資源簡(jiǎn)介

《生物技術(shù)實(shí)踐》（選修1）高考復(fù)習(xí)資料
一、微生物的利用
1、考試要求
本部分“實(shí)驗(yàn)2：分離以尿素為氮源的微生物”與“實(shí)驗(yàn)3：觀察土壤中能水解纖維素的微生物”不作要求，只要求1“實(shí)驗(yàn)1：大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”。
基本要求
1.進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)增，利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作
2.進(jìn)行大腸桿菌的分離，用固體平面培養(yǎng)基本進(jìn)行細(xì)菌的劃線培養(yǎng)。

發(fā)展要求
說明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和實(shí)驗(yàn)原理。
說明

2、基本內(nèi)容
⑴培養(yǎng)基的種類,很多劃分標(biāo)準(zhǔn)-----物理性質(zhì)：固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基 和液體培養(yǎng)基（加入瓊脂多
少）。液體培養(yǎng)基用于擴(kuò)大培養(yǎng)和工業(yè)生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基用于菌種分離,鑒定,計(jì)數(shù)（菌落數(shù)量）。
培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括 水 、 無機(jī)鹽 、 碳源 、 氮源 、生長(zhǎng)因子等。主要注意碳源問題，按照微生物的同化作用類型是自養(yǎng)還是異養(yǎng)，碳源不同，自養(yǎng)微生物為無機(jī)碳源如硝化細(xì)菌是二氧化碳或碳酸鹽，異養(yǎng)微生物為有機(jī)碳源如大腸桿菌是葡萄糖等有機(jī)物（要會(huì)判斷）。
⑵常見微生物類群：原核生物{細(xì)菌（如大腸桿菌---二分裂.革蘭氏陰性、異養(yǎng)兼性厭氧性腸道桿菌）、藍(lán)藻、支原體、衣原體、放線菌等}、原生生物（草履蟲、變形蟲等）、真菌（酵母菌---出芽生殖.異養(yǎng)兼性厭氧性微生物、霉菌、食用菌）、病毒等。
⑶無菌技術(shù)：對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒 ；將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近旁進(jìn)行；避免已滅菌處理的材料用具與 周圍物品相接觸。
比較項(xiàng)
理化因素的作用強(qiáng)度
消滅微生物的數(shù)量
芽孢和孢子能否被消滅
消毒
較為溫和
部分生活狀態(tài)的微生物
不能
滅菌
強(qiáng)烈
全部微生物
能
滅菌方法：
①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；
②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱 ；
③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋 。
④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈 。
⑷培養(yǎng)基的配制原則：目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。pH要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。
⑸實(shí)驗(yàn)操作步驟
①計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→分裝→加棉塞→滅菌→倒平板（形成斜面是為增大接種面積） （均為培養(yǎng)基的處理）
②接種
微生物接種的最常用方法是平板劃線法和稀釋涂布法。
平板劃線法（方法簡(jiǎn)單，考試的主要考查點(diǎn)）：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面（也是分離純化的方法）。 在第1次劃線后都從上次劃線末端開始的目的是獲得由單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。稀釋涂布平板法（操作復(fù)雜，單菌落更易分開）：將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，并將不同稀釋度菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，即可獲得單個(gè)細(xì)菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。
③培養(yǎng)：平板倒置放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)是為了使水分蒸發(fā)形成的水蒸氣凝結(jié)成的水滴滴留在蓋上，同時(shí)防止水滴入培養(yǎng)基并擴(kuò)散開，已形成的菌落隨水?dāng)U散，相互影響。
④觀察結(jié)果（菌落數(shù)量、特征等）并分析、評(píng)價(jià)
例(高考試題：2007寧夏理綜)32．生物選考題A
某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問題。
（1）培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了____和______。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是_____和______。
（2）對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是_______。
（3）為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于______中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種______作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
（4）培養(yǎng)20小時(shí)后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有_____種細(xì)菌。一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越_______。
答案：（1）氮源（碳源不作要求） 碳源、無機(jī)鹽、水（2）高壓蒸汽滅菌（3）恒溫培養(yǎng)箱 無菌水（4）多；高
練習(xí)：卓越p133例3 ，p135 11 ， p136 12、創(chuàng)新探究 ， p137 3、4、5、6
二、生物技術(shù)在食品加工中的作用
本部分“實(shí)驗(yàn)7：用蒸氣蒸餾法從芳香植物中提取精油”不作要求；“實(shí)驗(yàn)9：腐乳的制作”有條件的學(xué)校可選做，只要求學(xué)生做2個(gè)實(shí)驗(yàn)，即“實(shí)驗(yàn)8”和“實(shí)驗(yàn)10”。
1、實(shí)驗(yàn)8 果酒及果醋的制作
基本要求
1.制作葡萄酒和果酒
2.制作果醋
發(fā)展要求
設(shè)計(jì)并安裝簡(jiǎn)單的生產(chǎn)果酒及生產(chǎn)果醋的裝置
說明

