資源簡介

作業(yè)20　重點突破練(四)
(分值：100分)
第1～3題，每題4分；第4～11題，每題5分，共52分。
題組一　基因工程的工具酶和載體
1．(2024·嘉興海鹽二中高二期中)如圖表示不同的限制酶在目的基因的提取和基因表達載體的構(gòu)建中的作用，下列有關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A．限制酶沿識別序列的中軸線兩側(cè)將DNA兩條鏈切開
B．在圖1和圖2中將分別產(chǎn)生4個和2個黏性末端
C．限制酶切割的是特定核苷酸序列之間的磷酸二酯鍵和氫鍵
D．圖示中酶1、酶2和酶3可以為不同種類的限制酶
2．用Xho Ⅰ 和Sal Ⅰ 兩種限制性內(nèi)切核酸酶分別處理同一DNA片段，酶切位點及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。下列敘述不正確的是(　　)
A．圖1中兩種酶識別的核苷酸序列不同
B．圖2中酶切產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組DNA分子
C．泳道①中是用Sal Ⅰ處理得到的酶切產(chǎn)物
D．圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA
3．作為基因工程的運輸工具——載體，必須具備的特征及理由對應(yīng)不正確的是(　　)
A．含有復(fù)制起點，能夠獨立自主復(fù)制并穩(wěn)定存在，以便目的基因能夠在宿主細胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制
B．具有多個限制酶切割位點，以便于目的基因的插入
C．具有篩選作用的標記基因，以便目的基因能夠準確定位與其結(jié)合
D．對宿主細胞無傷害，以不影響宿主細胞的正常生命活動
題組二　PCR技術(shù)
4．(2023·溫州高二期末)研究表明，DNA合成先要沿子鏈合成方向以DNA為模板合成引物，因為DNA聚合酶只能催化脫氧核苷酸加到已有核酸鏈的游離3′端羥基上，而不能使脫氧核苷酸自身發(fā)生聚合，如圖所示。
據(jù)圖分析，下列關(guān)于圖中“引物”的敘述，正確的是(　　)
A．是一小段單鏈DNA
B．在DNA合成后期會被切除
C．合成的方向為3′→5′
D．合成時需DNA聚合酶的催化
5．下列有關(guān)PCR技術(shù)的敘述，不正確的是(　　)
A．是聚合酶鏈式反應(yīng)的簡稱，是在DNA聚合酶作用下，在體外擴增DNA片段的技術(shù)
B．在用PCR技術(shù)擴增DNA時，DNA的復(fù)制過程與細胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程類似
C．PCR反應(yīng)只需在一定的緩沖溶液中提供DNA模板以及四種脫氧核苷酸
D．PCR一般經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)分為變性、退火、延伸
6．(2024·寧波高二期末)免疫PCR是對微量抗原的一種檢測方法。如圖是利用該技術(shù)檢測牛乳中微量抗生素的流程圖：首先將抗體1固定在微板上，沖洗后加入待檢的牛乳，再加入DNA標記的抗體2，進行PCR擴增，最后進行電泳檢測。下列敘述錯誤的是(　　)
A．免疫PCR技術(shù)適用于微量抗原的檢測
B．第三次沖洗不充分可能導(dǎo)致假陽性現(xiàn)象
C．圖示中的DNA必須是牛乳基因中的DNA片段
D．PCR擴增產(chǎn)物的量與牛乳中抗生素的量呈正相關(guān)
題組三　基因工程的基本操作程序
7．科研人員構(gòu)建了可表達H－M3融合蛋白的重組質(zhì)粒并進行了檢測，該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖所示，其中M3為水母體內(nèi)的綠色熒光蛋白基因。下列有關(guān)敘述正確的是(　　)
A．構(gòu)建重組質(zhì)粒須使用T4 DNA連接酶
B．導(dǎo)入受體細胞內(nèi)的“融合基因”需要兩個啟動子和兩個終止子
C．構(gòu)建H－M3融合基因的目的是有利于檢測H基因能否表達以及表達量
D．為確定H基因定向連接到質(zhì)粒中，可選擇的引物組合有8種
8．(2023·金華高二期末)我國科學(xué)家利用鏈霉菌的靛藍合成酶基因(idgS)及其激活基因(sfp)構(gòu)建基因表達載體(如圖所示)，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入白玫瑰細胞中，獲得藍玫瑰。下列敘述錯誤的是(　　)
A．表達載體中sfp和idgS具有各自的啟動子，表達相互獨立
B．可從鏈霉菌的基因文庫中獲取sfp和idgS
C．在構(gòu)建表達載體時所需的限制酶是BamH Ⅰ、Spe Ⅰ、Sac Ⅰ
D．若受體白玫瑰細胞不變藍，則可說明sfp和idgS未成功導(dǎo)入
9．利用基因工程技術(shù)可使大腸桿菌生產(chǎn)人的胰島素。下列相關(guān)敘述正確的是(　　)
A．人和大腸桿菌在合成胰島素時，轉(zhuǎn)錄和翻譯的場所是相同的
B．DNA連接酶能把兩個黏性末端經(jīng)堿基互補配對后留下的縫隙“縫合”
C．通過檢測，大腸桿菌中沒有胰島素產(chǎn)生，則可判斷重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌后沒有表達
D．在培養(yǎng)大腸桿菌的工程菌過程中，獲得目的基因的工具酶有限制性內(nèi)切核酸酶和DNA聚合酶
題組四　蛋白質(zhì)工程
10．蛋白質(zhì)工程是新崛起的一項生物工程，又稱第二代基因工程。如圖表示蛋白質(zhì)工程流程，下列有關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A．蛋白質(zhì)工程就是根據(jù)人們需要，直接對蛋白質(zhì)進行加工修飾
B．蛋白質(zhì)工程是通過基因修飾或基因合成等方法，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造
C．①②過程分別表示轉(zhuǎn)錄和翻譯
D．蛋白質(zhì)工程是從④開始的
11．(2024·浙江效實中學(xué)高二期中)為心?；颊咦⑸浯髣┝康膖－PA(一種能高效降解血栓的單鏈糖蛋白，主要由血管內(nèi)皮細胞合成、分泌并釋放進血液)會誘發(fā)顱內(nèi)出血。研究證實，將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血等副作用。據(jù)此分析，下列說法錯誤的是(　　)
A．若利用大腸桿菌來生產(chǎn)t－PA，需要對其合成的t－PA進行后期改造
B．改造t－PA的技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程
C．欲將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，應(yīng)直接對蛋白質(zhì)(t－PA)進行改造
