資源簡介

模塊檢測卷(二)
(時間：75分鐘　滿分：100分)　
一、單項選擇題(共14小題，每小題2分，共28分，每小題只有一個選項符合題目要求。)
1.下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，下列敘述正確的是(　　)
成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 指示劑 瓊脂
含量/g 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0
將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL
根據(jù)物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基
蛋白胨可為目標(biāo)微生物提供氮源
該培養(yǎng)基也可用來篩選土壤中的尿素分解菌
該培養(yǎng)基的制備流程為滅菌→加入瓊脂→倒平板
2.某同學(xué)用白蘿卜制作泡菜后，想從泡菜汁中篩選耐高鹽乳酸菌，進行了如下實驗：取泡菜汁樣品，劃線接種于一定NaCl濃度的培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)得到了單菌落。下列敘述正確的是(　　)
篩選得到的微生物不一定是乳酸菌
培養(yǎng)基pH偏堿性
泡菜汁需多次稀釋后才能劃線接種
若采用涂布接種，所用的菌濃度應(yīng)控制在30～300個/mL
3.(2024·江蘇連云港階段練習(xí))人們在研究、利用微生物時，需用無菌技術(shù)培養(yǎng)獲取純種微生物，并對其進行計數(shù)或保存。下列有關(guān)敘述正確的是(　　)
用稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，結(jié)果往往比實際值高
平板劃線操作中，灼燒接種環(huán)的次數(shù)多于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)
高壓蒸汽滅菌后，打開排氣閥，待壓力表指針降至“0”后開蓋取物
獲得純種微生物后，利用涂布平板法接種至斜面培養(yǎng)基上，進行低溫保存
4.(2024·江蘇淮安階段練習(xí))為獲得優(yōu)良的發(fā)酵食品，實驗室在三支試管中培養(yǎng)了酵母菌、醋酸菌、乳酸菌。如圖中甲、乙、丙三支試管的菌種(試管內(nèi)深色區(qū)域表示菌種存在的位置)及其發(fā)酵食品對應(yīng)正確的是(　　)
甲試管：醋酸菌——泡菜；乙試管：乳酸菌——果酒；丙試管：酵母菌——果醋
甲試管：醋酸菌——果醋；乙試管：乳酸菌——泡菜；丙試管：酵母菌——果酒
甲試管：醋酸菌——果醋；乙試管：酵母菌——果酒；丙試管：乳酸菌——泡菜
甲試管：酵母菌——果酒；乙試管：醋酸菌——果醋；丙試管：乳酸菌——泡菜
5.(2024·江蘇階段練習(xí))黑啤因其營養(yǎng)成分豐富、口感純正，備受人們青睞，享有“黑牛奶”的美譽。黑啤的釀造工藝流程如下圖。相關(guān)敘述錯誤的是(　　)
不同品種的啤酒特性與酵母菌的品種密切相關(guān)
麥汁煮沸的主要目的是殺菌和終止相關(guān)酶的作用
發(fā)酵過程中發(fā)酵液的密度有所減小、pH有所降低
罐裝前通常采用巴氏消毒法殺死啤酒中全部微生物
6.中藥藿香長期種植會出現(xiàn)種質(zhì)退化、易感染病蟲害等問題。為解決這些問題，研究者對組織培養(yǎng)過程中不同階段的藿香進行了輻射處理(如圖)，以期獲得性狀優(yōu)良的突變株。下列敘述錯誤的是(　　)
組織培養(yǎng)過程中細胞分裂旺盛，輻射處理易發(fā)生不定向突變
過程①在接種前，外植體常用無水乙醇和氯化汞溶液消毒
②③④過程添加的植物激素濃度和比例不相同
篩選出目標(biāo)突變株后可利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)藥用成分
7.(2024·江蘇揚州階段練習(xí))航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細胞跳動的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是(　　)
培養(yǎng)心肌細胞的器具和試劑都要先進行高壓蒸汽滅菌
培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳
心肌細胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖
心肌細胞在無重力的作用下不能完成收縮
8.生物工程的操作常常涉及下面的流程，下列說法正確的是(　　)
若圖為核移植過程，則從卵巢中獲取的②卵母細胞可直接作為受體細胞和①供體細胞融合
若圖為單克隆抗體的制備過程，需要篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞
若圖為動物細胞融合過程，所獲得的動物個體不可育
若圖為植物體細胞雜交過程，則形成的④具有兩個親本的全部優(yōu)良性狀
9.科研人員制作了某哺乳動物三個組織或細胞的基因組文庫和cDNA文庫，標(biāo)號如圖所示。下列敘述錯誤的是(　　)
若庫A中不含甲狀腺激素基因，則庫B中含血紅蛋白基因
若庫C中含促甲狀腺激素基因，則庫D中不含胰島素基因
若庫E中不含任何基因，則庫F中可能含有很少量的基因
庫A和庫B含有相同的基因，但這些基因的長度一般有差別
10.動物生物反應(yīng)器和研究開發(fā)重點是動物乳腺反應(yīng)器，可把人體相關(guān)基因?qū)氲讲溉閯游锏穆鸭毎校股龅霓D(zhuǎn)基因動物長大后產(chǎn)生的乳汁中含有人類所需要的不同蛋白質(zhì)。培育作為“生物反應(yīng)器”的動物涉及的現(xiàn)代生物技術(shù)有(　　)
①基因工程　②體外受精　③胚胎移植　④早期胚胎培養(yǎng)
①②③ ②③④
①③④ ①②③④
11.(2024·江蘇連云港一模)基因工程中，為方便純化蛋白質(zhì)，構(gòu)建表達載體時可將目的基因序列與標(biāo)簽基因序列連接，表達含有標(biāo)簽的融合蛋白。下圖為某質(zhì)粒編碼鏈(轉(zhuǎn)錄時的非模板鏈)的部分序列。下列相關(guān)敘述錯誤的是(　　)
轉(zhuǎn)錄后的mRNA序列與圖中DNA序列一致，僅T替換為U
若目的蛋白中只保留組氨酸標(biāo)簽，選擇酶切位點時優(yōu)先考慮NdeⅠ和XhoⅠ(或AvaⅠ)
若目的蛋白中保留了組氨酸標(biāo)簽，翻譯時標(biāo)簽下游的基因序列不編碼氨基酸
以組氨酸標(biāo)簽的基因序列為模板設(shè)計下游引物，擴增導(dǎo)入成功的目的基因時，獲得的序列可能比預(yù)期的序列短
12.科學(xué)家利用基因工程培育出了能產(chǎn)生乙肝病毒蛋白質(zhì)的西紅柿，被稱之為“西紅柿乙肝疫苗”。具體操作是：將乙肝抗原基因M導(dǎo)入農(nóng)桿菌，然后利用農(nóng)桿菌將M導(dǎo)入西紅柿細胞。實驗顯示小白鼠連續(xù)五周吃這樣的西紅柿，體內(nèi)產(chǎn)生了抗乙肝病毒的抗體，下列敘述錯誤的是(　　)
實驗用PCR技術(shù)對M基因進行擴增，需要兩種引物
含M的重組Ti質(zhì)粒必須插入到西紅柿染色體DNA上
即使M在西紅柿中成功表達，也要做個體水平鑒定
西紅柿乙肝疫苗成本相對較低且易于儲存
13.凝乳酶是奶酪生產(chǎn)中的關(guān)鍵性酶。科學(xué)家采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對凝乳酶進行改造，將其第20位和第24位氨基酸改變?yōu)榘腚装彼幔呋芰μ岣吡?倍。下列敘述錯誤的是(　　)
該技術(shù)需要先預(yù)期蛋白質(zhì)的功能
該技術(shù)直接操作對象是凝乳酶基因
該技術(shù)可直接在體外合成凝乳酶
改造后的凝乳酶需進行生物功能檢測
14.一對夫婦都是O 型血，通過“試管嬰兒”技術(shù)卻生下一個A型血的孩子。經(jīng)檢測，作為獨生子的丈夫被確診為“異源嵌合體”(指身體中存在來自不同受精卵的細胞群)，該孩子的血型與“異源嵌合體”有關(guān)。下列敘述正確的是(　　)
“試管嬰兒”的培育過程涉及細胞核移植、體外受精等技術(shù)
“試管嬰兒”與“克隆動物”的原理相同，不會面臨倫理問題
該丈夫可能是在胚胎期“吸收”了異卵雙生兄弟的早期胚胎
可將2個囊胚的內(nèi)細胞團與滋養(yǎng)層交換重組，構(gòu)建“異源嵌合體”
二、多項選擇題(共4小題，每小題3分，共12分。每題有不止一個選項符合題意，每題全選對者得3分，選對但不全的得1分，錯選或不答的得0分。)
15.(2024·江蘇連云港階段練習(xí))魚茶味酸而微咸，富含多種必需氨基酸。魚茶的發(fā)酵菌群主要是乳酸菌，如圖是某同學(xué)繪制的魚茶發(fā)酵過程中各菌種數(shù)量及發(fā)酵液pH的變化曲線。下列敘述正確的是(　　)
與制作傳統(tǒng)泡菜類似，魚茶發(fā)酵也無需嚴格滅菌
魚茶發(fā)酵初期，各菌種的種間關(guān)系主要是種間競爭