果酒制作原理
（1）利用的微生物是酵母菌，其異化作用類型是兼性厭氧型，明確酵母菌發(fā)酵的反應(yīng)式：
①有氧條件：C6H12O6+6O2+6H2O12H2O+6CO2+能量
②無氧條件：C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量
（2）影響酒精發(fā)酵的主要環(huán)境條件有溫度、氧氣和pH。
為了防止雜菌污染，出現(xiàn)異味，影響質(zhì)量，應(yīng)將用具清洗干凈，并用高錳酸鉀溶液浸泡材料。為了提高制作速度，促進(jìn)酒精發(fā)酵，在發(fā)酵前，必須接種酵母，并加入少量蔗糖。在果酒發(fā)酵過程中，應(yīng)在瓶口安裝裝有水的彎曲玻璃管，既可防止氧氣與雜菌進(jìn)入，也可以使瓶中產(chǎn)生的CO2氣體出去，以減少發(fā)酵瓶中的壓力。
①酒精發(fā)酵是一般將溫度控制在18～25℃范圍內(nèi)，在20℃時(shí)最適宜。②酒精發(fā)酵過程中，要保持缺氧、酸性環(huán)境。
酒精發(fā)酵過程中往往“先通氣后密封”？“通氣”的目的是使酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖。“密封”的目的是使酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精。在酒精發(fā)酵過程中，每隔一段時(shí)間（12h）擰松瓶蓋或打開排氣口，是為了防止在發(fā)酵過程中產(chǎn)生CO2 ，使瓶?jī)?nèi)氣壓過高引起爆裂。排氣口膠管長(zhǎng)而彎曲的作用是防止空氣中雜菌感。
⑶酒精發(fā)酵后是否有究竟產(chǎn)生，可用酸性條件重鉻酸鉀來檢驗(yàn)（呈灰綠色）。
果醋制作原理
利用的微生物是醋酸菌 ，為異養(yǎng)需氧型。在氧氣和糖源都充足時(shí)，降糖分解形成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)可將乙醇轉(zhuǎn)變成乙醛，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)變成醋酸。明確醋酸發(fā)酵的反應(yīng)式。 C2H5OH+O2H2O+CH3COOH
醋酸發(fā)酵需要適宜溫度、pH 和氧氣。
⑶在醋酸發(fā)酵過程中，特別需要注意要從充氣口持續(xù)向發(fā)酵液中補(bǔ)充氧氣（無菌空氣）。
安裝果醋發(fā)酵裝置時(shí)，要注意連接口的密封性，以免被雜菌感染，同時(shí)要注意進(jìn)口處與出口處的流速，以保證醋酸的充分氧化。在醋酸的發(fā)酵過程中，要注意經(jīng)常用pH試紙檢測(cè)流出液中的pH值，以監(jiān)控發(fā)酵過程的進(jìn)行。
(高考試題：2007山東理綜)34.
乙醇等"綠色能源"的開發(fā)備受世界關(guān)注。利用玉米秸稈生產(chǎn)燃料酒精的大致流程為：
（1）玉米秸稈預(yù)處理后，因該選用____酶進(jìn)行水解，使之轉(zhuǎn)化為發(fā)酵所需的葡萄糖。
（2）從以下哪些微生物中可以提取上述酶？________（多選）
A.釀制果醋的醋酸菌 B.生長(zhǎng)在腐木上的霉菌
C.制作酸奶的乳酸菌 D.生產(chǎn)味精的谷氨酸棒狀桿菌
E.反芻動(dòng)物瘤胃中生存的某些微生物
（3）若從土壤中分離生產(chǎn)這種酶的微生物，所需要的培養(yǎng)基為______（按功能分），培養(yǎng)基中的碳源為___________ 。
（4）從生物體提取出的酶首先要檢測(cè) _______ ，以便更好地將酶用于生產(chǎn)實(shí)踐。在生產(chǎn)糖液的過程中，為了使酶能夠反復(fù)利用，可采用___________技術(shù)。
（5）發(fā)酵階段需要的菌種是_________，生產(chǎn)酒精是要控制的必要條件是________ 。
【答案】（1）纖維素（酶）（2）B、E (3)選擇培養(yǎng)基；纖維素（4）酶的活性 （5）酵母菌；無氧（密封、密閉）
練習(xí)：卓越P139 7
實(shí)驗(yàn)10 泡菜的腌制和亞硝酸的測(cè)定
基本要求
1.進(jìn)行泡菜的腌制。
2.測(cè)定泡菜中亞硝酸的含量。
發(fā)展要求
討論相關(guān)的食品安全問題
說明

