資源簡介

中小學教育資源及組卷應用平臺
高考沖刺押題預測 發酵工程
一．選擇題（共16小題）
1．（2024秋 順義區期末）中國是釀酒歷史最古老的國家之一，家釀葡萄酒和工業化生產啤酒的過程均需要（　　）
A．利用醋酸菌無氧呼吸的原理
B．接種人工選育的單一菌種
C．為發酵過程提供適宜的溫度
D．對發酵產物進行分離和提純
2．（2024 鄒城市校級模擬）藍莓果實的主要抗氧化活性成分為花色苷和多酚類物質，具有保護眼睛、抗氧化、消炎、增強記憶、增強免疫和抗癌等多種作用，因此利用藍莓釀造的藍莓酒具有較好的保健功能。釀造藍莓酒的工藝流程為新鮮藍莓→榨汁→接種→發酵→過濾→藍莓酒→儲存。下列敘述錯誤的是（　　）
A．藍莓酒發酵過程中起主要作用的微生物是酵母菌
B．對藍莓汁進行糖度調整可改變藍莓酒的酒精度
C．接種后需要持續通入無菌空氣以加快發酵進程
D．若利用酸性重鉻酸鉀檢測酒精度，需先對藍莓酒進行脫色處理
3．（2024 六合區校級二模）將大腸桿菌培養在含有葡萄糖培養液中，在時間0時，將含大腸桿菌的培養液均分為四組，處理見下表。混勻處理6小時后，將經不同處理的培養液分別涂布在四組不同的平板上，每組涂12個，在37℃下培養24小時，計數每組平板中菌落的平均數。結果如下表所示：下列有關說法，正確的是（　　）
組別 組1 組2 組3 組4
培養液處理 只有葡萄糖 葡萄糖+物質A 葡萄糖+物質B 葡萄糖+物質A+物質B
平板的菌落平均數 長滿菌落 2±2 4±1 23±3
A．研究物質A和B對大腸桿菌的共同作用時，組1是對照組，2、3、4組為實驗組
B．物質A和物質B均能抑制大腸桿菌的生長，且物質B的抑制作用強于物質A
C．物質A與物質B同時存在時，有些原來不能存活的大腸桿菌存活下來
D．可在培養液（基）中加入酚紅試劑鑒別大腸桿菌
4．（2024 河南模擬）黃豆醬是人們喜愛的傳統美食，早在春秋時期就有制作方法的相關記載。它以黃豆為主要原料，經米曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物發酵而成。勞動人民在制作過程中不斷改進發酵技術，總結出以下經驗。下列敘述錯誤的是（　　）
①選用具有高蛋白酶活性的米曲霉
②用蒸煮后的大豆與米曲霉混合堆積
③將初步發酵后含米曲霉等微生物的曲料攤薄，并適當通風
④在裝壇時，添加適量食鹽
⑤發酵過程中，需保持發酵壇密封
⑥發酵過程中，需定期攪拌
A．①和④對黃豆醬風味的形成起重要作用，利于提升品質
B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高發酵效率
C．③有利于米曲霉和酵母菌進行有氧呼吸并快速大量增殖
D．⑤中乳酸菌主要集中于發酵壇上部而米曲霉集中于下部
5．（2024 安順模擬）刺梨是貴州主要特產水果，富含超氧化物歧化酶和大量的維生素C、花青素等，可用于制作刺梨果酒和刺梨果醋。利用發酵工程生產刺梨果酒和果醋的主要流程如圖所示。下列敘述錯誤的是（　　）
A．培養基和發酵設備都必須經過嚴格的滅菌
B．發酵Ⅰ和發酵Ⅱ利用的微生物代謝類型不同
C．利用刺梨表面的微生物即可進行發酵Ⅰ和Ⅱ過程
D．發酵的不同時期要嚴格控制發酵溫度、pH和溶氧量等
6．（2023秋 潁州區校級期末）我國是最早生產醬油的國家。制曲是醬油生產的重要工序之一，其主要目的是給黑曲霉創造最佳條件，使其生長繁殖并分泌和積累相應的酶，制曲設備示意圖如圖。下列敘述錯誤的是（　　）
A．黑曲霉不僅可以用于生產醬油，還可以用于生產檸檬酸
B．酶及微生物的種類和數量是鑒定成曲質量的指標
C．將曲料攤鋪在簾架上有利于控制微生物生長的溫度
D．該制曲過程主要的發酵產物是葡萄糖、乙醇、乳酸等物質
7．（2023秋 潁州區校級期末）無菌操作在微生物培養、植物組織培養和動物細胞培養中都至關重要。下列敘述正確的是（　　）
A．生物技術實驗中，所有器皿、培養基及生物材料均需進行滅菌處理
B．酒精能使細胞中的蛋白質變性失活，95%的酒精用來消毒效果最好
C．配置動物細胞培養基時，加入抗生素即可達到無菌培養的目的
D．易分解的活性物質過濾除菌后，在無菌條件下加入滅菌的培養基中
8．（2023秋 亭湖區校級期末）下列相關說法中，錯誤的是（　　）
A．利用發酵技術，在鮮奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品
B．在腐乳制作過程中，毛霉將蛋白質分解產生小分子的肽和氨基酸
C．乙醇既是果酒發酵的產物，也是果醋發酵的底物，又可以抑制雜菌繁殖
D．在啤酒生產的主發酵階段和后發酵階段，需將溫度保持在酵母菌的最適生長溫度
9．（2023秋 延邊州期末）傳統發酵食品的制作中，所對應產物的產生場所，正確的是（　　）
A．制作果酒時，酵母菌產生H2O的場所是線粒體基質
B．制作泡菜時，乳酸菌產生乳酸的場所是細胞質基質
C．制作泡菜時，乳酸菌產生CO2的場所是細胞質基質
D．制作果醋時，醋酸桿菌產生CO2的場所是線粒體基質
10．（2023秋 濟寧期末）我國早在9000年前就可以運用發酵技術獲得產品，為生活增添豐富的色彩。下列說法正確的是（　　）
A．制作果酒時，可通過控制發酵的溫度、發酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒變質的概率
B．利用酵母菌酒精發酵進行傳統釀酒過程中，需一直保持無氧的條件
C．泡菜壇裝八成滿可以防止發酵過程中酵母菌、乳酸菌等產生的CO2使發酵液溢出
D．腐乳鮮美的味道主要由曲霉分解蛋白質產生的小分子肽和氨基酸引起
11．（2023秋 濟寧期末）味精是一種鮮味劑，利用發酵技術生產味精的主要過程為原料→淀粉糖化→通氣發酵→發酵產物提取→味精制造→包裝。下列說法錯誤的是（　　）
A．生產味精需要的谷氨酸棒狀桿菌是需氧型生物
B．淀粉的糖化分解有利于發酵過程的充分進行
C．發酵時需將發酵液的pH調節為中性或弱酸性
D．從發酵液中獲得谷氨酸需要采取提取、分離和純化措施
12．（2024春 郫都區校級期中）發酵工程可實現發酵產品的大規模生產，如圖為發酵工程的基本環節，相關敘述正確的是（　　）
A．①、②可以是誘變育種或基因工程育種
B．③是發酵工程的中心環節
C．產物濃度的檢測必須在發酵結束后進行
D．發酵條件為室溫和近中性的pH等
13．（2024秋 河南月考）科研人員計劃從含多種微生物的白酒大曲中分離篩選出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒釀造。白酒大曲中產酯化酶微生物初步篩選時所用培養基成分與操作步驟如表所示。下列敘述錯誤的是（　　）
培養基成分 牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯會使培養基呈現乳白色，酯化酶可催化乳白色的物質反應，產生透明物質）
操作步驟 將白酒大曲塊粉碎制成菌懸液→利用①______（接種方法）接種后培養→將周邊出現②______的菌落挑出→重新劃線接種至分離純化平板培養基上→多次重復純化至得到不同形態的單菌落→4℃冰箱保存。
A．表中所示培養基中的牛肉膏和蛋白胨可為微生物生長提供氮源
B．篩選產酯化酶的霉菌時，應將培養基在滅菌前調至中性或弱堿性
C．表中①可代表稀釋涂布平板法，②處應填透明圈
D．通過劃線操作可將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面
14．（2024秋 如皋市期中）酵母菌的純培養步驟如圖所示，下列敘述正確的是（　　）
A．步驟①需要在酒精燈火焰旁進行
B．步驟②培養基凝固后將平板倒置，可減緩培養基中水分蒸發，避免過快干裂
C．步驟③接種時，若在平板上劃線4個區，需蘸取酵母菌液4次
D．步驟④培養前需在培養皿皿蓋上做好標記
15．（2024秋 如皋市期中）某生物小組欲利用以下培養基從土壤中分離某種微生物，下列對該實驗的后續操作及結果分析正確的是（　　）
成分 葡萄糖 K2HPO4 K2SO4 NaCl CaCO3 MgSO4 7H2O 蒸餾水 瓊脂粉
含量 10g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 0.2g 1000mL 20g
A．配制好的培養基先分裝到錐形瓶后再進行高壓蒸汽滅菌
B．該培養基滅菌后需冷卻至40℃再進行倒平板操作
C．用無菌水將土樣進行系列稀釋，在最后一次稀釋后進行涂布接種
D．該無氮培養基可用于硝化細菌等固氮菌的分離與計數
16．（2024秋 如皋市期中）關于消毒和滅菌的敘述，錯誤的是（　　）
A．利用微生物寄生于多種細菌體內使細菌裂解，屬于生物消毒
B．利用紫外線消毒前，噴灑消毒液可加強消毒效果
C．對培養基滅菌時，干熱滅菌比濕熱滅菌需要更高的滅菌溫度
