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無菌操作技術及注意事項
1、玻璃器皿的消毒和清潔
⑴新購玻璃器皿的處理
新購玻璃器皿應用熱肥皂水洗刷，流水沖洗，再用1％～2%鹽酸溶液浸泡，以除去游離堿，再用水沖洗。對容量較大的器皿如試劑瓶、燒瓶或量具等，經清水洗凈后應注入濃鹽酸少許，慢慢轉動，使鹽酸布滿容器內壁數分鐘后傾出鹽酸，再用水沖洗。
⑵污染玻璃器皿的處理
①一般試管或容器可用3％煤酚皂溶液或5％石炭酸浸泡，再煮沸30分鐘，或在3％～5％漂白粉澄清液內4小時，有的亦可用肥皂或合成洗滌劑洗刷使盡量產生泡沫，然后用清水沖洗至無肥皂為止。最后用少量蒸餾水沖洗。
②細菌培養用的試管和培養皿可先行集中，用1kg/cm2高壓滅菌15～30分鐘，再用熱水洗滌后，用肥皂洗刷，流水沖洗。
③吸管使用后應集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小時，逐支用流水反復沖洗，再用蒸餾水沖洗。
④油蠟沾污的器皿，應單獨滅菌洗滌，先將沾有油污的物質棄去，倒置于吸水紙上，100℃烘干半小時，再用堿水煮沸，肥皂洗滌，流水沖洗。必要時可用二甲苯或汽油去油污。
⑤染料沾污的器皿，可先用水沖洗，后用清潔或稀鹽酸洗脫染料，再用清水沖洗。一般染色劑呈堿性，所以不宜用肥皂的堿水洗滌。
⑥玻片可置于3％煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水沖洗，再用肥皂或弱堿性煮沸，自然冷卻后，流水沖洗。被結核桿菌污染或不易洗凈的玻片，可置于清潔液內浸泡后再沖洗。
2、無菌器材和液體的準備
將玻璃器具中的培養皿、培養瓶、試管、吸管等按上述方法洗凈烘干后，用一潔凈紙包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，裝入干凈的鋁盒或鐵盒中，于120℃的干燥箱中干燥滅菌２小時，取出備用。
對于手術器械 、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液，則采用高壓蒸氣滅菌法，即在15磅的條件下，加熱20分鐘。而對于MEM培養液、小牛血清和消化液等需用G5或G6濾器負壓抽濾后使用。
3、無菌操作過程
在無菌操作過程中，最重要的是要保持工作區的無菌、清潔。因此，在操作前20～30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈，并認真洗手和消毒。在操作時，嚴禁喧嘩，嚴禁用手直接拿無菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的止血鉗、鑷子等。培養瓶應在超凈臺內操作，并且在開啟和加蓋瓶塞時需反復用酒精燈燒。對于吸管應先用手拿后1/3處，戴上膠皮乳頭，并用酒精燈燒烤之后再吸液體。
4、常用清潔液的配制法
⑴重鉻酸鉀清潔液：
可根據不同需要，選用下列的任何一種濃度。配 方
1
2
3
4
5
重鉻酸鉀（g）
80
60
200
60
100
粗濃硫酸（ml）
100
90
500
460
800
水（ml）
1000
750
500
300
200
k.s.5.u

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