利用顯微鏡直接計數(shù)可快速直觀檢測微生物數(shù)量
醋酸菌和酵母菌消失的原因都是因為氧氣已耗盡
16.單倍體胚胎干細胞是指只含一套染色體，但擁有類似于正常干細胞分裂分化能力的細胞群。利用小鼠建立單倍體胚胎干細胞的操作如圖所示。下列敘述錯誤的是(　　)
體外受精前應(yīng)將卵母細胞培養(yǎng)至MⅠ中期
建立的單倍體胚胎干細胞中只含一條性染色體X或Y
上述過程涉及動物細胞培養(yǎng)、體外受精等操作
理論上可用物質(zhì)激活卵母細胞完成MⅡ?qū)崿F(xiàn)由①直接轉(zhuǎn)變?yōu)棰?br/>17.(2024·江蘇南通階段練習(xí))下列關(guān)于“DNA的粗提取和鑒定”“利用PCR技術(shù)擴增DNA片段并完成電泳鑒定”實驗的敘述，錯誤的是(　　)
將預(yù)冷乙醇加入上清液后，出現(xiàn)的白色絲狀物為粗提取的DNA
鑒定DNA時應(yīng)將絲狀物直接加到二苯胺試劑中進行水浴加熱
將擴增得到的PCR產(chǎn)物與含指示劑的電泳緩沖液混合，注入加樣孔
在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小、構(gòu)象等有關(guān)
18.融合PCR技術(shù)采用具有互補末端的引物，形成具有重疊鏈的PCR產(chǎn)物，通過PCR產(chǎn)物重疊鏈的延伸，從而將不同來源的任意DNA片段連接起來。其原理如圖所示，據(jù)圖分析正確的是(　　)
上述過程中使用的引物P2和P3的堿基需要完全互補配對
設(shè)計引物的目的是為了能夠從其3′端開始連接脫氧核苷酸
融合PCR的第一步兩條鏈重疊部位可互為另一條鏈的引物
若融合PCR的第二步獲得128個融合基因，理論上該過程消耗了254個引物
三、非選擇題(共4小題，共60分。)
19.(15分)不對稱體細胞雜交是指利用射線破壞供體細胞的染色質(zhì)，與未經(jīng)射線照射的受體細胞融合，所得融合細胞含受體全部遺傳物質(zhì)及供體部分遺傳物質(zhì)。紅豆杉的次級代謝產(chǎn)物紫杉醇是一種高效抗癌藥物，但由于紅豆杉野生資源匱乏，且紅豆杉植株紫杉醇含量極低，導(dǎo)致了紫杉醇的供應(yīng)嚴重不足。因此，研究人員嘗試運用不對稱體細胞雜交將紅豆杉(2n＝24)與柴胡(2n＝12)進行了融合，培育能產(chǎn)生紫杉醇的柴胡，過程如下圖。請回答下列問題。
注：X 射線處理能隨機破壞染色體結(jié)構(gòu)，使其發(fā)生斷裂、易位、染色體消除等，使細胞不再持續(xù)分裂； 碘乙酰胺處理使細胞質(zhì)中的某些酶失活，抑制細胞分裂。
(1)(2分)過程①中需將植物組織經(jīng)________后接種于 MS 培養(yǎng)基上誘導(dǎo)________過程，產(chǎn)生愈傷組織。
(2)(6分)過程②中將愈傷組織加入________________酶液去壁，離心后棄去上清液，加入洗液多次洗滌后獲得原生質(zhì)體。多次洗滌的目的是________________________。對紅豆杉和柴胡原生質(zhì)體進行的 A、B 處理分別為________________。
(3)(1分)采用二乙酸熒光素(FDA) 法可測定原生質(zhì)體活力。已知FDA本身無熒光，當(dāng)其進入細胞后可被酯酶分解為無毒、具有熒光的物質(zhì)，該熒光物質(zhì)不能透過活細胞質(zhì)膜，會留在細胞內(nèi)發(fā)出熒光。據(jù)此應(yīng)選擇________的原生質(zhì)體用于融合。
(4)(1分)過程③常用的化學(xué)試劑是____________________，經(jīng)誘導(dǎo)融合后，只有異源融合的原生質(zhì)體可持續(xù)分裂形成再生細胞團。
(5)(5分)科研人員對獲得的部分植株細胞進行染色體觀察、計數(shù)和DNA 分子標(biāo)記鑒定，結(jié)果如下：
后代植株類型 染色體數(shù)目、形態(tài) DNA分子標(biāo)記鑒定
甲 12，形態(tài)與柴胡染色體相似 含雙親DNA片段
乙 12，形態(tài)與柴胡染色體相似 無紅豆杉DNA片段
丙 12, 形態(tài)與柴胡染色體相似 含雙親DNA片段和新的DNA片段
由表可知，后代植株中________類型一定不是所需植株。科研人員推測雜種植株的染色體主要來源親本________的染色體，另一方親本的遺傳物質(zhì)可能不是以染色體的形式存在于雜種植株細胞中，而是以DNA片段的方式整合進柴胡的基因組，作出以上推測的依據(jù)是______________________________________________