D．可利用抗原－抗體雜交技術(shù)來檢測轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌是否分泌了t－PA
12．(16分)基因工程自20世紀70年代興起后，得到了飛速的發(fā)展，目前已成為生物科學(xué)的核心技術(shù)。基因工程的基本操作程序主要包括四個步驟：
(1)獲取目的基因
①如果目的基因的核苷酸序列是已知的，可用________________合成目的基因。
②如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以建立一個包括該種生物所有基因的基因組文庫，或者通過____________方法建立cDNA文庫。
(2)(6分)構(gòu)建重組DNA分子
對于遺傳背景未知的生物，可提取該生物的基因組DNA，用多種__________酶切割成各種不同DNA片段，分別導(dǎo)入大腸桿菌(如圖所示)。由于切割后的基因片段大小不一，有的片段可能含有多個基因，不宜直接導(dǎo)入表達載體，所以可以先將它們分別與克隆質(zhì)粒(如pBR322)連接構(gòu)建重組載體，利用加入________________的培養(yǎng)基篩選得到多個大腸桿菌菌落，不同的菌落中含有__________________(填“相同”“不同”或“相同或不同”)的基因。將轉(zhuǎn)移到纖維素膜上的細菌裂解，釋放出DNA，利用核酸分子雜交技術(shù)檢測目的基因，依據(jù)圖示雜交帶，可進一步選取________菌落(填寫圖中字母)繼續(xù)培養(yǎng)，從而獲得含有目的基因的受體菌。再將獲得的目的基因與相應(yīng)的質(zhì)粒(如pET)連接構(gòu)建表達載體，pET質(zhì)粒除含有卡那霉素抗性基因、復(fù)制起點外，還必須有__________________________，以利于DNA片段在受體細胞中進行表達。
(3)(4分)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細胞
如果目的基因來自真核細胞的基因組DNA序列，轉(zhuǎn)化的受體細胞一般不能為大腸桿菌，若目的基因來自cDNA文庫，則受體細胞可不受限制，原因是________________________。
(4)檢測目的基因及其表達產(chǎn)物
目的基因?qū)胧荏w細胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性，需要從_____________
和個體性狀四個方面來進行檢測和鑒定。
13．(16分)(2023·溫州高二期末)凝乳酶是食品生產(chǎn)中常用的凝結(jié)劑，科研人員從動物體內(nèi)獲得了凝乳酶mRNA，擬利用大腸桿菌通過基因工程生產(chǎn)凝乳酶。據(jù)圖回答下列問題：
　　
(1)利用凝乳酶mRNA，在________酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，進一步通過PCR擴增時需要2種引物，引物的作用是_____________________________________________。
(2)圖1和圖2是選用的質(zhì)粒及其幾種相關(guān)限制酶的識別位點，在構(gòu)建基因表達載體時，最好選用的限制酶是__________________________________，這樣選擇的優(yōu)點是_______________
____________________________________________________________________(答出兩點)。
為在凝乳酶基因兩側(cè)加上相應(yīng)的酶切位點，設(shè)計引物時需在引物前添加相應(yīng)酶切位點，PCR過程中至少復(fù)制________次可以得到含所需酶切位點的凝乳酶基因。
(3)將構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，需要用CaCl2溶液處理，使大腸桿菌成為______________。
(4)將在添加了青霉素的培養(yǎng)基中得到的4個大腸桿菌菌落，進行進一步檢測，檢測結(jié)果如圖3所示，1～4號菌落需要舍棄的是1號和____________。其中舍棄1號菌落的理由是________________________________________________________________________。
14．(16分)(2023·浙江6月選考，23)賴氨酸是人體不能合成的必需氨基酸，而人類主要食物中的賴氨酸含量很低，利用生物技術(shù)可提高食物中賴氨酸含量?；卮鹣铝袉栴}：
(1)(2分)植物細胞合成的賴氨酸達到一定濃度時，能抑制合成過程中兩種關(guān)鍵酶的活性，導(dǎo)致賴氨酸含量維持在一定濃度水平，這種調(diào)節(jié)方式屬于__________。根據(jù)這種調(diào)節(jié)方式，在培養(yǎng)基中添加________________________，用于篩選經(jīng)人工誘變的植物懸浮細胞，可得到抗賴氨酸類似物的細胞突變體，通過培養(yǎng)獲得再生植株。
(2)(14分)隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)與動物細胞工程結(jié)合和發(fā)展，2011年我國首次利用轉(zhuǎn)基因和體細胞核移植技術(shù)成功培育了高產(chǎn)賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆奶牛。其基本流程：
①構(gòu)建乳腺專一表達載體。隨著測序技術(shù)的發(fā)展，為獲取富含賴氨酸的酪蛋白基因(目的基因)，可通過檢索________________獲取其編碼序列，用化學(xué)合成法制備得到。再將獲得的目的基因與含有乳腺特異性啟動子的相應(yīng)載體連接，構(gòu)建出乳腺專一表達載體。
②表達載體轉(zhuǎn)入牛胚胎成纖維細胞。將表達載體包裹到磷脂等構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，與牛胚胎成纖維細胞膜發(fā)生________，表達載體最終進入細胞核，發(fā)生轉(zhuǎn)化。
③核移植。將轉(zhuǎn)基因的牛胚胎成纖維細胞作為核供體細胞，從牛卵巢獲取卵母細胞，經(jīng)體外培養(yǎng)及去核后作為________________。將兩種細胞進行電融合，電融合的作用除了促進細胞融合，同時起到了__________重組細胞發(fā)育的作用。
④重組細胞的體外培養(yǎng)及胚胎移植。重組細胞體外培養(yǎng)至________________________，植入代孕母牛子宮角，直至小牛出生。
