資源簡介

主干知識排查
一、微生物的培養需要適宜條件
1．培養基的主要成分：水、__________、________、________、生長因子等，作為碳源的物質可為有機物，也可為無機碳，如CO2。
2．培養基的理化特性影響微生物的生長：培養基需滿足目標微生物的代謝需求，同時需要提供適當的pH?！凹毦踩?，霉菌喜素”，細菌培養基中要含有較高的有機氮，常用________和酵母提取物等配制，霉菌培養基一般用____________加無機物配制；細菌通常要求在____________的環境中生長，霉菌要求在____________的環境中生長。
3．培養基按物理特征分為液體培養基和固體培養基，按化學成分分為合成培養基和天然培養基。液體培養基不加凝固劑(如瓊脂)，常用于大規模____________某種微生物；固體培養基加入凝固劑，常用于微生物的________、________、____________(平板)、____________(斜面)等。
4．滅菌和無菌操作技術可以排除非目標微生物的干擾。
5．消滅實驗器具和培養基中可能存留的各種類型的微生物用高壓滅菌法，在微生物實驗中常用________ ℃(1 kg/cm2壓力)對實驗器具和培養基進行________ min的滅菌處理。接種環和涂布器滅菌常采用________滅菌法。
6．較高溫度下會分解的物質如尿素，可進行______除菌，再在超凈工作臺內添加到培養基中；對含葡萄糖的培養基，可采用適當降低________、____________________以及延長時間(30 min)的高壓滅菌方法滅菌。
7．消毒：采用較溫和的物理、化學方法，僅殺死物體表面或內部一部分不需要的微生物。
滅菌：采用強烈的物理、化學方法，殺滅物體表面以及內部的一切微生物，包括芽孢和孢子。
二、純凈的目標微生物可通過分離和純化獲得
1．分離微生物的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法；測定微生物數量的方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡計數法。
2．平板劃線法：蘸取液體培養物或挑取固體表面微生物→在固體培養基表面進行______________劃線、扇形劃線或多次連續平行劃線，在______________能得到單菌落。
3．平板劃線法都只用接種環蘸取一次菌液，平板劃線操作的第一步是灼燒接種環，這是為了__________________________________________；每次劃線前灼燒接種環是為了____________________________________________________________________________________________，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸________，以便得到單菌落。劃線結束后灼燒接種環，是為了_________________________________
________________________________________________________________________。
4．稀釋涂布平板法：菌液梯度稀釋→取不同稀釋度菌液0.1 mL加在固體培養基表面→涂布器均勻涂布→適當稀釋度下得到單菌落。
5．判斷液體培養基成功接種酵母菌的依據：與對照組相比，液體培養基由于酵母菌的增殖而變________，可推斷液體培養基中接種酵母菌成功。
6．稀釋涂布平板法對微生物計數的公式：每毫升菌液中微生物細胞的數量＝某一稀釋倍數下至少3個培養皿的平均菌落數÷菌液稀釋液體積×稀釋倍數。
7．顯微鏡計數中，要“先蓋片再滴液”。 計數時取樣方法：“________取樣”(五個中方格，共計80 個小方格)，壓線細胞計數原則“數上不數下”“數左不數右”。計算公式：酵母細胞個數/mL＝____________________________________________________________
________________________________________________________________________。
8．選擇培養基：在培養基中____________某種化學成分，使得只有某些________的微生物能夠生長，________微生物均不能生長，即“選擇所需，淘汰不需”。用途：快速篩選出______________或特定細胞。
9．鑒別培養基：“鑒定所需”，其他非目標微生物也可以生長，但目標微生物會發生特征性的變化。
10．能分解尿素的微生物的分離與計數實驗原理：
(1)當培養基中只有______作為氮源時，只有能分泌______的微生物才能在該培養基中生長。
(2)微生物分解尿素產生的氨會使培養基的堿性增強，可利用______________鑒定尿素分解菌。
