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2024～2025 學(xué)年度第二學(xué)期期中重點(diǎn)校聯(lián)考
高二生物學(xué)參考答案
一、選擇題（本題共 20 小題，1～10 每題 2分，11～20 每題 3分，共 50 分，
在每題列出的四個(gè)選項(xiàng)中，只有一項(xiàng)是最符合題目要求的。）
1~5 ADCDC 6~10 CCBDB 11~15 CBDBB 16~20 BDDDA
二、非選擇題（本題共 4小題，共 50 分，除標(biāo)明外，每空 1分。）
21.（12分）
（1）擴(kuò)大培養(yǎng) 前 酸
（2）稀釋涂布平板 5.2×108（2分） 小
當(dāng)兩個(gè)或者多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落
（3）維生素 B1（2分） 3與 5的交界處（2分）
22.（11分）
（1）纖維素酶和果膠酶 葉
（2）細(xì)胞質(zhì)（基因） 細(xì)胞核（基因）
（3）高 Ca2+-高 pH融合法 再生出細(xì)胞壁
同一個(gè)雜種融合原生質(zhì)體 C
（4）（總）DNA M1、M2 1
23.（12分）
（1）血清 定期更換培養(yǎng)液 維持培養(yǎng)液的 pH
（2）脾臟 乙和丙 既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體
（3）抗原抗體的特異性結(jié)合 能產(chǎn)生抗 cTnI（或所需）抗體的雜交瘤細(xì)胞
（4）與待測(cè)抗原結(jié)合，并催化檢測(cè)底物生成產(chǎn)物（2分）
（5）40~55（2分）
24.（15分）
（1）使 DNA聚合酶能夠從引物的 3′端開(kāi)始連接脫氧核苷酸 低
（2）β鏈（2分）
（3）5′（2分） Kpn I GGTACCATGCCAATC（2分）
（4）③（2分）
（5）乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子（2分） 終止子
（6）顯微注射法
重點(diǎn)校期中高二生物學(xué)參考答案 第 1 頁(yè)（共 1 頁(yè)）2024~2025學(xué)年度第二學(xué)期期中重點(diǎn)校聯(lián)考
高二生物學(xué)
出題學(xué)校：蘆臺(tái)一中 楊村一中
第Ⅰ卷(共50分)
一、選擇題(本題共20小題, 1~10每題2分, 11~20每題3分, 共50分,在每題列出的四個(gè)選項(xiàng)中，只有一項(xiàng)是最符合題目要求的。
1.無(wú)菌操作是生物實(shí)驗(yàn)中重要的基本操作，下列過(guò)程不需要嚴(yán)格無(wú)菌操作的是
A.傳統(tǒng)泡菜的制作 B.酵母菌的純培養(yǎng)
C.動(dòng)物細(xì)胞的傳代培養(yǎng) D.花藥離體培養(yǎng)
2.利用傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)制作的果酒、腐乳、泡菜等極大地豐富了人們的飲食，它們是我國(guó)傳統(tǒng)飲食文化的重要組成部分。下列有關(guān)敘述正確的是
A.制作果酒、腐乳和泡菜所利用的主要微生物均含有細(xì)胞核
B.制作腐乳時(shí)主要利用了毛霉產(chǎn)生的淀粉酶將淀粉分解成單糖
C.泡菜咸而不酸的原因可能是加入食鹽過(guò)少導(dǎo)致雜菌大量增殖
D.在果酒發(fā)酵基礎(chǔ)上進(jìn)行果醋制作，需升高溫度、增加通氣性
3.下列關(guān)于細(xì)胞工程的說(shuō)法，正確的是
A.滅活的病毒失去了其抗原結(jié)構(gòu)，但保留感染能力，可用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合
B.植物細(xì)胞培養(yǎng)的主要目的是獲得植物在生長(zhǎng)和生存過(guò)程中必需的次生代謝物
C.囊胚從透明帶中伸展出來(lái)的過(guò)程稱(chēng)為“孵化”
D.源于自身的iPS細(xì)胞移植回患者后，患者需服用免疫抑制劑
4.下表是幾種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)。據(jù)表分析，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是
限制酶 HindII AluI BamHI Sau3AI
識(shí)別序列及切割位點(diǎn) 5'-GTY↓RAC-3' 5'-AG↓CT-3' 5'-G↓GATCC-3' 5'-↓GATC-3'
(注: Y表示C或T, R表示A或G)
A.限制酶作用于磷酸二酯鍵
B.一種限制酶可識(shí)別不只一種核苷酸序列
C. AluI切割后的 DNA片段可用T4 DNA 連接酶連接
D.將BamHI和 Sau3AI切割形成的片段連接后，一定能被這兩種酶識(shí)別并切割
5.在微生物學(xué)中使用選擇培養(yǎng)基讓特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的過(guò)程稱(chēng)為選擇培養(yǎng)。在選擇培養(yǎng)基中添加一些特殊物質(zhì)，則可配制成鑒別培養(yǎng)基。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是
A.培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，需在培養(yǎng)基中添加維生素