⑤檢測。DNA水平檢測：利用PCR技術(shù)，以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞作為陰性對照，以________________________________為陽性對照，檢測到轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞中存在目的基因。RNA水平檢測：從非轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞、轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞和轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞，提取總RNA，對總RNA進行__________處理，以去除DNA污染，再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，并以此為________________，利用特定引物擴增目的基因片段。結(jié)果顯示目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞內(nèi)表達，而不在牛耳組織細胞內(nèi)表達，原因是什么？
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________。
答案精析
1．C　[由題圖可知，限制酶切割產(chǎn)生的是黏性末端，所以限制酶在它識別序列的中軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開，A正確；圖1中含有酶1和酶2，能產(chǎn)生4個黏性末端，圖2中含有酶3，能產(chǎn)生2個黏性末端，B正確；限制酶切割的是特定核苷酸序列之間的磷酸二酯鍵，不會切割氫鍵，C錯誤；限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開，圖示中酶1、酶2和酶3可以為不同種類的限制酶，D正確。]
2．D　[酶具有專一性，不同的限制酶識別并切割不同的核苷酸序列，A正確；分析圖1可知，限制酶Sal Ⅰ有三處切割位點，切割后產(chǎn)生4個DNA片段，故泳道①中是用Sal Ⅰ處理得到的酶切產(chǎn)物，C正確；圖中被酶切的DNA片段是雙鏈DNA，D錯誤。]
3．C　[作為載體必須具備的特征之一是具有篩選作用的標記基因，以便能夠通過表型鑒別含有載體的細胞，C錯誤。]
4．B　[據(jù)題圖可知，圖中“引物”中含有U，因此推測該“引物”是一小段單鏈RNA，A錯誤；“引物”的作用是作為DNA復(fù)制開始時DNA聚合酶的結(jié)合位點，只有通過“引物”，DNA才可以開始進行復(fù)制，“引物”在DNA合成后期會被切除，B正確；DNA聚合酶只能催化脫氧核苷酸加到已有核酸鏈的游離3′端羥基上，因此“引物”合成的方向為5′→3′，C錯誤；圖中“引物”RNA的合成不需要DNA聚合酶，D錯誤。]
5．C　[PCR反應(yīng)需在一定的緩沖溶液中進行，需提供DNA模板、引物、四種脫氧核苷三磷酸及耐高溫的Taq DNA聚合酶等，C錯誤。]
6．C　[如果第三次沖洗不充分，可能使殘留的、呈游離狀態(tài)的抗體2上的DNA也作為PCR的擴增模板參與擴增，會出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，B正確；免疫PCR中所用的DNA不選用受檢樣品(牛乳)中可能存在的DNA，若圖示中的DNA用牛乳基因中的DNA片段，經(jīng)過PCR擴增后的產(chǎn)物中，不僅有抗體2上的DNA擴增產(chǎn)物，還可能有牛乳中本身含有的牛乳基因片段的擴增產(chǎn)物，使檢測結(jié)果偏大，C錯誤；微量抗原抗體反應(yīng)是通過PCR技術(shù)擴增抗體2上連接的DNA，最后通過檢測擴增產(chǎn)物DNA的量來確定抗生素的量的方法，PCR擴增產(chǎn)物的量與牛乳中抗生素的量呈正相關(guān)，D正確。]
7．C　[E.coli DNA連接酶和T4 DNA連接酶都能連接黏性末端，另外T4 DNA連接酶還可以連接平末端，構(gòu)建重組質(zhì)粒可使用T4 DNA連接酶或E.coli DNA連接酶，A錯誤；導(dǎo)入受體細胞內(nèi)的“融合基因”需要一個啟動子和一個終止子，保證基因表達的正常進行，B錯誤；構(gòu)建H－M3融合基因的目的是有利于檢測H基因能否表達及表達量，若發(fā)現(xiàn)有綠色熒光則說明可正常表達，綠色熒光越深，表達量越高，C正確；為確定H基因定向連接到質(zhì)粒中，可選擇的引物組合有4種，即F3－R1、F2－R1、F1－R2、F1－R3，D錯誤。]
8．D　[分析題圖可知，表達載體中sfp的啟動子為啟動子1，idgS的啟動子為啟動子2，兩者表達相互獨立，A正確；若受體白玫瑰細胞不變藍，可能是sfp和idgS未成功導(dǎo)入或成功導(dǎo)入但表達不成功，D錯誤。]
9．B　[人體中胰島素基因轉(zhuǎn)錄的場所是細胞核，而翻譯的場所是細胞質(zhì)，A錯誤；DNA連接酶能把兩個黏性末端經(jīng)堿基互補配對后的缺口進行“縫合”形成磷酸二酯鍵，B正確；若大腸桿菌中沒有胰島素產(chǎn)生，也可能是重組質(zhì)粒未導(dǎo)入受體菌，C錯誤；獲得目的基因的工具酶有限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶，D錯誤。]
10．A　[蛋白質(zhì)工程是通過設(shè)計和改造編碼蛋白質(zhì)的基因獲得特定功能的蛋白質(zhì)，A錯誤。]
11．C　[大腸桿菌只有核糖體一種細胞器，不含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無法對t－PA進行加工，故需要對其合成的t－PA進行后期改造，A正確；該技術(shù)是將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，屬于蛋白質(zhì)工程，B正確；欲將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，應(yīng)對相應(yīng)的基因進行改造，C錯誤；t－PA是一種能高效降解血栓的單鏈糖蛋白，可利用抗原－抗體雜交技術(shù)來檢測轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌是否分泌了t－PA，D正確。]
12．(1)①化學(xué)合成法?、谀孓D(zhuǎn)錄　(2)限制　氨芐青霉素　相同或不同　b　啟動子和終止子　(3)cDNA序列無內(nèi)含子，真核細胞基因序列中含有內(nèi)含子，大腸桿菌等原核細胞無法對內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄片段進行剪切修飾　(4)DNA、RNA、蛋白質(zhì)
13．(1)逆轉(zhuǎn)錄　與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈　(2)EcoR Ⅰ、Bgl Ⅱ或EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ　避免標記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接　3
(3)感受態(tài)細胞　(4)2號、3號　目的基因未導(dǎo)入