⑴制作泡菜所用微生物是乳酸菌 ，其代謝類型是異養(yǎng)厭氧 型。在無氧條件下，降糖分解為乳酸 。
反應(yīng)式為：C6H12O62C3H6O3+能量 含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。
腌制時(shí)要控制腌制的時(shí)間 、溫度和食鹽的用量。
⑵亞硝酸鹽在食品生產(chǎn)中常用作食品添加劑。國家規(guī)定肉制品中不超過30mg/kg，醬腌菜中不超過20mg/kg，嬰兒奶粉中不超過2mg/kg。亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，但在適宜pH 、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。日常生活中不宜食用放置時(shí)間過長(zhǎng)和變質(zhì)蔬菜的原因是亞硝酸鹽含量較高。
在“泡菜的腌制和亞硝酸的測(cè)定”實(shí)驗(yàn)中，首先應(yīng)將要腌制的菜與所需用具洗凈，以防止腌制過程中出現(xiàn)腐爛現(xiàn)象。將菜放入泡菜壇中時(shí)，一定要用水將壇口封好，形成一個(gè)缺氧的環(huán)境，使乳酸菌能夠生存、繁殖并發(fā)酵。一般腌制一周左右即可開壇食用，此時(shí)可進(jìn)行亞硝酸的測(cè)定。亞硝酸的測(cè)定可用光電比色法定量。測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與 N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。(以坐標(biāo)曲線表示或表格表示)
一般在腌制 10 天后亞硝酸鹽含量開始降低，故在10天之后食用最好
亞硝酸鹽含量 組別
時(shí)間
1號(hào)壇
2號(hào)壇
3號(hào)壇
封壇前
封壇后1
封壇后2
封壇后3......
例：
1、某同學(xué)把甘藍(lán)切絲后制作泡菜，并置于不同溫度下經(jīng)過3天后檢查生成的乳酸量，
結(jié)果如下表：
溫度（℃）
16
26
31
35
43
乳酸含量
0.81%
1.04%
1.20%
1.12%
0.95%
從這個(gè)資料看，你能得出什么結(jié)論？
（2）在泡菜制作時(shí)，乳酸含量大致在0.8%左右時(shí)風(fēng)味最好，此時(shí)維生素C的保存率也較高，結(jié)合以上材料，你在制作泡菜時(shí)，應(yīng)注意什么？
2、某同學(xué)在泡菜腌制過程中每隔3—4天測(cè)一次亞硝酸鹽的含量，其結(jié)果如下表：
泡菜腌制過程中亞硝酸鹽的含量變化（mg / kg ）
腌制天數(shù)
1號(hào)壇
2號(hào)壇
3號(hào)壇
封壇前
0.15
0.15
0.15
4天
0.60
0.20
0.80
7天
0.20
0.10
0.60
10天
0.10
0.05
0.20
14天
0.10
0.05
0.20
（1）在圖中畫出1號(hào)壇泡菜腌制過程中亞硝酸鹽的含量變化圖。
mg / kg
1.20
0.90
0.60
0.30

0 2 4 6 8 10 12 14 時(shí)間（天）
（2）結(jié)合曲線和表中數(shù)據(jù)分析亞硝酸鹽含量變化的原因。
（3）3個(gè)泡菜壇中亞硝酸鹽含量為何有差別？原因是什么？在泡菜腌制過程中如何減少亞硝酸鹽的含量？
答案：1、（1）溫度會(huì)影響乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生乳酸，30℃左右乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生乳酸的效率最高
（2）不同溫度下乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生乳酸的量不同，應(yīng)在16℃下發(fā)酵制作泡菜，此時(shí)泡菜的乳酸含量適中，風(fēng)味最好。
2、（1） mg / kg
1.20
0.90
0.60
0.30
0 2 4 6 8 10 12 14 時(shí)間（天）
（2）3個(gè)泡菜壇中亞硝酸鹽含量變化的絕對(duì)數(shù)量雖然不同，但整體的變化趨勢(shì)基本相同。在制作的第4天，3個(gè)泡菜壇中亞硝酸鹽含量都最高，第10 天開始有明顯下降。
這可能是由于泡菜在開始腌制時(shí)，壇內(nèi)環(huán)境有利于某些細(xì)菌的繁殖（包括一些硝酸鹽還原菌），這些細(xì)菌可以促進(jìn)硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。但隨著腌制時(shí)間的延長(zhǎng)，乳酸細(xì)菌也大量繁殖，對(duì)硝酸鹽還原菌產(chǎn)生一定的抑制作用，使其生長(zhǎng)繁殖受到影響，造成泡菜中亞硝酸鹽的含量又有所下降。
（3）3個(gè)泡菜壇中亞硝酸鹽含量最少的是2號(hào)壇，最多的3號(hào)壇，3號(hào)壇可能在制作過程中被雜菌污染。在泡菜腌制過程中要注意控制腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量。溫度過高、食鹽用量不足10％、腌制時(shí)間過短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降。
酶的應(yīng)用
實(shí)驗(yàn)4 果汁中的果膠和果膠酶
基本要求
1.得出制作果汁的最佳條件。
2.檢測(cè)果膠酶的活性，觀察果膠酶對(duì)果汁形成的作用。