_____________________________________________________________________。
20.(15分)EV71是引發(fā)手足口病的一種人腸道病毒。為制備抗EV71的單克隆抗體，科研人員用小鼠進行實驗。
(1)(2分)將EV71滅活病毒、EV71外殼蛋白VP1和VP2作為________分別注射到3組小鼠體內(nèi)，引發(fā)小鼠機體的________免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。
(2)(4分)多次免疫后，分別取上述3組小鼠的血清和未免疫小鼠血清，測定抗體與抗原的結(jié)合強度，結(jié)果如圖所示。EV71免疫的小鼠血清抗體________(填“是”或“不是”)單一抗體，判斷依據(jù)是______________________________________
_____________________________________________________________________。
(3)(3分)在制備單克隆抗體過程中，需要利用的技術(shù)有動物細胞融合和____________，常用的誘導(dǎo)動物細胞融合的生物法是________________，化學(xué)試劑是________________。
(4)(6分)雙抗體夾心法是醫(yī)學(xué)上常用的定量檢測抗原的方法，具體原理如下圖：
①固相抗體和酶標(biāo)抗體均能與抗原結(jié)合，這是由于不同抗體與同一抗原表面的不同部位結(jié)合。該檢測方法中，酶標(biāo)抗體的作用是_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________。
②研究人員獲得三種抗EV71單克隆抗體，分別記為A、B、C，為檢測它們之中哪兩種適合用于雙抗體夾心法，科研人員需要進行________組實驗，檢測并比較各組實驗的產(chǎn)物量。
21.(15分)(2024·江蘇常州期末)下圖1是QuickChange定點突變技術(shù)及副反應(yīng)的示意圖，其中的F和R代表引物，其上含有突變的堿基序列。請回答下列問題。
(1)(3分)圖中PCR反應(yīng)體系進行時，除需要加入引物F和引物R、原始質(zhì)粒、緩沖液外，還需加入的物質(zhì)有________________。
(2)(4分)已知DpnⅠ酶是一種限制酶，能特異性識別腺嘌呤甲基化的GATC序列。由圖可知，在原始質(zhì)粒上有________(填“0”“1”或“很多”)個DpnⅠ酶的切割位點。為成功獲得帶缺刻突變質(zhì)粒，應(yīng)對來自大腸桿菌的原始質(zhì)粒進行的處理是______________________________________________________________________。
(3)(8分)圖中的DH5a細胞是處于________的大腸桿菌，對帶缺刻突變質(zhì)粒進行修復(fù)時需要添加____________酶。圖中副反應(yīng)發(fā)生的原因是新鏈退火時，兩條新鏈互補配對，互為復(fù)制的____________，擴增出非目的片段。該技術(shù)除了圖示副反應(yīng)外，還存在的不足是__________________________________________________
_____________________________________________________________________。
22.(15分)黃瓜花葉病毒能感染多種植物，對煙草的危害尤其嚴重。病毒的Cu－4基因表達所形成的蛋白是子代病毒形成和釋放的關(guān)鍵蛋白。研究人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得能表達Cu－4基因反義RNA的轉(zhuǎn)基因煙草，反義RNA與Cu－4基因轉(zhuǎn)錄獲得的mRNA互補結(jié)合形成雙鏈RNA，阻止了mRNA的翻譯，從而獲得了抵抗該病毒的能力。在Cu－4基因(A鏈?zhǔn)悄０彐?一側(cè)連接了帶有細菌啟動子的四環(huán)素抗性基因(在植物細胞該基因會被完整切除)，如圖1所示。圖2是Ti質(zhì)粒相關(guān)基因圖譜。
備注：Cu－4基因長度為300 bp，tetr基因長度為500 bp。Ⅰ～Ⅵ是四種引物。
LB和RB是T－DNA的界，EcoRⅠ和XhoⅠ是兩種限制酶，切割后形成的黏性末端不互補。