解析　(1)由mRNA得到cDNA，應(yīng)該通過逆轉(zhuǎn)錄酶的作用。進行PCR擴增時，需要2種引物，引物會與DNA聚合酶結(jié)合，即引物分別與兩條DNA模板鏈復(fù)制起始端互補配對成小段雙鏈。(2)選擇限制酶首先堅持的原則是不能破壞標記基因，所以首先排除EcoR Ⅴ，第二要防止質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接，所以要選擇兩種限制酶，產(chǎn)生兩種不同的黏性末端，防止其自身連接。由題圖可知，Bgl Ⅱ和BamH Ⅰ會產(chǎn)生相同的黏性末端，故在構(gòu)建基因表達載體時，最好選用的限制酶是EcoR Ⅰ、Bgl Ⅱ或EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ。PCR擴增的第一次循環(huán)擴增出來的新片段很長，第二次循環(huán)以新的長片段為模板進行，但新片段的一端是引物開頭的，所以第二次循環(huán)得到的片段就是我們需要的長度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因。第三次循環(huán)當以第二次循環(huán)得到的新片段為模板時，這個片段的長度就是需要擴增的長度，故第三次循環(huán)完成時能得到雙鏈DNA，即PCR過程中至少復(fù)制三次可以得到含所需酶切位點的凝乳酶基因。(3)CaCl2溶液處理可以使大腸桿菌細胞膜的通透性增大，使大腸桿菌成為感受態(tài)細胞。(4)在青霉素培養(yǎng)基中得到的菌落都含有青霉素抗性基因，但1號進行DNA－DNA分子雜交沒有結(jié)果，說明1號菌落目的基因未導(dǎo)入，應(yīng)舍去；2號菌落含有目的基因，也可以正常轉(zhuǎn)錄，但翻譯生成的蛋白質(zhì)無法與相應(yīng)抗體結(jié)合，應(yīng)舍棄；3號菌落雖然含有目的基因，但不能與RNA進行雜交，說明該目的基因不能正常轉(zhuǎn)錄，應(yīng)舍棄。
14．(1)負反饋調(diào)節(jié)　一定濃度的賴氨酸類似物　(2)①基因組文庫?、谌诤稀、凼荏w細胞　激活?、苌］嘏呋蚰遗?階段)?、莺心康幕虻呐６M織細胞　DNA酶　PCR的模板　構(gòu)建的表達載體只含有乳腺特異性啟動子，只能在乳腺細胞中表達，而在牛耳組織細胞中不能表達
解析　(1)題干所述的調(diào)節(jié)方式屬于負反饋調(diào)節(jié)。如果想得到抗賴氨酸類似物的細胞突變體，可在培養(yǎng)基中添加一定濃度的賴氨酸類似物。(2)①從基因組文庫中獲取目的基因：把某種生物的基因組DNA切成適當大小，分別與載體組合，導(dǎo)入微生物細胞，形成克隆，基因組中所有DNA序列克隆的總匯被稱為基因組文庫。當需要某一片段時，根據(jù)目的基因的有關(guān)信息，如基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物以及基因的表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來獲取目的基因。②將表達載體包裹到磷脂等構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，根據(jù)細胞膜成分，其與牛胚胎成纖維細胞膜發(fā)生融合。③以去核的卵母細胞作為受體細胞，因為卵母細胞中含有促使細胞核表達全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。電融合除了能促進細胞融合，同時還能激活重組細胞發(fā)育。④胚胎發(fā)育到適宜階段可取出向受體移植。牛、羊一般要培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚階段，再植入代孕母牛子宮內(nèi)，直至小牛出生。⑤陽性對照：按照當前實驗方案一定能得到正面預(yù)期結(jié)果的對照實驗。陽性對照是已知的對測量結(jié)果有影響的因素，目的是確定實驗程序無誤。陰性對照和陽性對照相反，按照當前的實驗方案一定不能得到正面預(yù)期結(jié)果的對照實驗。排除未知變量對實驗產(chǎn)生的不利影響。本實驗以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞作為陰性對照，為了檢測轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞中是否存在目的基因，應(yīng)該以含有目的基因的牛耳組織細胞為陽性對照。為了除去DNA污染，可以用DNA酶使其水解。經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，并以此為PCR的模板進行擴增。目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞內(nèi)表達，而不在牛耳組織細胞內(nèi)表達，原因是構(gòu)建的表達載體只含有乳腺特異性啟動子，只能在乳腺細胞中表達，而在牛耳組織細胞中不能表達。(共50張PPT)
重點突破練(四)
第四章 基因工程
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題組一　基因工程的工具酶和載體
1.(2024·嘉興海鹽二中高二期中)如圖表示不同的限制酶在目的基因的提取和基因表達載體的構(gòu)建中的作用，下列有關(guān)敘述錯誤的是
A.限制酶沿識別序列的中軸線兩側(cè)將
DNA兩條鏈切開
B.在圖1和圖2中將分別產(chǎn)生4個和2個
黏性末端
C.限制酶切割的是特定核苷酸序列之間的磷酸二酯鍵和氫鍵
D.圖示中酶1、酶2和酶3可以為不同種類的限制酶
√
1
2
3
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5
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由題圖可知，限制酶切割產(chǎn)生的是
黏性末端，所以限制酶在它識別序
列的中軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分
別切開，A正確；
圖1中含有酶1和酶2，能產(chǎn)生4個黏性末端，圖2中含有酶3，能產(chǎn)生2個黏性末端，B正確；
限制酶切割的是特定核苷酸序列之間的磷酸二酯鍵，不會切割氫鍵，C錯誤；
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限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開，圖示中酶1、酶2和酶3可以為不同種類的限制酶，D正確。
2.用XhoⅠ和SalⅠ兩種限制性內(nèi)切核酸酶分別處理同一DNA片段，酶切位點及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。下列敘述不正確的是
A.圖1中兩種酶識別的核苷酸序列不同
B.圖2中酶切產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組DNA分子
C.泳道①中是用SalⅠ處理得到的酶切產(chǎn)物
D.圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA
√
1
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14
酶具有專一性，不同的限制酶識別并切割不同的核苷酸序列，A正確；
分析圖1可知，限制酶SalⅠ有三處切割位點，切割后產(chǎn)生4個DNA片段，故泳道①中是用SalⅠ處理得到的酶切產(chǎn)物，C正確；
圖中被酶切的DNA片段是雙鏈DNA，D錯誤。
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3.作為基因工程的運輸工具——載體，必須具備的特征及理由對應(yīng)不正確的是
A.含有復(fù)制起點，能夠獨立自主復(fù)制并穩(wěn)定存在，以便目的基因能夠在
宿主細胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制
B.具有多個限制酶切割位點，以便于目的基因的插入
C.具有篩選作用的標記基因，以便目的基因能夠準確定位與其結(jié)合
D.對宿主細胞無傷害，以不影響宿主細胞的正常生命活動
√
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作為載體必須具備的特征之一是具有篩選作用的標記基因，以便能夠通過表型鑒別含有載體的細胞，C錯誤。
題組二　PCR技術(shù)
4.(2023·溫州高二期末)研究表明，DNA合成先要沿子鏈合成方向以DNA為模板合成引物，因為DNA聚合酶只能催化脫氧核苷酸加到已有核酸鏈的游離3′端羥基上，而不能使脫氧核苷酸自身發(fā)生聚合，如圖所示。
據(jù)圖分析，下列關(guān)于圖中“引物”的敘述，正確的是
A.是一小段單鏈DNA
B.在DNA合成后期會被切除
C.合成的方向為3′→5′
D.合成時需DNA聚合酶的催化
√
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據(jù)題圖可知，圖中“引物”中含有U，因此推測該“引物”是一小段單鏈RNA，A錯誤；
“引物”的作用是作為DNA復(fù)制開始時DNA聚合酶的結(jié)合位點，只有通過“引物”，DNA才可以開始進行復(fù)制，“引物”在DNA合成后期會被切除，B正確；
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DNA聚合酶只能催化脫氧核苷酸加到已有核酸鏈的游離3′端羥基上，因此“引物”合成的方向為5′→3′，C錯誤；
圖中“引物”RNA的合成不需要DNA聚合酶，D錯誤。
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5.下列有關(guān)PCR技術(shù)的敘述，不正確的是
A.是聚合酶鏈式反應(yīng)的簡稱，是在DNA聚合酶作用下，在體外擴增DNA
片段的技術(shù)
B.在用PCR技術(shù)擴增DNA時，DNA的復(fù)制過程與細胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程
類似
C.PCR反應(yīng)只需在一定的緩沖溶液中提供DNA模板以及四種脫氧核苷酸
D.PCR一般經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)分為變性、退火、延伸
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PCR反應(yīng)需在一定的緩沖溶液中進行，需提供DNA模板、引物、四種脫氧核苷三磷酸及耐高溫的Taq DNA聚合酶等，C錯誤。
6.(2024·寧波高二期末)免疫PCR是對微量抗原的一種檢測方法。如圖是利用該技術(shù)檢測牛乳中微量抗生素的流程圖：首先將抗體1固定在微板上，沖洗后加入待檢的牛乳，再加入DNA標記的抗體2，進行PCR擴增，最后進行電泳檢測。下列敘述錯誤的是
A.免疫PCR技術(shù)適用于微量抗原的檢測
B.第三次沖洗不充分可能導(dǎo)致假陽性現(xiàn)象
C.圖示中的DNA必須是牛乳基因中的DNA片段
D.PCR擴增產(chǎn)物的量與牛乳中抗生素的量呈正相關(guān)
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√
如果第三次沖洗不充分，可能使殘留
的、呈游離狀態(tài)的抗體2上的DNA也
作為PCR的擴增模板參與擴增，會出
現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，B正確；
免疫PCR中所用的DNA不選用受檢樣品(牛乳)中可能存在的DNA，若圖示中的DNA用牛乳基因中的DNA片段，經(jīng)過PCR擴增后的產(chǎn)物中，不僅有抗體2上的DNA擴增產(chǎn)物，還可能有牛乳中本身含有的牛乳基因片段的擴增產(chǎn)物，使檢測結(jié)果偏大，C錯誤；
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微量抗原抗體反應(yīng)是通過PCR技術(shù)擴增抗體2上連接的DNA，最后通過檢測擴增產(chǎn)物DNA的量來確定抗生素的量的方法，PCR擴增產(chǎn)物的量與牛乳中抗生素的量呈正相關(guān)，D正確。
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題組三　基因工程的基本操作程序
7.科研人員構(gòu)建了可表達H－M3融合蛋白的重組質(zhì)粒并進行了檢測，該質(zhì)粒的部分結(jié)構(gòu)如圖所示，其中M3為水母體內(nèi)的綠色熒光蛋白基因。下列有關(guān)敘述正確的是
A.構(gòu)建重組質(zhì)粒須使用T4 DNA連接酶
B.導(dǎo)入受體細胞內(nèi)的“融合基因”需要
兩個啟動子和兩個終止子
C.構(gòu)建H－M3融合基因的目的是有利于檢測H基因能否表達以及表達量
D.為確定H基因定向連接到質(zhì)粒中，可選擇的引物組合有8種
√
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E.coli DNA連接酶和T4 DNA連接酶都
能連接黏性末端，另外T4 DNA連接酶
還可以連接平末端，構(gòu)建重組質(zhì)?？墒?br/>用T4 DNA連接酶或E.coli DNA連接酶，
A錯誤；
導(dǎo)入受體細胞內(nèi)的“融合基因”需要一個啟動子和一個終止子，保證基因表達的正常進行，B錯誤；
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構(gòu)建H－M3融合基因的目的是有利于
檢測H基因能否表達及表達量，若發(fā)
現(xiàn)有綠色熒光則說明可正常表達，綠
色熒光越深，表達量越高，C正確；
為確定H基因定向連接到質(zhì)粒中，可選擇的引物組合有4種，即F3－R1、F2－R1、F1－R2、F1－R3，D錯誤。
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8.(2023·金華高二期末)我國科學(xué)家利用鏈霉菌的靛藍合成酶基因(idgS)及其激活基因(sfp)構(gòu)建基因表達載體(如圖所示)，通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入白玫瑰細胞中，獲得藍玫瑰。下列敘述錯誤的是