B.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離出的細(xì)菌可能不止一種
C.固氮菌能在不加氮源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，說(shuō)明固氮菌為自養(yǎng)型生物
D.在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入剛果紅，可篩選纖維素分解菌
6.下列有關(guān)發(fā)酵工程的敘述，正確的是
A.缺少糖源時(shí)，醋酸菌可將乙醇直接轉(zhuǎn)化為醋酸
B.發(fā)酵結(jié)束后，可采用過(guò)濾、沉淀等方法獲得微生物代謝產(chǎn)物
C.接種環(huán)可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達(dá)到徹底滅菌
D.啤酒發(fā)酵過(guò)程中大部分糖的分解和代謝物的生成都在后發(fā)酵階段完成
7.植物細(xì)胞工程在農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)等方面有著廣泛應(yīng)用，下列敘述錯(cuò)誤的是
A.利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)紫草寧的主要原理是細(xì)胞增殖
B.利用單倍體育種技術(shù)培育單育1號(hào)煙草大大縮短了育種年限
C.利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行作物脫毒能獲得大量抗毒幼苗
D.利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)培育雜種植株的過(guò)程體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性
8.下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)的相關(guān)說(shuō)法，正確的是
A.瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，DNA分子越大，遷移速率越快
B.過(guò)濾液放入4℃冰箱或加入預(yù)冷的酒精都可抑制DNA酶的活性
C.利用酒精初步分離DNA 與蛋白質(zhì)的原理是DNA溶于酒精
D.提取到的絲狀物與二苯胺溶液充分混勻后即可變?yōu)樗{(lán)色
9.科學(xué)家利用食蟹猴的胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)形成了類(lèi)似囊胚的結(jié)構(gòu) (類(lèi)囊胚)，進(jìn)一步培育形成食蟹猴個(gè)體，過(guò)程如圖所示。下列敘述正確的是
A.過(guò)程Ⅰ類(lèi)似于植物的脫分化過(guò)程
B.過(guò)程Ⅱ需經(jīng)過(guò)核移植和胚胎移植過(guò)程
C.若要形成多個(gè)胚胎，則要注意將①均等分割
D.胚胎干細(xì)胞存在于早期胚胎中，具有分化為所有組織、器官的潛能
10.下列有關(guān)基因工程的說(shuō)法，正確的是
A.基因工程常以抗生素抗性基因作為目的基因
B.限制酶只能切割雙鏈DNA片段，不能切割煙草花葉病毒的核酸
C.質(zhì)粒是基因工程最常用的載體，從生物體內(nèi)獲取后可直接使用
D.限制酶主要從原核生物中分離純化而來(lái)，所以也能剪切自身的DNA
11.圖示植物原生質(zhì)體制備、分離和檢測(cè)的流程。下列敘述錯(cuò)誤的是
A.步驟①可添加相關(guān)酶以去除細(xì)胞壁，需嚴(yán)格控制酶解液的濃度等條件
B.原生質(zhì)體密度介于圖中甘露醇和蔗糖溶液密度之間
C.步驟②吸取原生質(zhì)體放入無(wú)菌水中清洗
D.臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)后應(yīng)選擇未被染成藍(lán)色的原生質(zhì)體繼續(xù)培養(yǎng)
12. PCR技術(shù)的每輪循環(huán)可以分為變性、復(fù)性、延伸三步。引物與其模板鏈形成的雜合分子的解鏈溫度稱(chēng)為引物的 Tm值。下列敘述正確的是
A. PCR循環(huán)過(guò)程控制的溫度高低關(guān)系為變性>復(fù)性>延伸
B.每次循環(huán)需要的兩種引物數(shù)量相同
C.若設(shè)計(jì)的引物與模板不完全配對(duì)，可適當(dāng)提高復(fù)性溫度
D.引物的 Tm值越接近，引物之間越容易結(jié)合
13.大麗花是多年生草本植物，除具觀賞價(jià)值外，還具有藥用價(jià)值。大麗花在栽培過(guò)程中易受病毒感染，造成品質(zhì)退化。研究小組嘗試通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得脫毒苗，操作流程如圖所示。下列相關(guān)敘述正確的是
A.使用MS培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)將莖尖的形態(tài)學(xué)上端朝上，并完全插入到培養(yǎng)基中
B.過(guò)程①為脫分化，該過(guò)程無(wú)需光照，期間可能會(huì)發(fā)生基因突變或基因重組
C.過(guò)程②的實(shí)質(zhì)是基因選擇性表達(dá)，該過(guò)程只進(jìn)行有絲分裂不進(jìn)行細(xì)胞分化