D．對涂布器滅菌，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，再放在火焰上灼燒
二．解答題（共4小題）
17．（2024 息縣模擬）（一）某食品公司得到一種高效釀酒的酵母菌菌株，并設計方案獲得發酵產物。
（1）對于酵母菌的培養，比較適合它的培養基為　 　（A．馬鈴薯蔗糖培養基；B．MS培養基；C．LB培養基；D．牛肉湯培養基），除了要選擇合適的培養基成分外，還要考慮培養基中營養物質的　 　。
（2）欲知道這種微生物的繁殖速度，可用涂布分離法或　 　對酵母菌進行計數。對培養到某一時期的培養液制備成10﹣5的稀釋液，每次取0.1mL進行涂布分離，三個培養皿生長的菌落數依次為35個、32個、29個，則培養液中的酵母菌數量為　 　個/mL。在恒溫培養箱培養時，培養皿的放置方式如圖　 　（填“a”或“b”）。
（3）該酵母菌的發酵食品也會因為發酵時間的長短和　 　不同，而形成不同的代謝產物，使發酵食品的風味發生變化。釀酒時會因為發酵液放置過久等原因，導致出現酸味，可能是因為產生了　 　（填物質）。
（二）目前我國新冠病毒核酸檢測的方法是RT﹣PCR，如圖為RT﹣PCR（逆轉錄熒光PCR技術）的原理：PCR過程中探針和引物一起與模板結合，探針兩側分別帶有熒光基團和淬滅基團（抑制熒光發出），當酶催化子鏈延伸至探針處時會水解探針，導致熒光基團與淬滅基團分離而發出熒光（熒光強度與探針水解量成正相關）。
請回答下列問題：
（4）PCR技術與DNA體內復制過程相比，兩者的復制方式都是　 　。RT﹣PCR過程中，需先以RNA為模板合成cDNA，故裝置中需添加　 　酶。除了加酶，解開cDNA雙螺旋的方法還有　 　。
（5）對新冠病毒進行檢測時，探針是一段與　 　相同的核苷酸序列。
（6）通過熒光檢測到熒光信號，則可判定該檢測樣本為　 　性（選填“陽”、“陰”），在相同PCR循環次數條件下，熒光強度與病毒數量呈　 　。
（7）為了在沒有條件進行核酸檢測前及早發現新冠病毒，我國于2022年3月11日推出新冠病毒抗原檢測試劑盒作為核酸檢測的補充措施，該試劑盒的檢測原理是　 　。試劑盒中的探針應采用　 　技術生產。
18．（2023秋 宣威市校級期末）青霉素發酵是高耗氧過程，發酵過程中給微生物持續高效地供氧是保證青霉素持續高產的關鍵。血紅蛋白具有很強的攜帶O2的能力，將其引入青霉菌是提高青霉素產能的思路之一、血紅蛋白不僅存在于人和動物的紅細胞中，某些細菌（如透明顫菌）細胞中也存在。研究人員為了將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌，設計了如圖所示的方案。回答下列問題：
注：某氨基酸缺陷型菌株是指該菌株在缺少該種氨基酸的培養基上會暫停生長
（1）上圖步驟②采用的接種方法是 　 　，步驟③往培養基中添加的某種物質是 　 　。得到的平板中菌落較 　 　（填“大”或“小”）的菌株即為甲硫氨酸營養缺陷型菌株。
（2）溶菌酶屬于免疫系統組成中的 　 　，蝸牛酶是從以植物和真菌為食的蝸牛消化道中提取的酶。處理⑤、⑥所用的酶分別是上述兩種酶中的 　 　。
（3）簡述圖甲步驟⑧從融合細胞中篩選目的菌株的基本思路：　 　。
（4）除了上述方案，請再提出一種將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌的技術手段 　 　。
19．（2023秋 杞縣校級期末）回答下列（一）、（二）小題：
（一）如圖1是谷氨酸發酵裝置示意圖，谷氨酸工業上常用谷氨酸棒狀桿菌在30℃下發酵獲得；如圖2是谷氨酸生產的機理，谷氨酸棒狀桿菌以葡萄糖為底物進行了如下過程。據圖分析，回答下列問題：
（1）如圖1中1、2處是發酵罐夾層中冷凝水的進出口，水在發酵罐夾層流動的作用是 　 　。如圖1中3為攪拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是 　 　。發酵過程中，若谷氨酸積累過量，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而導致該合成途徑中斷，因此提高產物產量的關鍵是改變菌體細胞膜的 　 　。
（2）谷氨酸棒桿菌進行以硫酸二乙酯和紫外線相結合的復合誘變，經選育得到高產突變株LG﹣01．將其接種在含葡萄糖液體培養基中，于30℃下培養48h。搖勻并取培養液稀釋107倍后，向四個培養基分別涂布0.1mL該培養液，四個培養皿生長的菌落依次為31個、2個、35個、33個，則稀釋前菌液的菌體為 　 　個/mL，計算得到的值比實際值 　 　。
（3）發酵結束后可用接種環蘸取發酵液進行 　 　，從而純化谷氨酸棒狀桿菌得到單菌落。此外，此過程需確保培養基的pH環境為 　 　。
（二）甜菜是我國重要的糖料作物之一，為提高甜菜的光合效率和產量。科研工作者構建攜帶SBPase基因（編碼卡爾文循環的關鍵酶）的表達載體，如圖3為重組質粒示意圖，通過基因工程對甜菜進行遺傳改造。回答下列問題：
（4）構建表達載體并導入農桿菌：獲取目的基因后利用PCR技術進行擴增，經 　 　鑒定后，切割凝膠，再將凝膠溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段。然后使用限制性內切核酸酶切割 　 　，將帶有黏性末端的酶切產物純化回收后，用DNA連接酶連接。經過一系列步驟后，再將測序正確的重組質粒導入農桿菌。
（5）獲取抗性植株：將含有重組質粒的農桿菌侵染甜菜葉柄并共培養一段時間后，先將外植體放在含有羧芐霉素和頭孢霉素的培養基中初步培養，目的是 　 　，再轉入含有 　 　的篩選培養基中獲得抗性植株。此過程使用抗生素時需注意 　 　。
（6）為從分子水平上檢測抗性植株是否含有目的基因，對抗性植株進行PCR后檢測，檢測結果如圖4所示。CK+組是選用含 　 　的質粒作為陽性對照。
（7）取陽性無菌苗葉片提取總RNA，將RNA逆轉錄成cDNA，再以cDNA為模板，利用目的基因引物進行PCR以檢測 　 　。在整個過程中，反應體系中的酶有 　 　。
20．（2024 西湖區校級模擬）反硝化細菌是一類能將硝態氮（N）通過一系列中間產物（、NO、N2O）還原為氣態氮（N2）的細菌群，反硝化作用也是產堿過程。反硝化細菌對于解決水體富營養化和亞硝酸鹽對水生動物的毒害，具有十分重要的意義。某課題小組通過采集活性污泥樣品，并從中分離反硝化細菌，研究影響菌株反硝化作用的主要環境因素，為反硝化細菌在養殖廢水處理應用中提供理論指導。反硝化細菌的分離和鑒定流程如下，回答下列問題：
（1）將采集的活性污泥樣品1mL加入到裝有9mL、pH7.2的磷酸鹽緩沖液的l00mL燒杯中，取樣接種到富集培養基中培養，富集培養基的成分有：KNO32g，FeSO40.2g，KH2PO41.0g，MgSO40.5g，NaCl2g，CaCO35g，其中為反硝化細菌提供氮源的是 　 　，富集培養的目的是 　 　。
（2）將富集后的樣品進行梯度稀釋后，使用 　 　（填工具）將樣液均勻涂布在BTB培養基（BTB培養基初始pH＝6.8，BTB是酸堿指示劑，酸性條件下為黃色，中性條件下為綠色，堿性條件下為藍色）上，每個稀釋度下涂布3個培養基是為了 　 　，放在30℃環境中培養2～3天后，挑選周圍顯 　 　色的單菌落在固體培養基上劃線分離，獲得純菌株。
（3）將液體培養基導入大試管中，將杜氏小試管倒立放入大試管中，試管中的氣體排盡，接入純菌株，30℃恒溫培養5～7d，觀察到小管內有氣泡，檢測到N20，即可鑒定純菌株為目的菌。不能依據培養液中硝酸鹽的濃度變低來鑒定目的菌，原因是 　 　。
（4）向幾組等量的滅菌后的反硝化培養基中分別以1%、3%、5%、7%和10%的接種量接入菌株N1，在30℃，120r/min搖床震蕩培養，24h后測量N等指標，結果如圖所示：
①本研究的目的是 　 　。
②當投菌量達到 　 　時，反硝化效果最好，N和總脫氮率均較高。當投菌量繼續增加，N和總脫氮率反而下降，推測可能的原因是 　 　（答1點）。
高考沖刺押題預測 發酵工程
參考答案與試題解析
一．選擇題（共16小題）
1．（2024秋 順義區期末）中國是釀酒歷史最古老的國家之一，家釀葡萄酒和工業化生產啤酒的過程均需要（　　）
A．利用醋酸菌無氧呼吸的原理
B．接種人工選育的單一菌種
C．為發酵過程提供適宜的溫度
D．對發酵產物進行分離和提純
【考點】果酒、果醋的制作．
【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】C
【分析】發障工程一般包括菌種的選育、擴大培養、培養基的配制、滅菌、接種、發酵、產物的分離、提純等方面。
【解答】解：A、家釀葡萄酒和工業化生產啤酒利用的是酵母菌無氧呼吸產生酒精的原理，A錯誤；
