資源簡介

(共18張PPT)
如何將DNA提取出來，并進行鑒定呢
AJI
DNA
DNA
1.掌握DNA粗提取與鑒定的實驗原理
2.理解并掌握DNA粗提取的過程與鑒定的方法
學習目標
自學指導：閱讀課本P74-75內容，回答下列問題(4min )
1.該實驗的實驗目的、實驗原理、實驗材料、試劑及其作用分別是
2.該實驗的方法步驟可以簡單的歸納為哪四步
3.研磨的目的是
4.如何取上清液(兩種方法)
5.上清液中除DNA之外，可能含有哪些雜質 低溫放置幾分鐘的作用是
6.攪拌時應輕緩、并沿一個方向的目的是
與蛋白質。 最低。利用這一原理，可以使
(2)DNA 在不同濃度的NaCl 溶液中的溶解度不同， DNA 在鹽溶液中溶解或析出。
溶解度
2.鑒定DNA 的原理
在一定溫度下( 沸 水 浴 ) , DNA 遇_二苯胺試劑會呈現藍 色
0.14mol/L 2mol/L NaCl濃 度
1.提取DNA 的原理
利用DNA、RNA、 蛋白質和脂質等在物理和化學性 當NaCl 濃度為 2 mol/L 時，
DNA 的溶解度最大，濃度為
0.14 mol/L時 ，DNA的溶解度
探究和實踐
一、實驗原理
(1)DNA 不溶于_酒精，某些蛋白質_溶于酒精，利
DNA 的粗提取與鑒定
探究和實踐 DNA 的粗提取與鑒定
二 、目的要求： 1.了解DNA的物理化學性質，理解DNA 粗提取和鑒定的原理。
2.學會DNA粗提取的方法以及利用二苯胺試劑對DNA 進行鑒定。
三 、材料用具 ：
1.材料：DNA 含量相對較高的生物組織，如新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花和豬肝等。 (注意：不能選擇哺乳動物成熟的紅細胞，因為哺乳動物成熟的紅細胞中沒有細胞核 和線粒體，幾乎不含DNA。)
豬肝
洋蔥
菠菜
花菜
香蕉
探究和實踐 的粗提取與鑒定
2.試劑及作用 (1)研磨液 ——溶解并提取DNA
(2)體積分數為95%的酒精 — 析 出DNA
(3)2mol/L的NaCl溶液 — 溶 解DNA
(4)二苯胺試劑 — 鑒定DNA, 要現配現用
(5)蒸餾水 滴入NaCl溶液中，使其濃度逐漸下降至0.14mol/L, 從而
研磨液成分
作用
SDS
使蛋白質變性
EDTA
抑制DNA酶
Tris-HCl緩沖液
穩定DNA
研磨液、二苯胺的配制方法在課本P117
析出DNA
DNA
通 "
燒杯、量筒、玻璃棒、研缽、紗布、漏斗、 離心機 電子天平
試管、試管架、剪刀
探究和實踐 DNA 的粗提取與鑒定
探究和實踐 DNA 的粗提取與鑒定
四 、方 法 步 驟 ( 四 目的：破碎細胞，使核物質容易溶解在研磨液中
1.研磨洋蔥： 稱 取 約 3 0 總，切碎，然后放入研缽中，倒入 10mL_ 研磨液 ，充分研磨。
2.去除雜質，取上清液： 上清液中除DNA之外，可能含有核蛋白、多糖等雜質
方案一：在漏斗中墊上紗布，將洋 僅過濾到燒杯中，在4℃
冰箱中放置幾分鐘后，再取 上清液 。
方案二：也 直接將研磨液倒入塑料離心管中，在1500r/min 的
轉速下離心 上清液放入燒杯中。
抑制核酸水解酶的活性，進而抑制DNA降解；抑制
DNA 分子運動，使DNA 易形成沉淀析出； 過濾取上清液
方案一： 在上清液中加入體積相等的、 預冷的酒精 溶液(體積分
數為95%),靜置2～3min, 溶液中出現的白色絲狀物 就是粗提取 的DNA 。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去 上面的水分； 減少DNA斷裂，以便獲得較完整的DNA分子
方案二：將溶液倒入塑料離心管中，在10000r/min的轉速下離心
5min, 棄上清液，將管底的沉 淀 物 ( 粗 提 取 的DNA) 晾 干。
DNA 的粗提取與鑒定
低溫可抑制核酸水解酶的活性，進而抑制DNA降解； 低溫抑制DNA分子運動，使DNA易形成沉淀析出；
低溫有利于增加DNA的柔韌性，減少斷裂。
探究和實踐
四 、方 法 步 驟 ：
3.析出DNA:
用冷卻的酒精析出DNA
取兩支20mL 的試管，各加入2 mol/L的NaCl 溶液5mL。 將絲狀物