A.表達載體中sfp和idgS具有各自的啟動子，
表達相互獨立
B.可從鏈霉菌的基因文庫中獲取sfp和idgS
C.在構(gòu)建表達載體時所需的限制酶是BamHⅠ、
SpeⅠ、SacⅠ
D.若受體白玫瑰細胞不變藍，則可說明sfp和idgS未成功導(dǎo)入
√
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分析題圖可知，表達載體中sfp的啟動
子為啟動子1，idgS的啟動子為啟動子
2，兩者表達相互獨立，A正確；
若受體白玫瑰細胞不變藍，可能是sfp
和idgS未成功導(dǎo)入或成功導(dǎo)入但表達
不成功，D錯誤。
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9.利用基因工程技術(shù)可使大腸桿菌生產(chǎn)人的胰島素。下列相關(guān)敘述正確的是
A.人和大腸桿菌在合成胰島素時，轉(zhuǎn)錄和翻譯的場所是相同的
B.DNA連接酶能把兩個黏性末端經(jīng)堿基互補配對后留下的縫隙“縫合”
C.通過檢測，大腸桿菌中沒有胰島素產(chǎn)生，則可判斷重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體
菌后沒有表達
D.在培養(yǎng)大腸桿菌的工程菌過程中，獲得目的基因的工具酶有限制性內(nèi)
切核酸酶和DNA聚合酶
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√
人體中胰島素基因轉(zhuǎn)錄的場所是細胞核，而翻譯的場所是細胞質(zhì)，A錯誤；
DNA連接酶能把兩個黏性末端經(jīng)堿基互補配對后的缺口進行“縫合”形成磷酸二酯鍵，B正確；
若大腸桿菌中沒有胰島素產(chǎn)生，也可能是重組質(zhì)粒未導(dǎo)入受體菌，C錯誤；
獲得目的基因的工具酶有限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶，D錯誤。
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題組四　蛋白質(zhì)工程
10.蛋白質(zhì)工程是新崛起的一項生物工程，又稱第二代基因工程。如圖表示蛋白質(zhì)工程流程，下列有關(guān)敘述錯誤的是
A.蛋白質(zhì)工程就是根據(jù)人們需要，直接對蛋白質(zhì)進行加工修飾
B.蛋白質(zhì)工程是通過基因修飾或基因合成等方法，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造
C.①②過程分別表示轉(zhuǎn)錄和翻譯
D.蛋白質(zhì)工程是從④開始的
√
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蛋白質(zhì)工程是通過設(shè)計和改造編碼蛋白質(zhì)的基因獲得特定功能的蛋白質(zhì)，A錯誤。
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11.(2024·浙江效實中學(xué)高二期中)為心梗患者注射大劑量的t－PA(一種能高效降解血栓的單鏈糖蛋白，主要由血管內(nèi)皮細胞合成、分泌并釋放進血液)會誘發(fā)顱內(nèi)出血。研究證實，將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血等副作用。據(jù)此分析，下列說法錯誤的是
A.若利用大腸桿菌來生產(chǎn)t－PA，需要對其合成的t－PA進行后期改造
B.改造t－PA的技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程
C.欲將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，應(yīng)直接對蛋白質(zhì)(t－PA)進行
改造
D.可利用抗原－抗體雜交技術(shù)來檢測轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌是否分泌了t－PA
√
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大腸桿菌只有核糖體一種細胞器，不含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無法對t－PA進行加工，故需要對其合成的t－PA進行后期改造，A正確；
該技術(shù)是將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，屬于蛋白質(zhì)工程，B正確；
欲將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，應(yīng)對相應(yīng)的基因進行改造，C錯誤；
t－PA是一種能高效降解血栓的單鏈糖蛋白，可利用抗原－抗體雜交技術(shù)來檢測轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌是否分泌了t－PA，D正確。
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12.基因工程自20世紀70年代興起后，得到了飛速的發(fā)展，目前已成為生物科學(xué)的核心技術(shù)?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蛑饕ㄋ膫€步驟：
(1)獲取目的基因
①如果目的基因的核苷酸序列是已知的，可用___________合成目的基因。
②如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以建立一個包括該種生物所有基因的基因組文庫，或者通過_______方法建立cDNA文庫。
化學(xué)合成法
逆轉(zhuǎn)錄
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(2)構(gòu)建重組DNA分子
對于遺傳背景未知的生物，可提取該生物的基因組DNA，用多種_______酶切割成各種不同DNA片段，分別導(dǎo)入大腸桿菌(如圖所示)。由于切割后的基因片段大小不一，有的片段可能含有多個基因，不宜直接導(dǎo)入表達載體，所以可以先將它們分別與克隆質(zhì)粒(如pBR322)連接構(gòu)建重組載體，利用加入____________的培養(yǎng)基篩選得到多個大腸桿菌菌落，
限制
氨芐青霉素
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不同的菌落中含有____________(填“相同” “不同”或“相同或不同”)的基因。將轉(zhuǎn)移到纖維素膜上的細菌裂解，釋放出DNA，利用核酸分子雜交技術(shù)檢測目的基因，依據(jù)圖示雜交帶，可進一步選取_____菌落(填寫圖中字母)繼續(xù)培養(yǎng)，從而獲得含有目的基因的受體菌。