(3)菌落周圍呈紅色，圓形紅色區域越大，這種菌利用尿素的能力越______。
11．培養未接種的培養基目的是檢查培養基制備是否合格；全營養培養基接種目的是檢測選擇培養基是否有選擇作用。
三、發酵工程為人類提供多樣的生物產品
1．利用酵母菌、醋酸菌制作果酒和果醋原理：
(1)果酒：酵母菌在________條件下，通過厭氧呼吸，將葡萄糖氧化為________和____________。
(2)果醋：醋酸菌在________條件下可將乙醇氧化為________。
2．在葡萄酒的制作過程中，應先進行沖洗，然后再去除葡萄的枝梗，且沖洗時不能反復沖洗。
3．發酵工程的基本環節：菌種的選育→菌種的____________→接種→發酵過程的控制→發酵產品的____________。
4．分離或提純發酵產品是工業發酵制取產品必經的步驟。如果發酵的產品是菌體本身，可采用______________等方法將菌體從培養液中分離出來；如果發酵產品是微生物的代謝產物，則可采用____________、吸附發酵、______________等方法進行提取。
5．發酵工程的特點：生產條件________，原料________且價格低廉，廢棄物對環境影響________且容易處理。
6．對發酵條件進行調控以滿足微生物生長的需要，需要對____________________等發酵條件進行嚴格控制，同時添加必要的____________，保證發酵生產高效順利進行。
1．固體培養基表面的微生物生長速度比液體培養基中慢，原因是_______________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
2．平板中培養基冷卻凝固后，將培養皿倒過來放置，原因是__________________
________________________________________________________________________。
3．在第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，原因是
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
4．如何判斷培養基是否被雜菌污染：______________________________________
________________________________________________________________________。
5．細菌計數時往往會產生實驗誤差，稀釋涂布平板法計數的值比實際值________，原因是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________；
顯微鏡計數法計數的結果比實際值________，原因是_________________________
________________________________________________________________________。
6．判斷選擇培養基是否起到篩選作用的方法：______________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
7．現在要從土壤中分離纖維素分解菌，請你給出實驗方案：__________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
8．果酒、果醋發酵時，瓶中的葡萄的總體積不要超過礦泉水瓶體積的1/2，原因是
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
9．將吸管長臂端插入水中的作用：
(1)________________________________________________________________________；
(2)________________________________________________________________________；
(3)________________________________________________________________________。
10．如圖為制作果酒和果醋的發酵裝置圖，排氣口要通過一個長而彎曲的膠管(b)與瓶身相連，這樣做的目的是_________________________________________________________
________________________________________________________________________。
進行醋酸發酵和酒精發酵時，對圖中哪一處操作有差異？請具體指明：_________