D.若取大麗花不同部位的細(xì)胞，則經(jīng)圖示培養(yǎng)獲得的植株染色體數(shù)目可能不同
14.研究人員發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑在土壤中不易被降解，長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致土壤被污染。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按下圖程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌(已知該除草劑是一種含氮有機(jī)物，在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明)。下列相關(guān)敘述正確的是
A.圖中所示接種方法都可用于分離微生物和活菌計(jì)數(shù)
B.圖中操作Ⅰ用平板劃線(xiàn)法接種時(shí)，接種環(huán)至少需要灼燒6次
C.培養(yǎng)基上形成的5個(gè)菌落中的細(xì)菌都能以該除草劑為氮源
D.操作Ⅲ中透明圈越大的菌落降解該除草劑的能力一定越強(qiáng)
15.關(guān)于下圖所示模型，敘述正確的是
A.若為植物體細(xì)胞雜交模型，則需對(duì)A、B脫分化后再誘導(dǎo)融合
B.若為動(dòng)物體細(xì)胞核移植模型，則B可能為去核的卵母細(xì)胞
C.若為制備單克隆抗體模型，則C→D的原理是動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性
D.若為哺乳動(dòng)物體外受精模型，則A、B細(xì)胞都需培養(yǎng)到MII期
16.下列關(guān)于發(fā)酵工程的敘述，正確的是
A.發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是菌種的選育，優(yōu)良菌種可通過(guò)誘變育種獲得
B.通過(guò)發(fā)酵獲得的單細(xì)胞蛋白，常用于生產(chǎn)微生物飼料
C.利用發(fā)酵工程生產(chǎn)的微生物農(nóng)藥，作為化學(xué)防治的重要手段
D.發(fā)酵工程的產(chǎn)品是人們利用微生物的細(xì)胞代謝獲得的代謝產(chǎn)物
17.在制備單克隆抗體的過(guò)程中HAT選擇培養(yǎng)基可以篩選出融合成功的雜交瘤細(xì)胞，一種雜交瘤細(xì)胞只能產(chǎn)一種抗體。科學(xué)家通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，將兩株不同的雜交瘤細(xì)胞(A和B)融合形成雙雜交瘤細(xì)胞AB。雙雜交瘤細(xì)胞能夠懸浮在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖，可以產(chǎn)生雙特異性抗體AB。據(jù)圖分析，下列說(shuō)法正確的是
A.用抗原α和β處理雜交瘤細(xì)胞A、B后再誘導(dǎo)二者融合
B.雜交瘤細(xì)胞A、B混合并誘導(dǎo)融合后，利用HAT選擇培養(yǎng)基篩選出雙雜交瘤細(xì)胞AB
C.雙雜交瘤細(xì)胞同時(shí)識(shí)別α、β抗原后，才能產(chǎn)生雙特異性抗體
D.對(duì)培養(yǎng)到一定密度的雙雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，不需要使用蛋白酶使之分散
18. 目前，精子載體法逐漸成為最具誘惑力的制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物方法之一。該方法以精子作為外源基因的載體，使精子攜帶外源基因進(jìn)入卵細(xì)胞受精。如圖表示利用該方法制備轉(zhuǎn)基因鼠的基本流程。下列相關(guān)說(shuō)法正確的是
A.經(jīng)過(guò)過(guò)程①獲得的精子可以直接和卵細(xì)胞發(fā)生受精作用
B.為了獲得更多的早期胚胎，常用性激素對(duì)供體進(jìn)行處理，從而獲得更多的卵母細(xì)胞
C.過(guò)程③至少培養(yǎng)到囊胚才能進(jìn)行胚胎移植到母鼠子宮
D.為提高精子載體法的轉(zhuǎn)化率，必須將外源基因?qū)刖拥念^部才有可能使外源基因進(jìn)入受精卵
19.通過(guò)轉(zhuǎn) Bt基因技術(shù)獲得抗蟲(chóng)棉是我國(guó)科學(xué)家的重大科研成果。下列有關(guān)轉(zhuǎn) Bt基因技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是
A.將重組 Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌前，用Ca 處理農(nóng)桿菌可促進(jìn)轉(zhuǎn)化
B.基因表達(dá)載體中啟動(dòng)子是RNA 聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程
C.可利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，將插入T-DNA中的 Bt基因轉(zhuǎn)移到棉花細(xì)胞染色體DNA上
D.若某抗蟲(chóng)棉僅一條染色體上插入一個(gè) Bt基因，則該植株自交后代抗蟲(chóng)個(gè)體占1/2
20.若要通過(guò)PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因柳枝稷草中是否含有正確插入的XplA 和XplB基因，應(yīng)選擇的引物組合是