相同或不同
b
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再將獲得的目的基因與相應(yīng)的質(zhì)粒(如pET)連接構(gòu)建表達載體，pET質(zhì)粒除含有卡那霉素抗性基因、復(fù)制起點外，還必須有_________
________，以利于DNA片段在受體細胞中進行表達。
啟動子和
終止子
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(3)將重組DNA分子導(dǎo)入受體細胞
如果目的基因來自真核細胞的基因組DNA序列，轉(zhuǎn)化的受體細胞一般不能為大腸桿菌，若目的基因來自cDNA文庫，則受體細胞可不受限制，原因是_________________________________________________________
_____________________________________________。
(4)檢測目的基因及其表達產(chǎn)物
目的基因?qū)胧荏w細胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達其遺傳特性，需要從____________________和個體性狀四個方面來進行檢測和鑒定。
cDNA序列無內(nèi)含子，真核細胞基因序列中含有內(nèi)含子，大腸桿菌等原核細胞無法對內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄片段進行剪切修飾
DNA、RNA、蛋白質(zhì)
13.(2023·溫州高二期末)凝乳酶是食品生產(chǎn)中常用的凝結(jié)劑，科研人員從動物體內(nèi)獲得了凝乳酶mRNA，擬利用大腸桿菌通過基因工程生產(chǎn)凝乳酶。據(jù)圖回答下列問題：
(1)利用凝乳酶mRNA，在________酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，進一步通過PCR擴增時需要2種引物，引物的作用是___________
______________。
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逆轉(zhuǎn)錄
與模板單鏈
結(jié)合延伸子鏈
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由mRNA得到cDNA，應(yīng)該通過逆轉(zhuǎn)錄酶的作用。進行PCR擴增時，需要2種引物，引物會與DNA聚合酶結(jié)合，即引物分別與兩條DNA模板鏈復(fù)制起始端互補配對成小段雙鏈。
(2)圖1和圖2是選用的質(zhì)粒及其幾種相關(guān)限制酶的識別位點，在構(gòu)建基因表達載體時，最好選用的限制酶是__________________________
_________，這樣選擇的優(yōu)點是_____________
____________________________________________(答出兩點)。為在凝乳酶基因兩側(cè)加上相應(yīng)的酶切位點，設(shè)計引物時需在引物前添加相應(yīng)酶切位點，PCR過程中至少復(fù)制____次可以得到含所需酶切位點的凝乳酶基因。
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EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、
BamHⅠ
被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接
避免標記基因
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選擇限制酶首先堅持的原則是不能破壞標記基因，所以首先排除EcoRⅤ，第二要防止質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接，所以要選擇兩種限制酶，產(chǎn)生兩種不同的黏性末端，防止其自身連接。由題圖可知，BglⅡ和BamHⅠ會產(chǎn)生相同的黏性末端，故在構(gòu)建基因表達載體時，最好選用的限制酶是EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ。
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PCR擴增的第一次循環(huán)擴增出來的新片段很長，第二次循環(huán)以新的長片段為模板進行，但新片段的一端是引物開頭的，所以第二次循環(huán)得到的片段就是我們需要的長度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因。第三次循環(huán)當以第二次循環(huán)得到的新片段為模板時，這個片段的長度就是需要擴增的長度，故第三次循環(huán)完成時能得到雙鏈DNA，即PCR過程中至少復(fù)制三次可以得到含所需酶切位點的凝乳酶基因。
(3)將構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，需要用CaCl2溶液處理，使大腸桿菌成為___________。
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感受態(tài)細胞
CaCl2溶液處理可以使大腸桿菌細胞膜的通透性增大，使大腸桿菌成為感受態(tài)細胞。
(4)將在添加了青霉素的培養(yǎng)基中得到的4個大腸桿菌菌落，進行進一步檢測，檢測結(jié)果如圖3所示，1～4號菌落需要舍棄的是1號和__________。其中舍棄1號菌落的理由是________________。
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2號、3號
目的基因未導(dǎo)入
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在青霉素培養(yǎng)基中得到的菌落都含有青霉素抗性基因，但1號進行DNA－DNA分子雜交沒有結(jié)果，說明1號菌落目的基因未導(dǎo)入，應(yīng)舍去；2號菌落含有目的基因，也可以正常轉(zhuǎn)錄，
但翻譯生成的蛋白質(zhì)無法與相應(yīng)抗體結(jié)合，應(yīng)舍棄；3號菌落雖然含有目的基因，但不能與RNA進行雜交，說明該目的基因不能正常轉(zhuǎn)錄，應(yīng)舍棄。
14.(2023·浙江6月選考，23)賴氨酸是人體不能合成的必需氨基酸，而人類主要食物中的賴氨酸含量很低，利用生物技術(shù)可提高食物中賴氨酸含量?；卮鹣铝袉栴}：
(1)植物細胞合成的賴氨酸達到一定濃度時，能抑制合成過程中兩種關(guān)鍵酶的活性，導(dǎo)致賴氨酸含量維持在一定濃度水平，這種調(diào)節(jié)方式屬于__________。根據(jù)這種調(diào)節(jié)方式，在培養(yǎng)基中添加__________________
