎng)
學(xué)習(xí)目標(biāo)：1.舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。2.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。核心素養(yǎng)：1.文化基礎(chǔ)：各類微生物都能適應(yīng)其生活環(huán)境。2.自主發(fā)展：根據(jù)微生物的代謝類型配制選擇培養(yǎng)基。3.社會(huì)參與：運(yùn)用生物與環(huán)境相適應(yīng)觀點(diǎn)理解選擇培養(yǎng)基的原理。
重點(diǎn)
難點(diǎn)
教學(xué)過(guò)程
教學(xué)環(huán)節(jié)
教師活動(dòng)
學(xué)生活動(dòng)
設(shè)計(jì)意圖
導(dǎo)入新課
從社會(huì)中來(lái)展示美國(guó)黃石國(guó)家公園相關(guān)圖片，介紹分析水生棲熱菌的篩選：水生棲熱菌能在70～80
℃的高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存。提出問(wèn)題：如何篩選微生物？
欣賞美國(guó)黃石公園相關(guān)圖片，思考高溫下能生存的微生物特點(diǎn)。
通過(guò)自然顯現(xiàn)的展示，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣。
講授新課
選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。比較不同選擇培養(yǎng)基的篩選方法，特點(diǎn)。方法特點(diǎn)舉例用微生物的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)進(jìn)行選擇培養(yǎng)通過(guò)控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，使某種微生物能生長(zhǎng)，其他微生物不能生長(zhǎng)利用只含有尿素一種氮源的培養(yǎng)基，可篩選出分解尿素的細(xì)菌用某種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行的選擇培養(yǎng)在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)，利用加入的化學(xué)物質(zhì)對(duì)微生物產(chǎn)生的影響，抑制某些微生物，同時(shí)選擇所需的微生物加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌用培養(yǎng)條件進(jìn)行的選擇培養(yǎng)改變微生物的培養(yǎng)條件將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物從眾多的微生物中分離所需要的微生物。思考與討論(1)如何從大豆田土壤中分離出固氮微生物？提示：從大豆田土壤取土樣，利用缺乏氮源的培養(yǎng)基可分離出固氮微生物。(2)要分離出分解纖維素的微生物，應(yīng)在什么樣的環(huán)境中取土樣？應(yīng)配制什么樣的培養(yǎng)基？提示：應(yīng)從富含纖維素的培養(yǎng)基中取土樣，如樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土。應(yīng)配制以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基。(3)根據(jù)選擇培養(yǎng)基的原理，如何篩選出耐酸菌？提示：可將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，再接種培養(yǎng)。應(yīng)用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行微生物分離培養(yǎng)(舉例）二、微生物的選擇培養(yǎng)1．分解尿素的細(xì)菌的分離分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶，該酶能催化尿素分解產(chǎn)生NH3，以此作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。要將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)思路是培養(yǎng)基中除含有細(xì)菌必需的碳源、水、無(wú)機(jī)鹽外，只含有尿素一種氮源。2．稀釋涂布平板法分離分解尿素的細(xì)菌土壤中細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物，必須要對(duì)土樣進(jìn)行充分稀釋，然后再將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上，操作過(guò)程如下：采集土樣→將10
g土樣加入盛有90
mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1
mL上清液加入盛有9
mL無(wú)菌水的試管中，依次等比稀釋→取0.1
mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面→將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中→將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布→用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻→涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37
℃的恒溫箱中培養(yǎng)1～2
d。播放土壤中分解尿素的分離與計(jì)數(shù)視頻回答相關(guān)問(wèn)題展示稀釋涂布平板法過(guò)程和結(jié)果的圖解，提出“如何進(jìn)行微生物的計(jì)數(shù)？”用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物的方法(1)稀釋涂布平板操作要求：按照平行重復(fù)原則，每一稀釋度的菌液涂布3個(gè)或3個(gè)以上的平板。(2)計(jì)數(shù)的時(shí)機(jī)：當(dāng)各平板上菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)選擇可用于計(jì)數(shù)的平板：選擇菌落數(shù)在30～300的平板(相同稀釋度的平板均符合該特點(diǎn))進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后取平均值。