B、家釀葡萄酒不需要接種人工選育的單一菌種，B錯誤；
C、家釀葡萄酒和工業化生產啤酒均需要為發酵過程提供適宜的溫度，C正確；D、家釀葡萄酒不需要對發酵產物進行分離和提純，D錯誤。
故選：C。
【點評】本題考查傳統發酵技術和發酵工程的相關知識，要求考生識記相關的制作原理和流程，意在考查考生的識記和分析能力。
2．（2024 鄒城市校級模擬）藍莓果實的主要抗氧化活性成分為花色苷和多酚類物質，具有保護眼睛、抗氧化、消炎、增強記憶、增強免疫和抗癌等多種作用，因此利用藍莓釀造的藍莓酒具有較好的保健功能。釀造藍莓酒的工藝流程為新鮮藍莓→榨汁→接種→發酵→過濾→藍莓酒→儲存。下列敘述錯誤的是（　　）
A．藍莓酒發酵過程中起主要作用的微生物是酵母菌
B．對藍莓汁進行糖度調整可改變藍莓酒的酒精度
C．接種后需要持續通入無菌空氣以加快發酵進程
D．若利用酸性重鉻酸鉀檢測酒精度，需先對藍莓酒進行脫色處理
【考點】果酒、果醋的制作．
【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】C
【分析】果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發酵。故果酒的制作原理是酵母菌無氧呼吸產生酒精。
【解答】解：A、果酒的制作離不開酵母菌，在藍莓酒發酵過程中起主要作用的微生物是酵母菌，A正確；
B、糖可作為酒精發酵的原料，因此對藍莓汁進行糖度調整可改變藍莓酒的酒精度，B正確；
C、酵母菌為兼性厭氧菌，釀酒初期需要氧氣促進酵母菌的生長、繁殖，后期酵母菌需在無氧環境中進行酒精發酵，C錯誤；
D、若利用酸性重鉻酸鉀檢測酒精度，需先對藍莓酒進行脫色處理，排除果酒原有顏色的干擾，D正確。
故選：C。
【點評】本題主要考查果酒的制作等相關知識點，意在考查學生對相關知識點的理解和熟練應用的能力。
3．（2024 六合區校級二模）將大腸桿菌培養在含有葡萄糖培養液中，在時間0時，將含大腸桿菌的培養液均分為四組，處理見下表。混勻處理6小時后，將經不同處理的培養液分別涂布在四組不同的平板上，每組涂12個，在37℃下培養24小時，計數每組平板中菌落的平均數。結果如下表所示：下列有關說法，正確的是（　　）
組別 組1 組2 組3 組4
培養液處理 只有葡萄糖 葡萄糖+物質A 葡萄糖+物質B 葡萄糖+物質A+物質B
平板的菌落平均數 長滿菌落 2±2 4±1 23±3
A．研究物質A和B對大腸桿菌的共同作用時，組1是對照組，2、3、4組為實驗組
B．物質A和物質B均能抑制大腸桿菌的生長，且物質B的抑制作用強于物質A
C．物質A與物質B同時存在時，有些原來不能存活的大腸桿菌存活下來
D．可在培養液（基）中加入酚紅試劑鑒別大腸桿菌
【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）．
【專題】數據表格；微生物的分離、培養和應用．
【答案】C
【分析】伊紅﹣亞甲藍瓊脂培養基可用來鑒別大腸桿菌，生長在此培養基上的大腸桿菌菌落呈深紫色，并有金屬光澤。
【解答】解：A、研究物質A和B對大腸桿菌的共同作用時，組1、2、3均為對照組，組4為實驗組，A錯誤；
B、組2、組3與組1對比可知，物質A和物質B均能抑制大腸桿菌的生長，且作用相當，甚至物質A的抑制作用稍強于物質B，B錯誤；
C、組4與組2、組3對比可知，當物質A與物質B同時存在時，菌落要比物質A、物質B單獨存在要多，說當物質A與物質B同時存在時，有些原來不能存活的大腸桿菌存活下來，C正確；
D、鑒別大腸桿菌可使用的試劑是伊紅﹣亞甲藍試劑，D錯誤。
故選：C。
【點評】本題考查了微生物的選擇培養，需要學生掌握選擇培養基的配制。
4．（2024 河南模擬）黃豆醬是人們喜愛的傳統美食，早在春秋時期就有制作方法的相關記載。它以黃豆為主要原料，經米曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物發酵而成。勞動人民在制作過程中不斷改進發酵技術，總結出以下經驗。下列敘述錯誤的是（　　）
①選用具有高蛋白酶活性的米曲霉
②用蒸煮后的大豆與米曲霉混合堆積
③將初步發酵后含米曲霉等微生物的曲料攤薄，并適當通風
④在裝壇時，添加適量食鹽
⑤發酵過程中，需保持發酵壇密封
⑥發酵過程中，需定期攪拌
A．①和④對黃豆醬風味的形成起重要作用，利于提升品質
B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高發酵效率
C．③有利于米曲霉和酵母菌進行有氧呼吸并快速大量增殖
D．⑤中乳酸菌主要集中于發酵壇上部而米曲霉集中于下部
【考點】制作泡菜；果酒、果醋的制作；發酵與傳統發酵技術．
【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】D
【分析】米曲霉是真菌的一種，米曲霉發酵過程的主要目的是使米曲霉充分生長繁殖，大量分泌制作醬油過程所需的酶類，這些酶（如蛋白酶和脂肪酶）中能將發酵池中的蛋白質和脂肪分解成易于吸收、風味獨特的成分。
【解答】解：A、米曲霉能夠分泌蛋白酶能夠將黃豆醬中的蛋白質分解，而食鹽一方面可以抑制雜菌生長，一方面可以調味，故①和④對黃豆醬風味的形成起重要作用，利于提升品質，A正確；
B、米曲霉是好氧菌，且能夠分泌蛋白酶將黃豆醬中的蛋白質分解，故②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高發酵效率，B正確；
C、米曲霉是好氧菌，而酵母菌也可以進行有氧呼吸，故③有利于米曲霉和酵母菌進行有氧呼吸并快速大量增殖，C正確；
D、乳酸菌屬于厭氧菌，米曲霉是好氧菌，故⑤中米曲霉主要集中于發酵壇上部而乳酸菌集中于下部，D錯誤。
故選：D。
【點評】本題主要考傳統發酵技術的應用等相關知識點，意在考查學生對相關知識點的理解和掌握情況。
5．（2024 安順模擬）刺梨是貴州主要特產水果，富含超氧化物歧化酶和大量的維生素C、花青素等，可用于制作刺梨果酒和刺梨果醋。利用發酵工程生產刺梨果酒和果醋的主要流程如圖所示。下列敘述錯誤的是（　　）
A．培養基和發酵設備都必須經過嚴格的滅菌
B．發酵Ⅰ和發酵Ⅱ利用的微生物代謝類型不同
C．利用刺梨表面的微生物即可進行發酵Ⅰ和Ⅱ過程
D．發酵的不同時期要嚴格控制發酵溫度、pH和溶氧量等
【考點】果酒、果醋的制作．
【專題】模式圖；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】C
【分析】發酵Ⅰ階段發酵的菌種主要是酵母菌。在發酵Ⅱ階段，發酵菌種主要是醋酸菌，醋酸菌為需氧菌，可將酒精轉化為乙醛，乙醛再轉化為醋酸。
【解答】解：A、培養基和發酵設備都必須經過嚴格的滅菌，避免雜菌污染，A正確；
B、發酵Ⅰ的微生物代謝類型為異養兼性厭氧菌，發酵Ⅱ利用的微生物代謝類型為異養需氧型，B正確；
C、利用刺梨表面的微生物有雜菌且相應的微生物數量少，則可需要接種相應的菌種進行發酵Ⅰ和Ⅱ過程，C錯誤；
D、發酵的不同時期要嚴格控制發酵溫度、pH和溶氧量等，D正確。
故選：C。
【點評】本題主要考查果酒、果醋的制作等相關知識點，意在考查學生對相關知識點的理解和掌握。
6．（2023秋 潁州區校級期末）我國是最早生產醬油的國家。制曲是醬油生產的重要工序之一，其主要目的是給黑曲霉創造最佳條件，使其生長繁殖并分泌和積累相應的酶，制曲設備示意圖如圖。下列敘述錯誤的是（　　）
A．黑曲霉不僅可以用于生產醬油，還可以用于生產檸檬酸
B．酶及微生物的種類和數量是鑒定成曲質量的指標
C．將曲料攤鋪在簾架上有利于控制微生物生長的溫度
D．該制曲過程主要的發酵產物是葡萄糖、乙醇、乳酸等物質
【考點】發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用．
【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用；理解能力．
【答案】D
【分析】鼓風機應不斷通入經過濾的新鮮空氣，為米曲霉的生長提供足量的氧氣，為米曲霉生長創做條件，以便其大量繁殖，積累相應的酶。
【解答】解：A、以大豆為主要原料，利用黑曲霉，經一系列步驟可以生產醬油，檸檬酸也是由黑曲霉發酵制得的，A正確；
B、發酵的主要目的是使黑曲霉充分生長繁殖并分泌和積累相應的酶，所以酶及微生物的種類和數量是鑒定成曲質量的指標，B正確；
C、微生物的生長需要適宜的溫度，曲料攤鋪在簾架上可以及時散熱，有利于控制微生物生長的溫度，C正確；
D、葡萄糖是發酵的底物，不是產物，D錯誤。
故選：D。
【點評】本題主要考查發酵工程等相關知識點，意在考查學生對相關知識點的理解和熟練應用的能力。
7．（2023秋 潁州區校級期末）無菌操作在微生物培養、植物組織培養和動物細胞培養中都至關重要。下列敘述正確的是（　　）