發(fā)展要求
收集果膠酶在其他方面利用的資料。
說明


果膠是植物細(xì)胞壁和胞間層的主要組成成分之一。在果汁加工中，果膠的存在易導(dǎo)致果汁出汁率低，果汁渾濁。果膠不溶于乙醇，這是鑒別果膠的一種簡(jiǎn)易方法。果膠酶分解果膠的作用是：①瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層，使榨取果汁更容易，②把果膠分解為可溶性的半乳糖醛酸，使渾濁的果汁變得澄清，因此可以解決果汁加工中出現(xiàn)的問題。食品工業(yè)生產(chǎn)中最常用的果膠酶是通過霉菌發(fā)酵產(chǎn)生。
影響果膠酶活性的因素有：溫度 、 PH 、激活劑和抑制劑等。
探究一：溫度和PH對(duì)果膠酶的活性的影響
該實(shí)驗(yàn)與必修I中探究“影響酶活性的條件”實(shí)驗(yàn)有何不同？前者屬于是定量分析實(shí)驗(yàn)，后者屬于定性分析實(shí)驗(yàn)。
變量設(shè)計(jì)與控制：
①你確定的溫度梯度（或pH梯度）為 30-70℃（或5-9）。
②實(shí)驗(yàn)的自變量是溫度（或pH） ，控制自變量的方法是利用恒溫水浴鍋（或滴加酸堿等）。
③實(shí)驗(yàn)的因變量是酶的活性，檢測(cè)因變量的方法是測(cè)定相同時(shí)間內(nèi)果汁的產(chǎn)出量或澄清度也可以相同產(chǎn)出或澄清所用的時(shí)間。
果汁與果膠酶在混合之前，應(yīng)分裝在不同試管中用同一恒溫處理，保證果汁與果膠酶混合前后的溫度相同，避免因混合導(dǎo)致溫度變化而影響果膠酶活性。不同的溫度設(shè)置之間可以相互對(duì)照。
探究二：果膠酶的蕞適用量
①你確定的果膠酶的用量為 1-9mg。
②實(shí)驗(yàn)的自變量是果膠酶的用量 ，控制自變量的方法是配成等體積不同濃度的果膠酶。
③實(shí)驗(yàn)的因變量是分解果膠的速度，檢測(cè)因變量的方法是測(cè)定相同時(shí)間內(nèi)果汁的產(chǎn)出量。
練習(xí)：卓越P135 10(8)
(探究溫度和PH對(duì)果膠酶的活性的影響)
(探究果膠酶的蕞適用量)
2、實(shí)驗(yàn)5 加酶洗衣粉的使用條件和效果
基本要求
1.觀察加酶洗衣粉在洗滌中的效果。
2.得出加酶洗衣粉的最佳使用條件。