(4)每克樣品中的菌株數(shù)＝某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)÷涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積×稀釋倍數(shù)。是否還有其他微生物的數(shù)量測(cè)定方法？三、微生物的數(shù)量測(cè)定1．稀釋涂布平板法(1)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)注意問(wèn)題：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。2．顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(1)方法：利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)。(2)注意問(wèn)題：統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。分析血小板計(jì)數(shù)法的計(jì)數(shù)方式和計(jì)算方法。微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，但是一般使用計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法原理利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板培養(yǎng)基計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)菌體本身培養(yǎng)基上菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，有一定誤差計(jì)算公式每毫升原液含菌數(shù)＝每小格平均菌體數(shù)×400×10
000×稀釋倍數(shù)每毫升原液含菌數(shù)＝培養(yǎng)基上平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)÷涂布液體積思考與討論1．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是否是活菌的實(shí)際數(shù)目？
提示：由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。2．分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的pH發(fā)生什么變化？提示：尿素分解菌將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使培養(yǎng)基的pH升高。
3．在用涂布器涂布平板時(shí)，為了操作方便是否可以完全打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋？提示：為了防止雜菌污染，不能完全打開(kāi)皿蓋。到社會(huì)中去活菌計(jì)數(shù)技術(shù)廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生、水源污染度的檢驗(yàn)和土壤含菌量的測(cè)定等方面。如果你感興趣，可以從下列項(xiàng)目中選做一個(gè)，并走訪相關(guān)部門或企業(yè)，了解他們是如何進(jìn)行檢測(cè)的。1.空氣中微生物總數(shù)的檢測(cè)提示：沉淀法（1）將肉膏瓊脂培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、高氏培養(yǎng)基融化后，各倒4個(gè)平板。（2）分別取兩個(gè)上述三種培養(yǎng)基平板，在空氣中暴露5min，另外2個(gè)平板用于檢查無(wú)菌空氣管道排氣口的無(wú)菌情況。（3）將上述平板置28℃培養(yǎng)48h后計(jì)算其菌落數(shù)，并觀察菌落形態(tài)、顏色，將結(jié)果列表四、練習(xí)與鞏固1．用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是(　　)A．涂布了1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是212、240和250，取平均值234D　[在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，A、B錯(cuò)誤。C項(xiàng)雖然涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與其他的相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，此時(shí)，不能簡(jiǎn)單地用3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值來(lái)求平均值，C錯(cuò)誤。]2．下圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析，下列敘述正確的是(　　)A．3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為103倍B．4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)恰好為5號(hào)試管的10倍C．5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×109個(gè)D．該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要多C　[3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為104倍，A項(xiàng)錯(cuò)誤；4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)不一定恰好為5號(hào)試管的10倍，B項(xiàng)錯(cuò)誤；5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為(168＋175＋167)
÷3÷0.1×106＝1.7×109（個(gè)），C項(xiàng)正確；在固體培養(yǎng)基上可能存在兩個(gè)或多個(gè)菌體形成一個(gè)菌落的情況，得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目少，D項(xiàng)錯(cuò)誤。]