A. 引物1+引物3 B. 引物1+引物2
C. 引物2+引物3 D. 引物3+引物4
第Ⅱ卷(共50分)
二、非選擇題(本題共4小題，共50分)
21.(12分)發(fā)酵工程在醫(yī)藥上的應(yīng)用非常廣泛，產(chǎn)黃青霉菌是一種廣泛存在于自然界中的霉菌，是生產(chǎn)青霉素的重要工業(yè)菌種。工業(yè)上生產(chǎn)青霉素的發(fā)酵工程流程如圖1所示。回答相關(guān)問(wèn)題：
(1)接種之前的過(guò)程①、②都屬于 。在制備該培養(yǎng)基時(shí)，除了添加必要的營(yíng)養(yǎng)成分外，還需要將pH在滅菌 (填“前”或“后”)調(diào)至 性。
(2)可采用 法對(duì)產(chǎn)黃青霉菌進(jìn)行分離純化并計(jì)數(shù)，在5個(gè)平板上各接種稀釋倍數(shù)為10 的菌液樣品0.1mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上的菌落數(shù)分別為48、50、54、56、52，則每升原菌液樣品中細(xì)菌數(shù)為 個(gè)。該方法所統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌數(shù)通常會(huì)比實(shí)際菌落數(shù)目偏 (填“大”或“小”), 原因是 。
(3)研究發(fā)現(xiàn)，某些青霉菌屬于維生素營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，失去合成某種維生素的能力，只有在基本培養(yǎng)基中補(bǔ)充所缺乏的維生素后才能生長(zhǎng)。某研究小組篩選出某種維生素營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株，為了進(jìn)一步確定該菌株的具體類(lèi)型，他們把15種維生素按照不同組合分為5個(gè)小組，用5個(gè)濾紙片分別蘸取不同小組的維生素，然后覆于接種后的瓊脂平板上培養(yǎng)一段時(shí)間。結(jié)果如表：
組別 維生素組合
1 維生素 A 維生素 B 維生素B 維生素 B 維生素B
2 維生素 C 維生素 B 維生素D 維生素 E 煙酰胺
3 葉酸 維生素 B 維生素D 膽堿 泛酸鈣
4 對(duì)氨基苯甲酸 維生素 B。 維生素E 膽堿 肌醇
5 生物素 維生素 B 煙酰胺 泛酸鈣 肌醇
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示1組和2組濾紙片周?chē)a(chǎn)生生長(zhǎng)圈(圖2)，則該營(yíng)養(yǎng)缺陷型大腸桿菌不能合成的維生素是 。若該菌株為葉酸和生物素的雙營(yíng)養(yǎng)缺陷型大腸桿菌，則其在培養(yǎng)基上形成菌落的位置是 。
22.(11分)甲植物細(xì)胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究小組用甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交相關(guān)研究，基本過(guò)程包括獲取原生質(zhì)體、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合、篩選融合細(xì)胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株。回答下列問(wèn)題：
(1)獲取原生質(zhì)體時(shí)常選擇 酶去掉細(xì)胞壁，為了便于觀察細(xì)胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的 為外植體。
(2)在原生質(zhì)體融合前，需對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行處理，使甲原生質(zhì)體的 和乙原生質(zhì)體的 均失活。
(3)人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的化學(xué)法包括聚乙二醇融合法、 等，原生質(zhì)體融合完成的標(biāo)志是 ，將融合原生質(zhì)體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質(zhì)體分散固定在平板中，并獨(dú)立生長(zhǎng)、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細(xì)胞源于 ，下列各項(xiàng)中，得出上述結(jié)論的理由不包括 。
A.甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)處理后失活，無(wú)法正常生長(zhǎng)、分裂
B.同種融合的原生質(zhì)體因甲或乙原生質(zhì)體失活而不能生長(zhǎng)、分裂
C.培養(yǎng)基含有抑制物質(zhì)，只有雜種細(xì)胞才能正常生長(zhǎng)、分裂
D.雜種細(xì)胞由于結(jié)構(gòu)和功能完整可以生長(zhǎng)、分裂
(4)用PCR技術(shù)鑒定再生植株。已知甲植物細(xì)胞核具有特異性DNA序列a，乙植物細(xì)胞質(zhì)具有特異性DNA序列b；M 、M 為序列a的特異性引物，N 、N 為序列b的特異性引物。完善實(shí)驗(yàn)思路：
I.提取純化再生植株的 ，作為PCR擴(kuò)增的模板。