A．生物技術實驗中，所有器皿、培養基及生物材料均需進行滅菌處理
B．酒精能使細胞中的蛋白質變性失活，95%的酒精用來消毒效果最好
C．配置動物細胞培養基時，加入抗生素即可達到無菌培養的目的
D．易分解的活性物質過濾除菌后，在無菌條件下加入滅菌的培養基中
【考點】無菌技術 常用的消毒和滅菌方法．
【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用；理解能力．
【答案】D
【分析】1、微生物培養過程中要進行無菌操作，關鍵就在于防止外來雜菌的入侵。
2、實驗室常用的滅菌方法：
（1）灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。
（2）干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。
【解答】解：A、生物技術實驗中，要對所有培養基和培養皿消毒，但是生物材料要根據實際情況來，比如說植物組織培養，外植體只能消毒，不能滅菌，A錯誤；
B、一般消毒用的是70%的酒精，B錯誤；
C、抗生素只能殺滅細菌和一部分真菌，不能達到無菌的效果，C錯誤；
D、易分解的活性物質應該用過濾滅菌，無菌條件下加入無菌培養基，D正確。
故選：D。
【點評】本題主要考查無菌技術等相關知識點，意在考查學生對相關知識點的理解和熟練應用的能力。
8．（2023秋 亭湖區校級期末）下列相關說法中，錯誤的是（　　）
A．利用發酵技術，在鮮奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品
B．在腐乳制作過程中，毛霉將蛋白質分解產生小分子的肽和氨基酸
C．乙醇既是果酒發酵的產物，也是果醋發酵的底物，又可以抑制雜菌繁殖
D．在啤酒生產的主發酵階段和后發酵階段，需將溫度保持在酵母菌的最適生長溫度
【考點】果酒、果醋的制作；發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用；發酵與傳統發酵技術．
【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】D
【分析】1、果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精發酵，果醋的制作利用的是醋酸菌將酒精轉變成醋酸的代謝，腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶類，泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸發酵。傳統的發酵技術都巧妙的利用了天然菌種，都為特定的菌種提供了良好的生存條件，最終的發酵產物不是單一的組分，而是成分復雜的混合物。
2、果酒用到的葡萄應該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機會；榨汁機、發酵裝置要清洗干凈，并進行酒精消毒；每次排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。
【解答】解：A、乳酸菌在無氧的條件下將有機物分解為乳酸，利用發酵技術，在鮮奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品，A正確；
B、毛霉會分泌蛋白酶，在腐乳制作過程中，可以將蛋白質分解產生小分子的肽和氨基酸，B正確；
C、果酒發酵過程中，酵母菌在無氧條件下產生乙醇，在酸性缺氧的條件下，其他雜菌不能生長，所以乙醇既是果酒發酵的產物，在葡萄糖缺乏，氧氣充足的條件下，醋酸菌可以將乙醇氧化為醋酸，所以也是果醋發酵的底物，又可以抑制雜菌繁殖，C正確；
D、在啤酒生產的主發酵階段需將溫度保持在酵母菌的最適生長溫度，后發酵階段需將溫度保持在低溫，也就是發酵溫度，D錯誤。
故選：D。
【點評】本題考查發酵工程的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力、運用所學知識綜合分析問題的能力。
9．（2023秋 延邊州期末）傳統發酵食品的制作中，所對應產物的產生場所，正確的是（　　）
A．制作果酒時，酵母菌產生H2O的場所是線粒體基質
B．制作泡菜時，乳酸菌產生乳酸的場所是細胞質基質
C．制作泡菜時，乳酸菌產生CO2的場所是細胞質基質
D．制作果醋時，醋酸桿菌產生CO2的場所是線粒體基質
【考點】果酒、果醋的制作；制作泡菜．
【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．
【答案】B
【分析】（1）利用酵母菌制作果酒的原理是：
在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖。
C6H12O6+6O2+12H2O6CO2+12H2O+能量
在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發酵。
C6H12O62CO2+2C2H5OH+能量
（2）利用醋酸菌制作果醋的原理
當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變為乙醛，再將乙醛變為醋酸。
C6H12O6+2O2CH3COOH（醋酸）+2H2O+2CO2+能量
C2H5OH+O2CH3COOH（醋酸）+H2O+能量
【解答】解：A、在制作果酒時，酵母菌進行有氧呼吸產生H2O的場所是線粒體內膜，而不是線粒體基質，A錯誤；
B、制作泡菜時，乳酸菌進行無氧呼吸產生乳酸，無氧呼吸的場所是細胞質基質，B正確；
C、乳酸菌進行無氧呼吸產生乳酸，不產生CO2，C錯誤；
D、醋酸桿菌屬于原核生物，沒有線粒體，其進行有氧呼吸產生CO2的場所是細胞質基質，D錯誤。
故選：B。
【點評】本題考查傳統發酵食品的制作等相關知識，意在考查學生的識記能力和熟練應用的能力。
10．（2023秋 濟寧期末）我國早在9000年前就可以運用發酵技術獲得產品，為生活增添豐富的色彩。下列說法正確的是（　　）
A．制作果酒時，可通過控制發酵的溫度、發酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒變質的概率
B．利用酵母菌酒精發酵進行傳統釀酒過程中，需一直保持無氧的條件
C．泡菜壇裝八成滿可以防止發酵過程中酵母菌、乳酸菌等產生的CO2使發酵液溢出
D．腐乳鮮美的味道主要由曲霉分解蛋白質產生的小分子肽和氨基酸引起
【考點】果酒、果醋的制作；發酵與傳統發酵技術；制作泡菜．
【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．
【答案】A
【分析】1、制作泡菜的注意事項：
（1）鹽水煮沸，一是為了消除雜菌，二是為了除去水中的氧氣，冷卻再用是為了避免高溫殺死壇中蔬菜表面的乳酸菌；
（2）加水密封是為了阻止外面的空氣再進入泡菜壇，為乳酸菌發酵制作泡菜創造無氧的環境條件。若此過程中進入大量氧氣，可能導致乳酸菌死亡而好氧菌大量繁殖，使菜腐爛；
（3）菜料只能裝八成滿的原因：初期會有氣體產生；要往壇中加鹽水沒過菜料，所以不能加菜料太滿。
2、制作果酒和果醋的注意事項：
（1）發酵瓶和榨計機都要用體積分數為70%的酒精消毒；
（2）葡萄要先沖洗再去枝梗，以免去枝梗時葡萄破碎，增加被雜菌污染的風險；
（3）瓶中留有空間為酵母菌進行有氧呼吸大量繁殖提供氧氣。果酒發酵過程中會產生大量CO2導致瓶內氣壓升高，需擰松瓶蓋放氣，但不要完全打開，否則可能會被雜菌污染。
【解答】解：A、制作果酒時，果酒中除了酵母菌，還有乳酸菌、醋酸菌等微生物；乳酸菌可能分解果酒中的糖、甘油、酒石酸等，從而使果酒變質；可通過控制發酵的溫度、發酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒變質的概率，A正確；
B、利用酵母菌釀制果酒時，初始階段可往裝置中通入一定量空氣，使酵母菌進行有氧呼吸大量繁殖，后期再密封發酵使酵母菌進行無氧呼吸，產生酒精，B錯誤；
C、泡菜發酵時，發酵初期酵母菌等的活動會產生氣體，使體積膨脹，故泡菜壇裝八成滿可防止發酵液溢出，乳酸菌只進行無氧呼吸（乳酸發酵）不產生二氧化碳，C錯誤；
D、多種微生物參與了豆腐的發酵，如酵母、曲霉和毛霉等，其中起主要作用的是毛霉；腐乳發酵時，發揮主要作用是毛霉，毛霉通過分泌脂肪酶和蛋白酶（不是胰蛋白酶）將豆腐塊中的大分子物質分解為易于被人體吸收的小分子物質，有些氨基酸具有特殊的氣味而表現出腐乳的風味，D錯誤。
故選：A。
【點評】本題主要考查傳統發酵技術的應用的內容，要求考生識記相關知識，并結合所學知識準確答題。