發(fā)展要求
研究并試驗(yàn)將有油漬、汗?jié)n、血漬的衣物洗凈的方法
說明


普通洗衣粉的化學(xué)成分有：表面活性劑【主要是陰離子表面活性劑（洗衣粉主要成分），有的還有非離子型表面活性劑，優(yōu)先吸附在各種界面上，降低表面張力，改變界面狀態(tài)，洗滌時(shí)去污作用】、水軟化劑、堿劑、漂白粉等成分，有的洗衣粉中還含有增白劑、香精和色素，以及填充劑等。加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉,目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶 、脂肪酶 、淀粉酶 、纖維素酶 。其中應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。
酶具有高效性，能迅速將血漬、奶漬等含有的大分子蛋白質(zhì)分解成可溶性小分子肽和氨基酸。
酶不能直接添加到洗衣粉中，因?yàn)橄匆路壑械谋砻婊钚晕镔|(zhì)會(huì)降低酶的活性。將基因工程生產(chǎn)出的酶用特殊水溶性物質(zhì)包裹起來，與洗衣粉的其它成分隔離開來。但這不屬于酶固定化技術(shù)。影響酶活性的因素有溫度、酸堿度和表面活性劑 。
探究一：比較普通洗衣粉和加酶洗衣粉的洗滌效果
①實(shí)驗(yàn)的自變量是洗衣粉的種類 。
②控制無關(guān)變量相同：水溫、水量、水質(zhì)、洗衣粉的用量、衣物的質(zhì)料、大小及侵泡時(shí)間、污漬種類與面積等。
③實(shí)驗(yàn)的因變量是普通洗衣粉和加酶洗衣粉的洗滌效果，檢測(cè)因變量的方法是相同時(shí)間內(nèi)衣物的干凈程度或是衣物完全干凈所用的時(shí)間。
普通洗衣粉
加酶洗衣粉
相同時(shí)間內(nèi)衣物的去污面積或完全去污所用的時(shí)間
探究二：比較不同溫度下加酶洗衣粉的洗滌效果
①實(shí)驗(yàn)的自變量是不同的溫度 。
②控制無關(guān)變量相同：洗衣粉種類、水量、水質(zhì)、洗衣粉的用量、衣物的質(zhì)料、大小及侵泡時(shí)間、污漬種類與面積等。
③實(shí)驗(yàn)的因變量是不同溫度下加酶洗衣粉的洗滌效果，檢測(cè)因變量的方法是相同時(shí)間內(nèi)衣物的干凈程度或是衣物完全干凈所用的時(shí)間。
探究三：不同種類的洗衣粉對(duì)同一污漬或不同污漬洗滌效果
污染物
蛋白酶洗衣粉
復(fù)合酶洗衣粉
普通洗衣粉
油漬
血漬
奶漬
果汁漬
練習(xí)：卓越P135 10(9) P136 13 P137 2
3、實(shí)驗(yàn)6α－淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè)
基本要求
1.制作固定化α－淀粉酶
2.進(jìn)行淀粉水解的測(cè)定
發(fā)展要求
通過此實(shí)驗(yàn)探討固定化酶的應(yīng)用價(jià)值
說明

固定化酶是將水溶性的酶用物理的或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之成為不溶性于水而又有酶活性的制劑，同時(shí)又可以重復(fù)利用。常用吸附法和包埋法。
檢測(cè)方法：如一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過固定化淀粉酶柱后，可以用淀粉指示劑溶液（碘液）測(cè)試，若流出物呈紅色即表明淀粉水解成糊精。
淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)
本部分“實(shí)驗(yàn)12：乳酸脫氫酶同工酶的分離”與“實(shí)驗(yàn)13：DNA片段的PCR擴(kuò)增”不作要求；只要求學(xué)生做1個(gè)實(shí)驗(yàn)，即“實(shí)驗(yàn)11：植物的組織培養(yǎng)”。
實(shí)驗(yàn)11 植物的組織培養(yǎng)
基本要求
1.進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)
2.嘗試植物激素的應(yīng)用
發(fā)展要求

說明

1、原理：植物細(xì)胞的全能性
2、基本過程：
3、 影響植物組織培養(yǎng)的條件：
材料：植物的種類、材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。
營養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni、I、Co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。
生長(zhǎng)素／ 細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果
比值高時(shí)
促根分化，
抑芽形成
比值低時(shí)
促芽分化，
抑根形成
比值適中
促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)
激素：在培養(yǎng)基中需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。
使用順序
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
先生長(zhǎng)素，
后細(xì)胞分裂素
有利于分裂但不分化
先細(xì)胞分裂素，
后生長(zhǎng)素
細(xì)胞既分裂也分化
同時(shí)使用
分化頻率提高



環(huán)境條件：PH、溫度、光等環(huán)境條件。
操作流程
配制MS固體培養(yǎng)基：配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液。使用時(shí)根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)，計(jì)算用量，并加蒸餾水稀釋。配制培養(yǎng)基：應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1000毫升。在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。滅菌：采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。MS培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？與肉湯培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基有哪些特點(diǎn)？大量元素和微量元素提供植物細(xì)胞所必需的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，維持細(xì)胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)。
外植體的消毒
接種：接種過程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上，每個(gè)錐形瓶接種7～8個(gè)外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無菌操作。
培養(yǎng)：應(yīng)該放在無菌箱中進(jìn)行，并定期進(jìn)行消毒，保持適宜的溫度和光照
移栽：栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。
栽培
外植體在培養(yǎng)過程中可能會(huì)被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。

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