________________________________________________________________________。
11．泡菜制作原理是利用附生在蔬菜表面的____________、短乳桿菌和明串珠菌等發酵制成的。這些微生物一般為________、兼性厭氧或微好氧菌。
12．對于新配制的泡菜原料，若加入一些陳泡菜汁，可以縮短腌制時間，這是因為________________________________________。
13．泡菜制作時，用水密封泡菜壇的目的是________________________________。在發酵后期，乳酸菌數量減少，原因是_____________________________________________
________________________________________________________________________。
答案精析
知識梳理
一、
1．無機鹽　碳源　氮源
2．蛋白胨　可溶性淀粉　中性偏堿　中性偏酸
3．快速繁殖　分離　鑒定　活菌計數　菌種保存
5．121　15～20　灼燒
6．過濾　溫度　壓力(112 ℃，500 g/cm2)
二、
2．連續平行　劃線的尾部
3．避免接種環上可能存在的微生物污染培養物　殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端　減少　及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者
5．渾濁
7．五點　80個小方格細胞總數/80×400×10 000×稀釋倍數
8．添加(或減去)　特定　其他　目標微生物
10．(1)尿素　脲酶　(2)酚紅指示劑　(3)強
三、
1．(1)無氧　乙醇　二氧化碳　(2)有氧　醋酸
3．擴大培養　分離和提純
4．過濾、沉淀　真空發酵　萃取發酵
5．溫和　豐富　小
6．溫度、pH、溶解氧　營養組分
長句表達
1．細胞與固體培養基的接觸面積較小，細胞與環境間物質交換速度相對較慢
2．可以防止水分過快蒸發，又可以防止冷凝后形成的水滴落在培養基中造成污染
3．劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落
4．培養未接種的培養基，觀察是否有菌落生長；如果有，說明培養基被雜菌污染
5．偏小　當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落　偏大　顯微鏡下無法區分細胞的死活，統計結果一般是活菌數和死菌數的總和
6．配制牛肉膏蛋白胨培養基作為對照，觀察選擇培養基上的菌落數目是否遠少于牛肉膏蛋白胨培養基上的菌落數目
7．用“纖維素作為唯一碳源”的選擇培養基進行培養，并在培養基中加入剛果紅試劑進行鑒定。在培養基上形成透明圈的菌落即為纖維素分解菌
8．留有1/2的空間，其中的氧氣能促進酵母菌快速繁殖；酵母菌發酵會產生CO2，葡萄過多可能導致發酵液溢出
9．(1)防止O2進入　(2)防止空氣中的雜菌污染　(3)排出CO2，平衡發酵瓶內壓強
10．避免空氣中其他微生物進入發酵裝置　使用該裝置制作果酒時，應該關閉充氣口(a)；制作果醋時，應將充氣口(a)連接氣泵，輸入氧氣(無菌空氣)
11．植物乳桿菌　厭氧
12．陳泡菜汁中有較多的發酵菌
13．給泡菜壇內創造無氧環境　乳酸的積累使壇中pH下降，抑制了乳酸菌的生命活動(共17張PPT)
主干知識排查
第一章 發酵工程
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一、微生物的培養需要適宜條件
1.培養基的主要成分：水、　　　　、　　　、　　　、生長因子等，作為碳源的物質可為有機物，也可為無機碳，如CO2。
2.培養基的理化特性影響微生物的生長：培養基需滿足目標微生物的代謝需求，同時需要提供適當的pH?！凹毦踩潱咕菜亍?，細菌培養基中要含有較高的有機氮，常用　　　　和酵母提取物等配制，霉菌培養基一般用　　　　　　加無機物配制；細菌通常要求在　　　　　的環境中生長，霉菌要求在　　　　　的環境中生長。
知識梳理
無機鹽
碳源
氮源
蛋白胨
可溶性淀粉
中性偏堿
中性偏酸
3.培養基按物理特征分為液體培養基和固體培養基，按化學成分分為合成培養基和天然培養基。液體培養基不加凝固劑(如瓊脂)，常用于大規模 　　　　某種微生物；固體培養基加入凝固劑，常用于微生物的_____、　　　、 　　　　　(平板)、 　　　　　(斜面)等。
4.滅菌和無菌操作技術可以排除非目標微生物的干擾。
5.消滅實驗器具和培養基中可能存留的各種類型的微生物用高壓滅菌法，在微生物實驗中常用 ℃(1 kg/cm2壓力)對實驗器具和培養基進行_________ min的滅菌處理。接種環和涂布器滅菌常采用 　　滅菌法。
快速繁殖
分離
鑒定
活菌計數
菌種保存
121
15～20
灼燒
6.較高溫度下會分解的物質如尿素，可進行　　　除菌，再在超凈工作臺內添加到培養基中；對含葡萄糖的培養基，可采用適當降低　　　、________________________以及延長時間(30 min)的高壓滅菌方法滅菌。