Ⅱ.將步驟Ⅰ的提取物加入PCR反應(yīng)體系，選擇 為特異性引物，擴(kuò)增序列a；用同樣的方法擴(kuò)增序列b。
Ⅲ.得到的2個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，若每個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預(yù)期的 個(gè)條帶，則可初步確定再生植株來(lái)自于雜種細(xì)胞。
23.(12分)肌鈣蛋白I(cTnI)是人體心肌細(xì)胞中的肌鈣蛋白的一種亞基，其在血液中含量上升是心肌損傷的特異性指標(biāo)。為制備抗cTnI的單克隆抗體，科研人員完成了以下過(guò)程。請(qǐng)據(jù)圖分析回答下列問(wèn)題：
(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基除了添加葡萄糖、氨基酸等必要的營(yíng)養(yǎng)成分外，往往還需加入一定量的 ，以滿(mǎn)足動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)需要。可采用 的方法防止有害代謝物的積累。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO 的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO 的作用是 。
(2)每隔2周用cTnI作為抗原注射小鼠1次，3 次注射后的第3天，取 內(nèi)部分組織制成細(xì)胞懸液與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合，需用特定的選擇培養(yǎng)基對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行篩選；甲、乙、丙中，只含雜交瘤細(xì)胞的是 ，雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是 。
(3)過(guò)程②表示將乙細(xì)胞接種到多孔培養(yǎng)板上，進(jìn)行抗體陽(yáng)性檢測(cè)，之后稀釋、培養(yǎng)、再檢測(cè)，并多次重復(fù)上述操作，檢測(cè)原理是 ，其目的是篩選獲得 。
(4)酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法是醫(yī)學(xué)上常用的定量檢測(cè)抗原的方法，具體原理如圖所示：
據(jù)圖分析，固相抗體和酶標(biāo)抗體均能與抗原結(jié)合，這是由于不同抗體能與同一抗原表面的不同部位結(jié)合。該檢測(cè)方法中，酶標(biāo)抗體的作用是 ，可通過(guò)測(cè)定產(chǎn)物量來(lái)判斷待測(cè)抗原量。
(5)為鑒定單克隆抗體識(shí)別抗原的具體區(qū)域，可將抗原(cTnI)進(jìn)行逐步截短，分別與純化的單克隆抗體反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示 (“+”表示有反應(yīng), “-”表示無(wú)反應(yīng), “aa”表示氨基酸)。
結(jié)果證明該單克隆抗體識(shí)別抗原 (cTnI蛋白)的區(qū)域大概為 (填“40~50”、 “40~55”或“40~60”) 位氨基酸。
24.(15分)乳糖不耐受是機(jī)體乳糖酶分泌少，不能完全消化分解母乳或牛乳中的乳糖所引起的非感染性腹瀉。科學(xué)家將大腸桿菌中獲得的乳糖酶基因，利用基因工程技術(shù)導(dǎo)入奶牛基因組中，獲得的轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中乳糖含量大大降低，用到的質(zhì)粒和目的基因的部分結(jié)構(gòu)如圖1和圖2所示，不同限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (
Hind III
)
(1)用PCR技術(shù)從大腸桿菌基因組DNA中擴(kuò)增乳糖酶基因時(shí)，引物的作用是 ，所用的引物越短，引物特異性就越 (填“高”或“低”)。
(2)圖2中乳糖酶基因以 (填“a鏈”或“β鏈”)為模板進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。
(3)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為保證乳糖酶基因的正確復(fù)制以及與圖1質(zhì)粒的正確連接，在設(shè)計(jì)PCR 引物時(shí)，應(yīng)在與β鏈結(jié)合的引物的 (填“3'”或“5'”)端添加 (填限制酶)的識(shí)別序列。根據(jù)圖2及表格信息，寫(xiě)出該引物的部分序列： (寫(xiě)出15個(gè)堿基即可)。
(4)構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用DNA連接酶，下列屬于該酶催化底物的是 。
(5)在基因表達(dá)載體中，為了使乳糖酶基因在牛體內(nèi)成功表達(dá)，應(yīng)將目的基因介于 (填“乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子”或“大腸桿菌乳糖酶基因的啟動(dòng)子”)和 之間。
(6)為獲得符合生產(chǎn)要求的轉(zhuǎn)基因牛，最常用的方法是利用 法將乳糖酶基因?qū)肱５氖芫阎小?/p>

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