閱讀課文，概括選擇培養(yǎng)基的概念。通過(guò)對(duì)比，理解選擇培養(yǎng)基的篩選特點(diǎn)、方法及適用微生物。思考與討論：小組討論，完成相關(guān)探究，解決實(shí)際相關(guān)問(wèn)題。學(xué)生閱讀P16—18，根據(jù)教材圖解，分析微生物選擇培養(yǎng)的方式稀釋涂布平板法，提取課文重要知識(shí)點(diǎn)。思考：如何進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)？觀看視頻思考：除了稀釋涂布平板法外還有哪些計(jì)數(shù)方法？學(xué)生閱讀P16—18，通過(guò)表格，提出問(wèn)題，分析微生物選擇培養(yǎng)的類型，提取課文重要知識(shí)點(diǎn)。思考與討論：小組討論，完成相關(guān)探究，解決實(shí)際相關(guān)問(wèn)題。分組討論，聯(lián)系實(shí)際，利用所學(xué)知識(shí)，應(yīng)用于社會(huì)實(shí)踐根據(jù)所學(xué)，完成相關(guān)練習(xí)
根據(jù)微生物生活特點(diǎn)，概括選擇培養(yǎng)基的概念。指導(dǎo)學(xué)生分析和解決問(wèn)題。通過(guò)對(duì)比，指導(dǎo)學(xué)生理解選擇培養(yǎng)基的概念及分類方式。提出一個(gè)問(wèn)題比解決一個(gè)問(wèn)題更重要，此環(huán)節(jié)可以讓學(xué)生思考真正發(fā)生，讓更多的學(xué)生參與到課堂中。根據(jù)教材圖解獲取稀釋涂布平板法的操作步驟。提出問(wèn)題引發(fā)思考。觀看視頻，使學(xué)生更形象的了解分離和計(jì)數(shù)過(guò)程，感知知識(shí)形成，突出重點(diǎn)。表格引導(dǎo)學(xué)生分析微生物選擇培養(yǎng)的類型。提出一個(gè)問(wèn)題比解決一個(gè)問(wèn)題更重要，此環(huán)節(jié)可以讓學(xué)生思考真正發(fā)生，讓更多的學(xué)生參與到課堂中。回顧舊知，鞏固和應(yīng)用所學(xué)知識(shí)。分組討論，發(fā)散思維，將所學(xué)知識(shí)應(yīng)用于社會(huì)實(shí)踐中，提高學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣。通過(guò)練習(xí)及對(duì)練習(xí)的評(píng)價(jià)，了解學(xué)生對(duì)知識(shí)的理解情況，鞏固所學(xué)知識(shí)，為繼續(xù)學(xué)習(xí)奠定基礎(chǔ)。
課堂小結(jié)
板書(shū)
微生物的選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)1.選擇培養(yǎng)基：概念2.微生物的選擇培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌的分離3.微生物的數(shù)量測(cè)定稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
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第2節(jié)
微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用
二
微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)
人教版
高中生物選擇性必修三
1.舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。
2.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。
學(xué)習(xí)目標(biāo)
學(xué)科素養(yǎng)
1.文化基礎(chǔ)：各類微生物都能適應(yīng)其生活環(huán)境。
2.自主發(fā)展：根據(jù)微生物的代謝類型配制選擇培養(yǎng)基。
3.社會(huì)參與：運(yùn)用生物與環(huán)境相適應(yīng)觀點(diǎn)理解選擇培養(yǎng)基的原理。
從社會(huì)中來(lái)
美國(guó)黃石國(guó)家公園
海底噴泉
一、選擇培養(yǎng)基
1.水生棲熱菌的篩選：水生棲熱菌能在　　　　　　　　　
℃的高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下　　　　　　　　　。
2.選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，允許　　　　　　　　　　的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止　　　　　　　　　　微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。
70～80
不能生存
特定種類
其他種類
3.選擇培養(yǎng)基的篩選方法、特點(diǎn)及舉例（拓展）
方法
特點(diǎn)
案例
利用微生物的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)進(jìn)行選擇培養(yǎng)
通過(guò)控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，使某種微生物能生長(zhǎng)，其他微生物不能生長(zhǎng)
利用只含有尿素一種氮源的培養(yǎng)基，可篩選出分解尿素的細(xì)菌
利用某種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行的選擇培養(yǎng)
在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)，利用加入的化學(xué)物質(zhì)對(duì)微生物產(chǎn)生的影響，抑制某些微生物，同時(shí)選擇所需的微生物
加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌
利用培養(yǎng)條件進(jìn)行的選擇培養(yǎng)
改變微生物的培養(yǎng)條件
將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物
拓展：比較三種選擇培養(yǎng)基的篩選方法特點(diǎn)及案例
4.思考與討論
(1)如何從大豆田土壤中分離出固氮微生物？
提示：從大豆田土壤取土樣，利用缺乏氮源的培養(yǎng)基可分離出固氮微生物。
(2)要分離出分解纖維素的微生物，應(yīng)在什么樣的環(huán)境中取土樣？應(yīng)配制什么樣的培養(yǎng)基？
提示：應(yīng)從富含纖維素的培養(yǎng)基中取土樣，如樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土。應(yīng)配制以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基。
(3)根據(jù)選擇培養(yǎng)基的原理，如何篩選出耐酸菌？
提示：可將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，再接種培養(yǎng)。
(4)如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？