11．（2023秋 濟寧期末）味精是一種鮮味劑，利用發酵技術生產味精的主要過程為原料→淀粉糖化→通氣發酵→發酵產物提取→味精制造→包裝。下列說法錯誤的是（　　）
A．生產味精需要的谷氨酸棒狀桿菌是需氧型生物
B．淀粉的糖化分解有利于發酵過程的充分進行
C．發酵時需將發酵液的pH調節為中性或弱酸性
D．從發酵液中獲得谷氨酸需要采取提取、分離和純化措施
【考點】發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用．
【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用；理解能力．
【答案】C
【分析】在谷氨酸生產過程中，谷氨酸在細胞內大量積累，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而導致谷氨酸合成受阻。在發酵過程中，應采用一定手段（如控制磷脂的合成或使細胞膜受損）改變細胞膜的通透性，使谷氨酸迅速排放到細胞外面，從而解除谷氨酸對谷氨酸脫氧酶的抑制作用，提高谷氨酸產量。
【解答】解：A、常用的谷氨酸棒狀桿菌為好氧菌，因此培養基中需嚴格控制溶解氧、通氣量等發酵條件，以保證谷氨酸棒狀桿菌代謝正常進行，A正確；
B、淀粉的糖化作用是在發酵過程中繼續利用微生物所分泌的淀粉酶將碳水化合物分解成葡萄糖、麥芽糖、糊精等，淀粉的糖化分解有利于發酵過程的充分進行，B正確；
C、谷氨酸棒狀桿菌在發酵過程中要嚴格控制發酵液的pH。在中性和弱堿性條件下會積累谷氨酸；在酸性條件下則容易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺，C錯誤；
D、發酵結束后，要想獲得純凈谷氨酸，應對發酵液進行分離和純化，D正確。
故選：C。
【點評】本題考查發酵工程的相關內容，要求學生能結合所學知識正確作答。
12．（2024春 郫都區校級期中）發酵工程可實現發酵產品的大規模生產，如圖為發酵工程的基本環節，相關敘述正確的是（　　）
A．①、②可以是誘變育種或基因工程育種
B．③是發酵工程的中心環節
C．產物濃度的檢測必須在發酵結束后進行
D．發酵條件為室溫和近中性的pH等
【考點】發酵工程的基本環節．
【專題】模式圖；微生物的分離、培養和應用．
【答案】A
【分析】發酵工程是指采用現代工程技術手段，利用微生物的某些特定功能，為人類生產有用的產品，或直接把微生物應用于工業生產過程的一種技術。
【解答】解：A、優良菌種可以從自然界中篩選出來，也可以通過誘變育種或基因工程育種獲得，因此①、②可以是誘變育種或基因工程育種，A正確；
B、③是培養基的滅菌，發酵罐內發酵是發酵工程的中心環節，B錯誤；
C、在發酵過程中，要隨時檢測培養液中的微生物數量、產物濃度，以了解發酵進程，同時要嚴格控制發酵條件，如溫度、pH、溶解氧，故可能需要適時添加營養物質等，C錯誤；
D、不同微生物的最適溫度和pH值有所不同，因此不同發酵過程溫度和pH也有所不同，D錯誤。
故選：A。
【點評】本題主要考查發酵工程的基本環節，要求考生能夠結合所學知識準確判斷各選項，屬于識記和理解層次的考查。
13．（2024秋 河南月考）科研人員計劃從含多種微生物的白酒大曲中分離篩選出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒釀造。白酒大曲中產酯化酶微生物初步篩選時所用培養基成分與操作步驟如表所示。下列敘述錯誤的是（　　）
培養基成分 牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯會使培養基呈現乳白色，酯化酶可催化乳白色的物質反應，產生透明物質）
操作步驟 將白酒大曲塊粉碎制成菌懸液→利用①______（接種方法）接種后培養→將周邊出現②______的菌落挑出→重新劃線接種至分離純化平板培養基上→多次重復純化至得到不同形態的單菌落→4℃冰箱保存。
A．表中所示培養基中的牛肉膏和蛋白胨可為微生物生長提供氮源
B．篩選產酯化酶的霉菌時，應將培養基在滅菌前調至中性或弱堿性
C．表中①可代表稀釋涂布平板法，②處應填透明圈
D．通過劃線操作可將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面
【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）．
【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用．
【答案】B
【分析】微生物的營養物質：主要包括水、碳源、氮源、能源、無機鹽等，這些物質能夠滿足微生物的生長、繁殖和參與各種生理活動，促進合成新的細胞和物質，同時將代謝廢物排出。
【解答】解：A、表中所示培養基中為微生物的生長提供氮源的物質是牛肉膏和蛋白胨，A正確；
B、若篩選的是產酯化酶的霉菌（真菌），應將培養基在用高壓蒸汽滅菌法滅菌前調至酸性，B錯誤；
C、表中①可代表稀釋涂布平板法，聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯會使培養基呈現乳白色，酯化酶可催化乳白色的物質反應，因此若被篩選的微生物能分泌酯化酶，則在其菌落的周圍會產生透明圈，因此②處應填透明圈，C正確；
D、利用平板劃線法分離得到單菌落的原理是通過接種環在固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面，經數次劃線后培養，可以分離得到單菌落，D正確。
故選：B。
【點評】本題考查微生物實驗室培養的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，學生具備運用所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。
14．（2024秋 如皋市期中）酵母菌的純培養步驟如圖所示，下列敘述正確的是（　　）
A．步驟①需要在酒精燈火焰旁進行
B．步驟②培養基凝固后將平板倒置，可減緩培養基中水分蒸發，避免過快干裂
C．步驟③接種時，若在平板上劃線4個區，需蘸取酵母菌液4次
D．步驟④培養前需在培養皿皿蓋上做好標記
【考點】微生物的純培養．
【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用；理解能力．
【答案】B
【分析】平板劃線法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環在平板培養基，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。
【解答】解：A、步驟①配制培養基不需要在酒精燈火焰旁進行，酒精燈火焰旁主要是進行無菌操作的區域，如接種等操作，A錯誤；
B、步驟②培養基凝固后將平板倒置，可減緩培養基中水分蒸發，避免過快干裂，同時也能防止皿蓋上的水珠滴落到培養基上造成污染，B正確；
C、步驟③接種時，若在平板上劃線4個區，只需蘸取酵母菌液1次，然后通過多次劃線逐步稀釋菌液，C錯誤；
D、步驟④培養前需在培養皿底部做好標記，而不是皿蓋上，因為如果標記在皿蓋上，在培養過程中，皿蓋可能會被拿下來放置在不同位置，容易造成標記混亂，D錯誤。
故選：B。
【點評】本題考查微生物的培養等相關知識點，意在考查學生對相關知識點的理解和熟練應用的能力。
15．（2024秋 如皋市期中）某生物小組欲利用以下培養基從土壤中分離某種微生物，下列對該實驗的后續操作及結果分析正確的是（　　）
成分 葡萄糖 K2HPO4 K2SO4 NaCl CaCO3 MgSO4 7H2O 蒸餾水 瓊脂粉
含量 10g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 0.2g 1000mL 20g
A．配制好的培養基先分裝到錐形瓶后再進行高壓蒸汽滅菌
B．該培養基滅菌后需冷卻至40℃再進行倒平板操作
C．用無菌水將土樣進行系列稀釋，在最后一次稀釋后進行涂布接種
D．該無氮培養基可用于硝化細菌等固氮菌的分離與計數
【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）．
【專題】數據表格；微生物的分離、培養和應用；理解能力．
【答案】A
【分析】1、微生物的營養物質主要包括碳源、氮源、水和無機鹽等。有些微生物還需要特殊的營養物質，如維生素、生長因子等。
2、培養基中含有瓊脂的一般為固體培養基。
3、選擇培養基是指允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基。