_____，用于篩選經(jīng)人工誘變的植物懸浮細胞，可得到抗賴氨酸類似物的細胞突變體，通過培養(yǎng)獲得再生植株。
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負反饋調(diào)節(jié)
一定濃度的賴氨酸類
似物
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題干所述的調(diào)節(jié)方式屬于負反饋調(diào)節(jié)。如果想得到抗賴氨酸類似物的細胞突變體，可在培養(yǎng)基中添加一定濃度的賴氨酸類似物。
(2)隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)與動物細胞工程結(jié)合和發(fā)展，2011年我國首次利用轉(zhuǎn)基因和體細胞核移植技術(shù)成功培育了高產(chǎn)賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆奶牛。其基本流程：
①構(gòu)建乳腺專一表達載體。隨著測序技術(shù)的發(fā)展，為獲取富含賴氨酸的酪蛋白基因(目的基因)，可通過檢索____________獲取其編碼序列，用化學(xué)合成法制備得到。再將獲得的目的基因與含有乳腺特異性啟動子的相應(yīng)載體連接，構(gòu)建出乳腺專一表達載體。
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基因組文庫
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從基因組文庫中獲取目的基因：把某種生物的基因組DNA切成適當大小，分別與載體組合，導(dǎo)入微生物細胞，形成克隆，基因組中所有DNA序列克隆的總匯被稱為基因組文庫。當需要某一片段時，根據(jù)目的基因的有關(guān)信息，如基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物以及基因的表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來獲取目的基因。
②表達載體轉(zhuǎn)入牛胚胎成纖維細胞。將表達載體包裹到磷脂等構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，與牛胚胎成纖維細胞膜發(fā)生______，表達載體最終進入細胞核，發(fā)生轉(zhuǎn)化。
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融合
將表達載體包裹到磷脂等構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，根據(jù)細胞膜成分，其與牛胚胎成纖維細胞膜發(fā)生融合。
③核移植。將轉(zhuǎn)基因的牛胚胎成纖維細胞作為核供體細胞，從牛卵巢獲取卵母細胞，經(jīng)體外培養(yǎng)及去核后作為_________。將兩種細胞進行電融合，電融合的作用除了促進細胞融合，同時起到了______重組細胞發(fā)育的作用。
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受體細胞
激活
以去核的卵母細胞作為受體細胞，因為卵母細胞中含有促使細胞核表達全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。電融合除了能促進細胞融合，同時還能激活重組細胞發(fā)育。
④重組細胞的體外培養(yǎng)及胚胎移植。重組細胞體外培養(yǎng)至_____________
_______，植入代孕母牛子宮角，直至小牛出生。
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桑葚胚或囊胚
(階段)
胚胎發(fā)育到適宜階段可取出向受體移植。牛、羊一般要培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚階段，再植入代孕母牛子宮內(nèi)，直至小牛出生。
⑤檢測。DNA水平檢測：利用PCR技術(shù)，以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞作為陰性對照，以____________________________為陽性對照，檢測到轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞中存在目的基因。RNA水平檢測：從非轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞、轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞和轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞，提取總RNA，對總RNA進行________處理，以去除DNA污染，再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，并以此為___________，利用特定引物擴增目的基因片段。結(jié)果顯示目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞內(nèi)表達，而不在牛耳組織細胞內(nèi)表達，原因是什么？_______________________________________
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含有目的基因的牛耳組織細胞
DNA酶
PCR的模板
構(gòu)建的表達載體只含有乳腺特異性啟動子，只能在乳腺細胞中表達，而在牛耳組織細胞中不能表達
陽性對照：按照當前實驗方案一定能得到正面預(yù)期結(jié)果的對照實驗。陽性對照是已知的對測量結(jié)果有影響的因素，目的是確定實驗程序無誤。陰性對照和陽性對照相反，按照當前的實驗方案一定不能得到正面預(yù)期結(jié)果的對照實驗。排除未知變量對實驗產(chǎn)生的不利影響。本實驗以非轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞作為陰性對照，為了檢測轉(zhuǎn)基因牛耳組織細胞中是否存在目的基因，應(yīng)該以含有目的基因的牛耳組織細胞為陽性對照。為了除去DNA污染，可以用DNA酶使其水解。
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經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA，并以此為PCR的模板進行擴增。目的基因在轉(zhuǎn)基因牛乳汁中的脫落細胞內(nèi)表達，而不在牛耳組織細胞內(nèi)表達，原因是構(gòu)建的表達載體只含有乳腺特異性啟動子，只能在乳腺細胞中表達，而在牛耳組織細胞中不能表達。
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