7.消毒：采用較溫和的物理、化學方法，僅殺死物體表面或內部一部分不需要的微生物。
滅菌：采用強烈的物理、化學方法，殺滅物體表面以及內部的一切微生物，包括芽孢和孢子。
過濾
溫度
壓力(112 ℃，500 g/cm2)
二、純凈的目標微生物可通過分離和純化獲得
1.分離微生物的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法；測定微生物數量的方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡計數法。
2.平板劃線法：蘸取液體培養物或挑取固體表面微生物→在固體培養基表面進行　　　　　劃線、扇形劃線或多次連續平行劃線，在________
______能得到單菌落。
連續平行
劃線的
尾部
3.平板劃線法都只用接種環蘸取一次菌液，平板劃線操作的第一步是灼燒接種環，這是為了 ；每次劃線前灼燒接種環是為了_______________________________________
_______________________________________________________，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸 　　　，以便得到單菌落。劃線結束后灼燒接種環，是為了____________________________
______________________________。
4.稀釋涂布平板法：菌液梯度稀釋→取不同稀釋度菌液0.1 mL加在固體培養基表面→涂布器均勻涂布→適當稀釋度下得到單菌落。
避免接種環上可能存在的微生物污染培養物
殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端
減少
及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者
5.判斷液體培養基成功接種酵母菌的依據：與對照組相比，液體培養基由于酵母菌的增殖而變 　　，可推斷液體培養基中接種酵母菌成功。
6.稀釋涂布平板法對微生物計數的公式：每毫升菌液中微生物細胞的數量＝某一稀釋倍數下至少3個培養皿的平均菌落數÷菌液稀釋液體積×稀釋倍數。
7.顯微鏡計數中，要“先蓋片再滴液”。 計數時取樣方法：“______取樣”(五個中方格，共計80 個小方格)，壓線細胞計數原則“數上不數下”“數左不數右”。計算公式：酵母細胞個數/mL＝_______________
_______________________________。
渾濁
五點
80個小方格細胞
總數/80×400×10 000×稀釋倍數
8.選擇培養基：在培養基中　　　　　　　某種化學成分，使得只有某些　　　的微生物能夠生長，　　　微生物均不能生長，即“選擇所需，淘汰不需”。用途：快速篩選出　　　　　　或特定細胞。
9.鑒別培養基：“鑒定所需”，其他非目標微生物也可以生長，但目標微生物會發生特征性的變化。
添加(或減去)
特定
其他
目標微生物
10.能分解尿素的微生物的分離與計數實驗原理：
(1)當培養基中只有　　　作為氮源時，只有能分泌　　　的微生物才能在該培養基中生長。
(2)微生物分解尿素產生的氨會使培養基的堿性增強，可利用__________
鑒定尿素分解菌。
(3)菌落周圍呈紅色，圓形紅色區域越大，這種菌利用尿素的能力越　　。
11.培養未接種的培養基目的是檢查培養基制備是否合格；全營養培養基接種目的是檢測選擇培養基是否有選擇作用。
尿素
脲酶
酚紅指示劑
強
三、發酵工程為人類提供多樣的生物產品
1.利用酵母菌、醋酸菌制作果酒和果醋原理：
(1)果酒：酵母菌在　　　條件下，通過厭氧呼吸，將葡萄糖氧化為______和　　　　　。
(2)果醋：醋酸菌在　　　條件下可將乙醇氧化為　　　。
2.在葡萄酒的制作過程中，應先進行沖洗，然后再去除葡萄的枝梗，且沖洗時不能反復沖洗。
無氧
乙醇
二氧化碳
有氧
醋酸
3.發酵工程的基本環節：菌種的選育→菌種的　　　　　→接種→發酵過程的控制→發酵產品的　　　　　　。
4.分離或提純發酵產品是工業發酵制取產品必經的步驟。如果發酵的產品是菌體本身，可采用　　　　　　等方法將菌體從培養液中分離出來；如果發酵產品是微生物的代謝產物，則可采用　　　　　、吸附發酵、__________等方法進行提取。
5.發酵工程的特點：生產條件　　　，原料　　　且價格低廉，廢棄物對環境影響　　且容易處理。
擴大培養
分離和提純
過濾、沉淀
真空發酵
萃取發酵
溫和
豐富
小
6.對發酵條件進行調控以滿足微生物生長的需要，需要對____________
_________等發酵條件進行嚴格控制，同時添加必要的　　　　　，保證發酵生產高效順利進行。
溫度、pH、
溶解氧
營養組分
1.固體培養基表面的微生物生長速度比液體培養基中慢，原因是_______