提示：KH2PO4、NaHPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、水
(5)該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？
提示：共同點(diǎn)都有微生物生長(zhǎng)所需碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽，不同點(diǎn)是氮源使用尿素，普通培養(yǎng)基一般使用蛋白胨等。
二、微生物的選擇培養(yǎng)
1.分解尿素的細(xì)菌的分離
分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶，該酶能催化尿素分解產(chǎn)生
，以此作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。要將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)思路是
。
NH3
培養(yǎng)基中除了含有細(xì)菌必需的碳源、
水、無(wú)機(jī)鹽外，還要含有唯一氮源尿素
2．稀釋涂布平板法分離分解尿素的細(xì)菌
土壤中細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物，必須要對(duì)土樣進(jìn)行_________________，然后再將菌液_______到制備好的____________________，操作過(guò)程如下：
充分稀釋
涂布
選擇培養(yǎng)基上
操作步驟：
采集土樣
→
將10
g土樣加入盛有90
mL____________的錐形瓶中，充分搖勻。取1
mL上清液加入盛有_____
mL無(wú)菌水的試管中，依次______________。
無(wú)菌水
等比稀釋
9
→
取_______mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面
0.1
將涂布器浸在盛有酒精的
燒杯中
→
→
將涂布器放在_________上灼燒，待酒精燃盡、涂布器_________后，
再進(jìn)行涂布
火焰
冷卻
→
用涂布器將菌液均勻地涂布在________________表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)_______________，使涂布均勻
涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板________，放入____________
℃的恒溫箱中培養(yǎng)1～2
d。
培養(yǎng)基
培養(yǎng)皿
→
倒置
30～37
土壤中分解尿素的分離與計(jì)數(shù)視頻
(1)結(jié)合對(duì)照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。
提示：對(duì)照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有被雜菌污染。對(duì)照組無(wú)菌落，實(shí)驗(yàn)組有菌落。
思考與討論
(2)你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30—300的平板？在這一稀釋度下，是否至少有2個(gè)平板的菌落數(shù)接近？
提示：通常選擇一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，一般選用菌落數(shù)為30—300的平板。
稀釋103倍
稀釋104倍
稀釋105倍
如何計(jì)數(shù)？
(4)每克樣品中的菌株數(shù)＝某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)÷涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積×稀釋倍數(shù)。
用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物的方法
(1)稀釋涂布平板操作要求：按照平行重復(fù)原則，每一稀釋度的菌液涂布3個(gè)或3個(gè)以上的平板。
(2)計(jì)數(shù)的時(shí)機(jī)：當(dāng)各平板上菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)進(jìn)行計(jì)數(shù)。
(3)選擇可用于計(jì)數(shù)的平板：選擇菌落數(shù)在30～300的平板(相同稀釋度的平板均符合該特點(diǎn))進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后取平均值。
是否還有其他微生物的數(shù)量測(cè)定方法？
三、微生物的數(shù)量測(cè)定
稀釋涂布平板法
顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
原理
方法
注意問(wèn)題
當(dāng)樣品的___________足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的____________。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為_(kāi)____________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目______。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。
稀釋度
一個(gè)活菌
30～300
少
利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)。
統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。
血細(xì)胞計(jì)數(shù)板(血球計(jì)數(shù)板)
思考與討論
1．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是否是活菌的實(shí)際數(shù)目？
2．分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的pH發(fā)生什么變化？
3．在用涂布器涂布平板時(shí)，為了操作方便是否可以完全打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋？
提示：由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。
提示：尿素分解菌將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使培養(yǎng)基的pH升高。
提示：為了防止雜菌污染，不能完全打開(kāi)皿蓋。