【解答】解：A、為有效滅菌并防止分裝時培養基污染，配制好的培養基先分裝到錐形瓶后，再進行高壓蒸汽滅菌，A正確；
B、該培養基滅菌后需冷卻至50℃再進行倒平板操作，B錯誤；
C、用無菌水將土樣進行系列稀釋，選用一定稀釋范圍的樣液進行涂布接種，C錯誤；
D、硝化細菌不是固氮菌，D錯誤。
故選：A。
【點評】本題主要考查微生物培養的相關知識，難度適中。
16．（2024秋 如皋市期中）關于消毒和滅菌的敘述，錯誤的是（　　）
A．利用微生物寄生于多種細菌體內使細菌裂解，屬于生物消毒
B．利用紫外線消毒前，噴灑消毒液可加強消毒效果
C．對培養基滅菌時，干熱滅菌比濕熱滅菌需要更高的滅菌溫度
D．對涂布器滅菌，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，再放在火焰上灼燒
【考點】無菌技術 常用的消毒和滅菌方法．
【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用；理解能力．
【答案】B
【分析】實驗室常用的滅菌方法：
（1）灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。
（2）干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。
（3）高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min。
【解答】解：A、利用微生物寄生于多種細菌體內使細菌裂解，這屬于生物消毒的一種方式，A正確；
B、紫外線消毒的原理是破壞微生物的核酸結構等，而噴灑消毒液后可能會在物體表面形成一層膜等情況，反而可能影響紫外線的穿透，不能加強消毒效果，B錯誤；
C、對培養基滅菌時，干熱滅菌需要在160﹣170℃保持1﹣2小時，濕熱滅菌一般是121℃保持15﹣30分鐘，干熱滅菌比濕熱滅菌需要更高的滅菌溫度，C正確；
D、對涂布器滅菌時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，再放在火焰上灼燒，防止酒精燃燒引發危險，D正確。
故選：B。
【點評】本題主要考查無菌技術等相關知識點，意在考查學生對相關知識點的理解和熟練應用的能力。
二．解答題（共4小題）
17．（2024 息縣模擬）（一）某食品公司得到一種高效釀酒的酵母菌菌株，并設計方案獲得發酵產物。
（1）對于酵母菌的培養，比較適合它的培養基為　A　（A．馬鈴薯蔗糖培養基；B．MS培養基；C．LB培養基；D．牛肉湯培養基），除了要選擇合適的培養基成分外，還要考慮培養基中營養物質的　濃度和比例（配比）　。
（2）欲知道這種微生物的繁殖速度，可用涂布分離法或　血細胞計數板（或顯微鏡計數法）　對酵母菌進行計數。對培養到某一時期的培養液制備成10﹣5的稀釋液，每次取0.1mL進行涂布分離，三個培養皿生長的菌落數依次為35個、32個、29個，則培養液中的酵母菌數量為　3.2×107　個/mL。在恒溫培養箱培養時，培養皿的放置方式如圖　a　（填“a”或“b”）。
（3）該酵母菌的發酵食品也會因為發酵時間的長短和　發酵條件、發酵底物　不同，而形成不同的代謝產物，使發酵食品的風味發生變化。釀酒時會因為發酵液放置過久等原因，導致出現酸味，可能是因為產生了　醋酸　（填物質）。
（二）目前我國新冠病毒核酸檢測的方法是RT﹣PCR，如圖為RT﹣PCR（逆轉錄熒光PCR技術）的原理：PCR過程中探針和引物一起與模板結合，探針兩側分別帶有熒光基團和淬滅基團（抑制熒光發出），當酶催化子鏈延伸至探針處時會水解探針，導致熒光基團與淬滅基團分離而發出熒光（熒光強度與探針水解量成正相關）。
請回答下列問題：
（4）PCR技術與DNA體內復制過程相比，兩者的復制方式都是　半保留復制　。RT﹣PCR過程中，需先以RNA為模板合成cDNA，故裝置中需添加　逆轉錄酶　酶。除了加酶，解開cDNA雙螺旋的方法還有　加熱　。
（5）對新冠病毒進行檢測時，探針是一段與　目的基因中特定的核苷酸序列　相同的核苷酸序列。
（6）通過熒光檢測到熒光信號，則可判定該檢測樣本為　陽　性（選填“陽”、“陰”），在相同PCR循環次數條件下，熒光強度與病毒數量呈　正相關　。
（7）為了在沒有條件進行核酸檢測前及早發現新冠病毒，我國于2022年3月11日推出新冠病毒抗原檢測試劑盒作為核酸檢測的補充措施，該試劑盒的檢測原理是　抗原抗體的特異性結合　。試劑盒中的探針應采用　單克隆抗體　技術生產。
【考點】微生物的數量測定；發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【專題】正推法；微生物的分離、培養和應用；PCR技術；理解能力．
【答案】（1）A 濃度和比例（配比）
（2）血細胞計數板##或顯微鏡計數法 3.2×107 a
（3）發酵條件、發酵底物 醋酸
（4）半保留復制 逆轉錄酶 加熱
（5）目的基因中特定的核苷酸序列
（6）陽 正相關
（7）抗原抗體的特異性結合 單克隆抗體
【分析】1、酵母菌是兼性厭氧微生物，在無氧條件下能進行酒精發酵，其反應式為：C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量。溫度是影響酵母菌生長的重要因素，釀酒酵母的最適生長溫度約為28℃，發酵時，將溫度控制在18～30℃進行發酵。
2、人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質﹣培養基，培養基中一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質）、氯源（提供氮元素的物質）和無機鹽等營養物質。
3、微生物的計數方法包括稀釋涂布平板法和利用顯微鏡進行直接計數。
4、稀釋涂布平板法需要將樣品進行系列梯度稀釋，為了保證結果準確，一般選擇菌落數為30～300的平板進行計數。通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養，以保證獲得菌落數為30～300、適于計數的平板。在同一稀釋度下，應至少對3個平板進行重復計數，然后求出平均值。
5、利用顯微鏡進行直接計數是一種常用的、快速直觀的測定微生物數量的方法。該方法利用特定的細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下觀察、計數，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數量，統計的結果一般是活菌數和死菌數的總和。
6、逆轉錄是指在逆轉錄酶的催化下，以RNA為模板將四種脫氧核苷酸合成為DNA的過程。
7、PCR是聚合酶鏈式反應的縮寫，是一項根據DNA半保留復制的原理，在體外提供參與DNA復制的各種組分與反應條件，對目的基因的核苷酸序列進行大量復制的技術。PCR反應的條件為需要在一定的緩沖溶液中才能進行，需提供DNA模板，分別與兩條模板鏈結合的2種引物，4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶；同時通過控制溫度使DNA復制在體外反復進行。
【解答】解：（1）由分析可知，酵母菌主要以糖類底物進行呼吸作用產生酒精，因此比較適合的培養為以糖類為碳源的培養基，即A馬鈴薯蔗糖培養基。除了要選擇合適的培養基成分外，還要考慮培養基中營養物質的濃度和比例，以確保微生物能正常生存和發酵產品的品質。
（2）由分析可知，微生物的計數方法有稀釋涂布平板法和利用顯微鏡進行直接計數，顯微鏡計數法需要使用血細胞計數板對微生物進行計數。根據題意分析，培養液中酵母菌數量為。利用培養皿培養微生物時，需要將培養皿倒置培養，即a所示狀況。
（3）在發酵過程中，培養液中的微生物數量、產物濃度，培養液的營養組分，以及溫度、pH和溶解氧等發酵條件，不僅會影響微生物的生長繁殖，而且會影響微生物代謝物的形成。因此，發酵食品會因為發酵時間的長短、發酵條件、發酵底物的不同觀使其風味發生變化。釀酒時會因為發酵液放置過久等原因，導致出現酸味，可能是因為醋酸菌繁殖產生了醋酸所致。
（4）由分析可知，PCR技術與DNA體內復制的復制方式都是半保留復制。RT﹣PCR過程為逆轉錄過程，需向裝置中添加逆轉錄酶，以RNA為模板合成cDNA。DNA體內復制中解開DNA雙螺旋的是利用解旋酶，在PCR中則是利用加熱解開雙螺旋。
（5）由圖可知，利用探針對新冠病毒進行檢測的原理是堿基互補配對和DNA復制，當存在病毒時，以病毒的遺傳物質RNA逆轉錄合成cDNA，探針能與該cDNA通過堿基互補配對結合，當cDNA進行復制時，會水解探針，因此探針是一段與目的基因（病毒的基因）中特定核苷酸序列相同的核苷酸序列。
