資源簡介

(共18張PPT)
PCR的應用
基因工程拓展
2025/3/26
連接兩個DNA片段
1.重疊延伸PCR
A．第一階段過程中的產物是依賴引物1、引物2和引物3、引物4擴增的結果
B．引物2和引物3上均含有與模板鏈不能互補的堿基
C．PCR過程中需要先加熱至90 ℃以上后再冷卻至72 ℃左右
D．第三階段需要利用引物1和引物4獲得目的基因
1.下圖是利用重疊延伸PCR技術擴增某目的基因的過程。分析不正確的是(　　)
練習
C
定點突變
1.重疊延伸PCR
1.逆轉錄PCR
mRNA 、RNA病毒
RNA酶消化
2.熱啟動PCR
55℃
0℃
減少反應起始時引物錯配形成的產物
3.降落PCR
從模板上擴增
擴增先前的PCR產物
第一階段：擴增18-20個循環
第二階段：擴增20-25個循環
提高特異性擴增
4.巢式PCR
模板
使用外引物，進行第一次PCR
使用內引物，進行第二次PCR
第一次PCR產物
第二次PCR產物
提高特異性擴增
切膠回收
純化目的產物
5.定量PCR
實時定量檢測PCR擴增產物
染料法
TaqMan探針法
游離的染料幾乎不產生熒光，
和雙鏈DNA結合后發射強熒光。
探針完整時，不產生熒光；探針被Taq酶水解，R與Q分離，發出熒光。
5.定量PCR
實時定量檢測PCR擴增產物
循環數
熒光強度
Ct值
Ct值：熒光信號達到設定閾值時所經歷的循環數
閾值
1. 樣本中初始模板數量越多，Ct值越 。
2.若A樣本Ct值為20，B樣本Ct值為30，則A樣本和B樣本中模板DNA的比值為 。
檢測樣本CT如果值小于或等于30，且指數增長期明顯，則檢測結果呈陽性，表明患有新型冠狀病毒。
練習
6.反向PCR
擴增已知序列兩側的未知序列
限制酶切
自身環化
反向PCR
測序
已知序列
未知序列

展開更多......

收起↑