微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，但是一般使用計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。
拓展：微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定方法：
比較兩種微生物計(jì)數(shù)的方法
項(xiàng)目
直接計(jì)數(shù)法
間接計(jì)數(shù)法
原理
利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量
當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌
主要用具
顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板
培養(yǎng)基
計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)
菌體本身
培養(yǎng)基上菌落數(shù)
優(yōu)點(diǎn)
計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單
計(jì)數(shù)的是活菌
缺點(diǎn)
死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)
操作較復(fù)雜，有一定誤差
計(jì)算公式
每毫升原液含菌數(shù)＝每小格平均菌體數(shù)×400×10
000×稀釋倍數(shù)
每毫升原液含菌數(shù)＝培養(yǎng)基上平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)÷涂布液體積
到社會(huì)中去
活菌計(jì)數(shù)技術(shù)廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生、水源污染度的檢驗(yàn)和土壤含菌量的測(cè)定等方面。如果你感興趣，可以從下列項(xiàng)目中選做一個(gè)，并走訪相關(guān)部門或企業(yè)，了解他們是如何進(jìn)行檢測(cè)的。
1.空氣中微生物總數(shù)的檢測(cè)
提示：沉淀法（1）將肉膏瓊脂培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基、高氏培養(yǎng)基融化后，各倒4個(gè)平板。（2）分別取兩個(gè)上述三種培養(yǎng)基平板，在空氣中暴露5min，另外2個(gè)平板用于檢查無(wú)菌空氣管道排氣口的無(wú)菌情況。
（3）將上述平板置28℃培養(yǎng)48h后計(jì)算其菌落數(shù)，并觀察菌落形態(tài)、顏色，將結(jié)果列表
菌落數(shù)
細(xì)菌
霉菌
放線菌
實(shí)驗(yàn)室
無(wú)菌空氣
2.水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)
提示：1.取樣；2.樣品稀釋；3.微生物培養(yǎng)與觀察；4.菌落計(jì)數(shù)；5.實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
3.牛奶中細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
提示：1.取牛奶樣液；2.稀釋（根據(jù)牛奶中菌長(zhǎng)得多少而定）；3.涂布平板；4.菌落計(jì)數(shù)；5.實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
四、練習(xí)與鞏固
1．用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是(　　)
A．涂布了1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230
B．涂布了2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238
C．涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163
D．涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是212、240和250，取平均值234
提示：在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，A、B錯(cuò)誤。C項(xiàng)雖然涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與其他的相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，此時(shí)，不能簡(jiǎn)單地用3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值來(lái)求平均值，C錯(cuò)誤。
D
2．下圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”
實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析，下列敘述正確的是(
　　)
A．3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為103倍
B．4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)恰好為5號(hào)試管的10倍
C．5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×109個(gè)
D．該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要多
提示：3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為104倍，A項(xiàng)錯(cuò)誤；4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)不一定恰好為5號(hào)試管的10倍，B項(xiàng)錯(cuò)誤；5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為(168＋175＋167)
÷3÷0.1×106＝1.7×109（個(gè)），C項(xiàng)正確；在固體培養(yǎng)基上可能存在兩個(gè)或多個(gè)菌體形成一個(gè)菌落的情況，得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目少，D項(xiàng)錯(cuò)誤。
C
五、小總結(jié)
https://www.21cnjy.com/help/help_extract.php

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