（6）若檢測到熒光信號，說明探針與被檢測物結合后被水解，則可判定該檢測樣本為陽性，在相同PCR循環次數條件下，病毒數量越多，復制時水解的探針越多，則熒光強度越強，即熒光強度與病毒數量呈正相關。
（7）分析題意可知，新冠病毒抗原檢測試劑盒的原理是抗原與抗體的特異性結合。與傳統方法生產的抗體相比，單克隆抗體具有純度高、特異性強的特點，因此試劑盒中的探針應采用單克隆抗體技術生產。
故答案為：
（1）A 濃度和比例（配比）
（2）血細胞計數板##或顯微鏡計數法 3.2×107 a
（3）發酵條件、發酵底物 醋酸
（4）半保留復制 逆轉錄酶 加熱
（5）目的基因中特定的核苷酸序列
（6）陽 正相關
（7）抗原抗體的特異性結合 單克隆抗體
【點評】本題主要考查微生物的培養與計數和PCR技術等知識，意在考查學生知識的掌握情況和理解水平，利用知識分析解決問題能力，要求學生熟練掌握知識點，形成知識網絡，能根據具體題境利用相關知識解決問題。
18．（2023秋 宣威市校級期末）青霉素發酵是高耗氧過程，發酵過程中給微生物持續高效地供氧是保證青霉素持續高產的關鍵。血紅蛋白具有很強的攜帶O2的能力，將其引入青霉菌是提高青霉素產能的思路之一、血紅蛋白不僅存在于人和動物的紅細胞中，某些細菌（如透明顫菌）細胞中也存在。研究人員為了將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌，設計了如圖所示的方案。回答下列問題：
注：某氨基酸缺陷型菌株是指該菌株在缺少該種氨基酸的培養基上會暫停生長
（1）上圖步驟②采用的接種方法是 　稀釋涂布平板法　，步驟③往培養基中添加的某種物質是 　硫氨酸　。得到的平板中菌落較 　小　（填“大”或“小”）的菌株即為甲硫氨酸營養缺陷型菌株。
（2）溶菌酶屬于免疫系統組成中的 　免疫活性物質　，蝸牛酶是從以植物和真菌為食的蝸牛消化道中提取的酶。處理⑤、⑥所用的酶分別是上述兩種酶中的 　蝸牛酶、溶菌酶　。
（3）簡述圖甲步驟⑧從融合細胞中篩選目的菌株的基本思路：　用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他營養成分齊全的培養基培養融合細胞，能夠在培養基上生長的即為雜種菌株　。
（4）除了上述方案，請再提出一種將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌的技術手段 　利用基因工程技術，將透明顫菌的血紅蛋白基因轉入青霉菌　。
【考點】發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用；基因工程在農牧、醫療、食品等方面的應用；免疫系統的組成．
【專題】正推法；免疫調節；微生物的分離、培養和應用；理解能力．
【答案】（1）稀釋涂布平板法 甲硫氨酸 小
（2）免疫活性物質 蝸牛酶、溶菌酶（順序不可調換）
（3）用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他營養成分齊全的培養基培養融合細胞，能夠在培養基上生長的即為雜種菌株
（4）利用基因工程技術，將透明顫菌的血紅蛋白基因轉入青霉菌
【分析】植物體細胞雜交是指將不同種的植物體細胞，在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新的植物體的技術。誘導原生質體融合的方法：物理法（離心、振動、電激等）和化學法（聚乙二醇等）。植物體細胞雜交的意義：克服遠緣雜交不親和的障礙，擴大親本范圍，培育作物新品種。
【解答】解：（1）圖中平板上的菌落分布比較均勻，該步驟②采用的接種方法是稀釋涂布平板法。經過步驟③之后首先得到甲硫氨酸營養缺陷菌株，所以步驟③往培養基中添加的某種物質是甲硫氨酸，起到篩選菌株的作用；得到的平板中菌落較小的菌株即為甲硫氨酸營養缺陷型菌株，因為該營養缺陷型菌株生長緩慢，繁殖能力比天然菌株差一些。
（2）溶菌酶屬于免疫系統組成中的免疫活性物質。蝸牛以植物和真菌為食，可推測其消化道中的酶可以分解真菌的細胞壁，而溶菌酶可以分解細菌的細胞壁，故處理⑤、⑥所用的酶分別是上述兩種酶中的蝸牛酶、溶菌酶。
（3）處理⑧的目的是要篩選得到雜種菌株，可以根據兩種“親本”菌種的特點，采取雙營養缺陷的培養基進行篩選。方案為：用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他營養成分齊全的培養基培養融合細胞，能夠在培養基上生長的即為雜種菌株。
（4）顫菌屬于原核生物，青霉菌屬于真核生物，除了上述方案，將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌的技術手段是：利用基因工程技術，將透明顫菌的血紅蛋白基因轉入青霉菌。
故答案為：
（1）稀釋涂布平板法 甲硫氨酸 小
（2）免疫活性物質 蝸牛酶、溶菌酶
（3）用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他營養成分齊全的培養基培養融合細胞，能夠在培養基上生長的即為雜種菌株
（4）利用基因工程技術，將透明顫菌的血紅蛋白基因轉入青霉菌
【點評】本題考查免疫調節、基因工程和發酵工程的相關內容，要求學生能結合所學知識正確作答。
19．（2023秋 杞縣校級期末）回答下列（一）、（二）小題：
（一）如圖1是谷氨酸發酵裝置示意圖，谷氨酸工業上常用谷氨酸棒狀桿菌在30℃下發酵獲得；如圖2是谷氨酸生產的機理，谷氨酸棒狀桿菌以葡萄糖為底物進行了如下過程。據圖分析，回答下列問題：
（1）如圖1中1、2處是發酵罐夾層中冷凝水的進出口，水在發酵罐夾層流動的作用是 　降溫至30℃利于谷氨酸棒狀桿菌發酵　。如圖1中3為攪拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是 　谷氨酸棒狀桿菌為需氧型微生物，攪拌能增加發酵液中的溶解氧，可使其與營養物質充分接觸利于該菌發酵　。發酵過程中，若谷氨酸積累過量，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而導致該合成途徑中斷，因此提高產物產量的關鍵是改變菌體細胞膜的 　通透性　。
（2）谷氨酸棒桿菌進行以硫酸二乙酯和紫外線相結合的復合誘變，經選育得到高產突變株LG﹣01．將其接種在含葡萄糖液體培養基中，于30℃下培養48h。搖勻并取培養液稀釋107倍后，向四個培養基分別涂布0.1mL該培養液，四個培養皿生長的菌落依次為31個、2個、35個、33個，則稀釋前菌液的菌體為 　3.3×109　個/mL，計算得到的值比實際值 　低　。
（3）發酵結束后可用接種環蘸取發酵液進行 　平板劃線　，從而純化谷氨酸棒狀桿菌得到單菌落。此外，此過程需確保培養基的pH環境為 　中性偏堿　。
（二）甜菜是我國重要的糖料作物之一，為提高甜菜的光合效率和產量。科研工作者構建攜帶SBPase基因（編碼卡爾文循環的關鍵酶）的表達載體，如圖3為重組質粒示意圖，通過基因工程對甜菜進行遺傳改造。回答下列問題：
（4）構建表達載體并導入農桿菌：獲取目的基因后利用PCR技術進行擴增，經 　凝膠電泳　鑒定后，切割凝膠，再將凝膠溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段。然后使用限制性內切核酸酶切割 　質粒和SBPase基因　，將帶有黏性末端的酶切產物純化回收后，用DNA連接酶連接。經過一系列步驟后，再將測序正確的重組質粒導入農桿菌。
（5）獲取抗性植株：將含有重組質粒的農桿菌侵染甜菜葉柄并共培養一段時間后，先將外植體放在含有羧芐霉素和頭孢霉素的培養基中初步培養，目的是 　殺滅農桿菌　，再轉入含有 　卡那霉素　的篩選培養基中獲得抗性植株。此過程使用抗生素時需注意 　抗生素的種類、劑量及作用時間等　。
（6）為從分子水平上檢測抗性植株是否含有目的基因，對抗性植株進行PCR后檢測，檢測結果如圖4所示。CK+組是選用含 　SBPase基因　的質粒作為陽性對照。
（7）取陽性無菌苗葉片提取總RNA，將RNA逆轉錄成cDNA，再以cDNA為模板，利用目的基因引物進行PCR以檢測 　SBPase基因的表達情況　。在整個過程中，反應體系中的酶有 　逆轉錄酶和耐高溫的DNA聚合酶　。
【考點】發酵工程在食品、醫藥、農牧業等工業上的應用．
【專題】圖文信息類簡答題；微生物的分離、培養和應用；解決問題能力．
【答案】（1）降溫至30℃利于谷氨酸棒狀桿菌發酵 谷氨酸棒狀桿菌為需氧型微生物，攪拌能增加發酵液中的溶解氧，可使其與營養物質充分接觸利于該菌發酵 通透性
（2）3.3×109 低
（3）平板劃線 中性偏堿
（4）凝膠電泳 質粒和SBPase基因
（5）殺滅農桿菌 卡那霉素 抗生素的種類、劑量及作用時間等