或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中。然后，向兩支試管中 各加入4mL 的_二苯胺試劑 。混合均勻后，將試管置于沸 水 中 加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。
空白對照組如何設計
在等體積的NaCl 溶液中加入二苯胺試劑，將試管置于同等沸水浴中加熱5min。
的粗提取與鑒定
溶液藍色的深淺與溶液中DNA的含量的多少有關
水浴 加熱
DNA 的鑒定
四、方法步驟： 提取物顏色與DNA的純度有關
探究和實踐
4.DNA的鑒定：
對照組
實驗組
DNA
探究和實踐 DNA 的粗提取與鑒定
(1)選什么樣的材料實驗更易成功 用洋蔥做材料，為什么要充分研磨
含DNA的生物材料都可以，選取DNA含量相對較高的生物組織，成功率更大。
充分研磨，可以破壞細胞壁，裂解細胞，釋放DNA。
(2)豬血和雞血，哪個適合用作提取DNA 的材料 操作時如何防止血液凝
固
豬血(哺乳動物的成熟紅細胞)無細胞核，不適合；
雞血中紅細胞有核DNA, 且核DNA的量較多，適合。
雞血中加入檸檬酸鈉，可防止血液凝固。
(3)如果用雞血動物細胞做材料，也需要研磨裂解釋放細胞中的DNA 嗎
加入清水，讓細胞吸水脹破，釋放DNA。 那 豬 肝 呢
1、操作提示
(1)以血液為實驗材料時，每100 mL 血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止 血
液凝固
O
(2)加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇 DNA 分子的斷裂 導致DNA分子不能形成絮狀沉淀。
2、關鍵點撥
1.利用動物細胞提取DNA 時，破碎細胞的方法：動物細胞無細胞壁，可 直接_使其吸水漲破。
2.不能選用哺乳動物成熟的紅細胞作為實驗材料，原因是哺乳動物成熟 的紅細胞 無_細胞核。
3.提純DNA時，選用體積分數為95%的冷酒精的原因：體積分數為95% 的冷酒精純效果 更佳。
3、操作注意事項：
(1)研磨液的作用為溶解并提取 DNA;體積分數為95%的酒精的作用為析 出DNA, 使DNA與雜質分開；濃度為2mol/L的NaCl溶液的作用為溶解絲狀 物用于DNA的鑒定。
(2)在將待鑒定的提取物加入濃度為2mol/L的NaCl溶液中溶解時， 需要不 斷攪拌以增加溶解的 DNA 的量，建議攪拌3min 以上。
(3)二苯胺試劑要現配現用，以保證實驗效果。同時，加入二苯胺試劑后沸水 浴處理的時間要在5min 及以上，且要等到冷卻后再觀察效果，這樣才可 以觀察到較為明顯的顯色反應。
整理背誦
1.該實驗的實驗目的、實驗原理、實驗材料、試劑及其作用分別是
I 2. 該實驗的方法步驟可以簡單的歸納為哪四步
3.研磨的目的
4.取上清液(兩種方法)
5.上清液中除DNA 之外，含有的雜質
低溫放置幾分鐘的作用
6.攪拌時應輕緩、并沿一個方向的目的
當堂檢測
1. 下列關于“DNA的粗提取和鑒定”實驗的原理的敘述，錯誤的是( ) R
A. 利用DNA不溶于酒精溶液，而蛋白質能溶于酒精溶液，可將DNA與蛋白質 分離
B. 利用高溫能使蛋白質變性，卻對DNA 沒有影響的特性，可將DNA 與蛋白質 分離
C. 在用預冷的酒精沉淀DNA 時，要用玻璃棒沿一個方向攪拌，防止DNA斷裂
D. 利用DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液，可將提取的絲狀物或沉淀物溶解于 NaCl溶 液 中
2. 下列關于DNA粗提取與鑒定的敘述，正確的是( )
A. 取材時可選用雞血、洋蔥、香蕉等富含DNA的材料進行實驗
B. 將白色絲狀物置于2mol/L的NaCl溶液中，離心后棄去上清液
C. 可將洋蔥置于清水中，細胞吸水破裂后將DNA釋放出來
D. 鑒定DNA 時，應將絲狀物直接加入到二苯胺試劑中并進行沸水浴
4. 下列關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是( )A · 羊的 成熟紅細胞可作為提取DNA 的材料
B. 提取植物細胞的DNA時，需要加入一定量的研磨液
C. 預冷的酒精溶液能抑制核酸水解酶活性，防止DNA水解
D. 在沸水浴條件下， DNA與二苯胺試劑反應呈現藍色
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