____________________________________________________________。
2.平板中培養基冷卻凝固后，將培養皿倒過來放置，原因是___________
____________________________________________________________。
3.在第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，原因是_________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________________。
長句表達
細胞與固體培養基的接觸面積較小，細胞與環境間物質交換速度相對較慢
可以防止水分過快蒸發，又可以防止冷凝后形成的水滴落在培養基中造成污染
劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落
4.如何判斷培養基是否被雜菌污染：_______________________________
________________________________________。
5.細菌計數時往往會產生實驗誤差，稀釋涂布平板法計數的值比實際值______，原因是_________________________________________________
_______；顯微鏡計數法計數的結果比實際值　　　，原因是__________
________________________________________________________。
6.判斷選擇培養基是否起到篩選作用的方法：_______________________
_________________________________________________________________________________。
培養未接種的培養基，觀察是否有菌落生長；如果有，說明培養基被雜菌污染
偏小
當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落
偏大
顯微鏡下無法區分細胞的死活，統計結果一般是活菌數和死菌數的總和
配制牛肉膏蛋白胨培養基作為對照，觀察選擇培養基上的菌落數目是否遠少于牛肉膏蛋白胨培養基上的菌落數目
7.現在要從土壤中分離纖維素分解菌，請你給出實驗方案：___________
_____________________________________________________________________________________________________________________。
8.果酒、果醋發酵時，瓶中的葡萄的總體積不要超過礦泉水瓶體積的1/2，原因是_________________________________________________________
_________________________________________。
9.將吸管長臂端插入水中的作用：
(1) ；
(2)　　　　　　　　　　　；
(3) 　　　　　　　　　　　　　　。
用“纖維素作為唯一碳源”的選擇培養基進行培養，并在培養基中加入剛果紅試劑進行鑒定。在培養基上形成透明圈的菌落即為纖維素分解菌
留有1/2的空間，其中的氧氣能促進酵母菌快速繁殖；酵母菌發酵會產生CO2，葡萄過多可能導致發酵液溢出
防止O2進入
防止空氣中的雜菌污染
排出CO2，平衡發酵瓶內壓強
10.如圖為制作果酒和果醋的發酵裝置圖，排氣口要通過一個長而彎曲的膠管(b)與瓶身相連，這樣做的目的是______________________________
_______。進行醋酸發酵和酒精發酵時，對圖中哪一處操作有差異？請具體指明：_______________________________________________________
___________________________________________。
避免空氣中其他微生物進入發酵
裝置
使用該裝置制作果酒時，應該關閉充氣口(a)；制作果醋時，應將充氣口(a)連接氣泵，輸入氧氣(無菌空氣)
11.泡菜制作原理是利用附生在蔬菜表面的　　　　　　、短乳桿菌和明串珠菌等發酵制成的。這些微生物一般為　　　、兼性厭氧或微好氧菌。
12.對于新配制的泡菜原料，若加入一些陳泡菜汁，可以縮短腌制時間，這是因為　　　　　　　　　　　　　。
13.泡菜制作時，用水密封泡菜壇的目的是 。在發酵后期，乳酸菌數量減少，原因是_____________________________
______________________。
植物乳桿菌
厭氧
陳泡菜汁中有較多的發酵菌
給泡菜壇內創造無氧環境
乳酸的積累使壇中pH下降，抑制了乳酸菌的生命活動

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