（6）SBPase基因
（7）SBPase基因的表達情況 逆轉錄酶和耐高溫的DNA聚合酶
【分析】1、谷氨酸生產所用菌種是好氧菌，通風和攪拌不僅會影響對氮源和碳源的利用率，而且會影響發酵周期和谷氨酸的合成量，尤其是發酵后期，加大通氣量有利于谷氨酸的合成。當菌體生長到穩定期，適當提高溫度有利于生產谷氨酸。在發酵過程中，隨著營養物質的利用，代謝產物的積累，培養液的pH會不斷變化。
2、基因工程是以分子遺傳學為理論基礎，以分子生物學和微生物學的現代方法為手段，將不同來源的基因按預先設計的藍圖，在體外構建雜種DNA分子，然后導入活細胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種。
【解答】解：（1）在利用發酵罐進行發酵的過程中，由于微生物的呼吸作用以及攪拌等都能產生大量的熱，使發酵液溫度升高，為防止溫度過高降低酶的活性，而降低谷氨酸產量，采取了水在發酵罐表層中流動而降溫的措施。3為攪拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是谷氨酸棒狀桿菌為需氧型微生物，攪拌能增加發酵液中的溶解氧，可使其與營養物質充分接觸利于該菌發酵。發酵過程中，若谷氨酸積累過量，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而導致該合成途徑中斷，因此提高產物產量的關鍵是改變菌體細胞膜的通透性。
（2）四個培養皿生長的菌落依次為31個、2個、35個、33個，第二個數值明顯錯誤應去掉，計算平均菌落數為33個，則稀釋前菌液的菌體為33÷0.1×107＝3.3×109，由于當幾個細胞連在一起時觀察到的是單個菌落，計算得到的值比實際值偏小。
（3）要化谷氨酸棒狀桿菌得到單菌落平板劃線，此過程需確保培養基的pH環境為中性偏堿。
（4）構建表達載體并導入農桿菌：獲取目的基因后利用PCR技術進行擴增，經電泳鑒定后，切割凝膠，再將凝膠溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段，然后使用限制性內切核酸酶切割SBPase基因和質粒，將帶有黏性末端的酶切產物純化回收后，用DNA連接酶連接，經過一系列步驟后，再將測序正確的重組質粒導入農桿菌。
（5）重組質粒的標記基因是卡那霉素抗性基因，先將外植體放在含有羧芐霉素和頭孢霉素的培養基中初步培養，目的是殺死甜菜葉柄中的農桿菌，再轉入含有卡那霉素的篩選培養基中獲得抗性植株。此過程使用抗生素時需注意：注意抗生素的種類、劑量及作用時間等。
（6）為從分子水平上檢測抗性植株是否含有目的基因，對抗性植株進行PCR后檢測，檢測結果如圖4所示。CK+組是選用含目的基因的質粒作為陽性對照。
（7）取陽性無菌苗葉片提取總RNA，將RNA逆轉錄成cDNA，再以cDNA為模板，利用目的基因引物進行PCR以檢測陽性無菌苗葉片中的目的基因是否轉錄出mRNA。在整個過程中，反應體系中的酶有逆轉錄酶和耐高溫的DNA聚合酶。
故答案為：
（1）降溫至30℃利于谷氨酸棒狀桿菌發酵 谷氨酸棒狀桿菌為需氧型微生物，攪拌能增加發酵液中的溶解氧，可使其與營養物質充分接觸利于該菌發酵 通透性
（2）3.3×109 低
（3）平板劃線 中性偏堿
（4）凝膠電泳 質粒和SBPase基因
（5）殺滅農桿菌 卡那霉素 抗生素的種類、劑量及作用時間等
（6）SBPase基因
（7）SBPase基因的表達情況 逆轉錄酶和耐高溫的DNA聚合酶
【點評】本題考查基因工程與發酵工程的相關知識，意在考查學生的識記能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題的能力是解答本題的關鍵。
20．（2024 西湖區校級模擬）反硝化細菌是一類能將硝態氮（N）通過一系列中間產物（、NO、N2O）還原為氣態氮（N2）的細菌群，反硝化作用也是產堿過程。反硝化細菌對于解決水體富營養化和亞硝酸鹽對水生動物的毒害，具有十分重要的意義。某課題小組通過采集活性污泥樣品，并從中分離反硝化細菌，研究影響菌株反硝化作用的主要環境因素，為反硝化細菌在養殖廢水處理應用中提供理論指導。反硝化細菌的分離和鑒定流程如下，回答下列問題：
（1）將采集的活性污泥樣品1mL加入到裝有9mL、pH7.2的磷酸鹽緩沖液的l00mL燒杯中，取樣接種到富集培養基中培養，富集培養基的成分有：KNO32g，FeSO40.2g，KH2PO41.0g，MgSO40.5g，NaCl2g，CaCO35g，其中為反硝化細菌提供氮源的是 　KNO3　，富集培養的目的是 　對反硝化細菌進行擴增　。
（2）將富集后的樣品進行梯度稀釋后，使用 　涂布器　（填工具）將樣液均勻涂布在BTB培養基（BTB培養基初始pH＝6.8，BTB是酸堿指示劑，酸性條件下為黃色，中性條件下為綠色，堿性條件下為藍色）上，每個稀釋度下涂布3個培養基是為了 　設置重復，取平均值，減少實驗誤差　，放在30℃環境中培養2～3天后，挑選周圍顯 　藍　色的單菌落在固體培養基上劃線分離，獲得純菌株。
（3）將液體培養基導入大試管中，將杜氏小試管倒立放入大試管中，試管中的氣體排盡，接入純菌株，30℃恒溫培養5～7d，觀察到小管內有氣泡，檢測到N20，即可鑒定純菌株為目的菌。不能依據培養液中硝酸鹽的濃度變低來鑒定目的菌，原因是 　其他微生物也能利用硝酸鹽進行代謝，硝酸鹽濃度同樣會降低　。
（4）向幾組等量的滅菌后的反硝化培養基中分別以1%、3%、5%、7%和10%的接種量接入菌株N1，在30℃，120r/min搖床震蕩培養，24h后測量N等指標，結果如圖所示：
①本研究的目的是 　探究反硝化細菌投菌量（接種量）對反硝化效果的影響　。
②當投菌量達到 　5%　時，反硝化效果最好，N和總脫氮率均較高。當投菌量繼續增加，N和總脫氮率反而下降，推測可能的原因是 　投菌量過大，使培養基中的碳源很快消耗完，細菌數量下降；或是由于投菌量過大，耗氧速度加快，使體系中氧氣供應不足，不利于細菌生長和代謝　（答1點）。
【考點】微生物的選擇培養（稀釋涂布平板法）．
【專題】圖像坐標類簡答題；微生物的分離、培養和應用．
【答案】（1）KNO3 對反硝化細菌進行擴增
（2）涂布器 設置重復，取平均值，減少實驗誤差 藍
（3）其他微生物也能利用硝酸鹽進行代謝，硝酸鹽濃度同樣會降低
（4）探究反硝化細菌投菌量（接種量）對反硝化效果的影響 5% 投菌量過大，使培養基中的碳源很快消耗完，細菌數量下降；或是由于投菌量過大，耗氧速度加快，使體系中氧氣供應不足，不利于細菌生長和代謝
【分析】微生物接種常用的兩種方法：
①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過足夠稀釋后，均勻涂布在培養基表面，經培養后，可形成單菌落。
【解答】解：（1）培養基的成分主要包括碳源、氮源、水、無機鹽等，培養基中KNO3含有N，可以提供氮源。富集培養的目的是對反硝化細菌進行擴增，增加目的菌落的數量。
（2）稀釋涂布平板法用到涂布器將樣液均勻涂布在BTB培養基上，每個稀釋度下涂布3個培養基是為了設置重復，取平均值，減少實驗誤差；分析題干，反硝化細菌可以產生堿性物質，BTB是酸堿指示劑堿性條件下為藍色，放在30℃環境中培養2～3天后，挑選周圍顯藍色的單菌落在固體培養基上劃線分離，獲得純菌株。
（3）反硝化細菌和其他微生物都能利用硝酸鹽進行代謝，硝酸鹽濃度同樣會降低，因此不能依據培養液中硝酸鹽的濃度變低來鑒定目的菌。
（4）①分析題干，該實驗的自變量是菌株N1的接種量，因變量是反硝化效果，因此可知，本研究的目的是探究反硝化細菌投菌量（接種量）對反硝化效果的影響。
②分析圖，當投菌量達到5%時，反硝化效果最好，—N和總脫氮率均較高。當投菌量繼續增加，—N和總脫氮率反而下降，因為投菌量過大，使培養基中的碳源很快消耗完，細菌數量下降；或是由于投菌量過大，耗氧速度加快，使體系中氧氣供應不足，不利于細菌生長和代謝。
故答案為：
（1）KNO3 對反硝化細菌進行擴增
（2）涂布器 設置重復，取平均值，減少實驗誤差 藍
（3）其他微生物也能利用硝酸鹽進行代謝，硝酸鹽濃度同樣會降低
（4）探究反硝化細菌投菌量（接種量）對反硝化效果的影響 5% 投菌量過大，使培養基中的碳源很快消耗完，細菌數量下降；或是由于投菌量過大，耗氧速度加快，使體系中氧氣供應不足，不利于細菌生長和代謝
【點評】本題考查了微生物的培養和分離的相關知識，意在考查考生理解所學知識要點，把握知識間內在聯系的能力；能運用所學知識，對生物學問題作出準確的判斷，難度適中。
21世紀教育網 www.21cnjy.com 精品試卷·第 2 頁 （共 2 頁）
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