P35S和TRBC是僅在植物細胞中發(fā)揮功能的啟動子和終止子。tetr和ampr分別是四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因。所用農(nóng)桿菌不具有氨芐青霉素、四環(huán)素和潮霉素抗性。
(1)(4分)人工合成如圖1所示的DNA片段后，利用引物組合________(A.引物Ⅰ和Ⅳ；B.引物Ⅱ和Ⅲ；C.引物Ⅰ和Ⅲ；D.引物Ⅱ和Ⅵ)進行PCR擴增，為使圖1所示的DNA片段能與載體正確連接，在引物的5′端分別添加________________酶的識別序列，將Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，可使用含有________的培養(yǎng)基進行篩選。
(2)(5分)在將農(nóng)桿菌接種在煙草葉片前用砂紙輕微摩擦煙草葉片，目的是________________________________________。接種一段時間后，將煙草葉片酶解，獲取分散的葉肉細胞。將葉肉細胞培養(yǎng)在含有潮霉素的培養(yǎng)基中擴增培養(yǎng)，其中潮霉素的作用是____________。
(3)(1分)提取葉肉細胞的總DNA，酶切后用相應(yīng)的PCR引物進行擴增，電泳后若觀察到長度為________的片段，則說明所需的基因?qū)胫参锛毎小?br/>(4)(5分)將具有黃瓜花葉病毒抗性的煙草進行自然種植時，需考慮轉(zhuǎn)基因作物的安全性問題。研究人員發(fā)現(xiàn)將目的基因轉(zhuǎn)移到植物細胞線粒體或葉綠體中可降低基因漂移發(fā)生的風(fēng)險，原理是____________________________________________
_____________________________________________________________________。
模塊檢測卷(二)
1.B　[從配方上看，該培養(yǎng)基含有瓊脂，因此不屬于液體培養(yǎng)基，A錯誤；若要篩選出土壤中的尿素分解菌，需要以尿素作為唯一氮源，需要將蛋白胨改為尿素才能用來篩選土壤中的尿素分解菌，C錯誤；該培養(yǎng)基的制備流程為加入瓊脂→滅菌→倒平板，D錯誤。]
2.A　[乳酸菌為細菌，培養(yǎng)基pH需調(diào)至中性或弱堿性，B錯誤；平板劃線接種時不需要稀釋，C錯誤；涂布用的菌液體積為0.1 mL，培養(yǎng)皿中菌落數(shù)要求在30～300個，則涂布用的菌濃度應(yīng)控制在300 ～3 000個/mL，D錯誤。]
3.B　[用稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，由于兩個或多個細菌常形成一個菌落，因此結(jié)果往往比實際值低，A錯誤；高壓蒸汽滅菌后，待壓力表指針降至“0”后打開排氣閥，開蓋取物，C錯誤；獲得純種微生物后，利用劃線分離法接種至斜面培養(yǎng)基上，進行低溫保存，D錯誤。]
4.B　[參與果醋制作的菌種是醋酸菌，為好氧細菌，在試管的上層，對應(yīng)甲試管；參與泡菜制作的菌種是乳酸菌，為厭氧菌，在試管的底層，對應(yīng)乙試管；參與果酒制作的菌種是酵母菌，為兼性厭氧菌，在試管的各個部分都有分布，對應(yīng)丙試管。A、C、D錯誤，B正確。]
5.D　[不同種類的酵母具有不同的發(fā)酵能力和風(fēng)味特點，A正確；麥汁煮沸的主要目的是使淀粉酶失活，終止酶的作用，并對糖漿殺菌，B正確；隨著發(fā)酵程度的加深，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分逐漸被消耗，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分的濃度降低，其液體密度自然就下降了，由于發(fā)酵過程中酵母菌細胞呼吸會產(chǎn)生CO2，溶于發(fā)酵液會降低發(fā)酵液的pH，C正確；罐裝前用巴氏消毒法殺死啤酒中大多數(shù)微生物，延長它的保存期，D錯誤。]
6.B　[植物組織培養(yǎng)過程中細胞分裂旺盛，輻射處理易發(fā)生突變，且突變是不定向的，A正確；消毒通常使用體積分數(shù)為70%的酒精，不使用無水乙醇，B錯誤]
7.B　[培養(yǎng)心肌細胞的器具要先進行高壓蒸汽滅菌，但是試劑并不都需要滅菌，如動物血清不能進行高壓蒸汽滅菌，否則會使其中的成分失活，A錯誤；心肌細胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂增殖，但增殖一定時間后會出現(xiàn)接觸抑制，C錯誤；心肌細胞在無重力的作用下也能完成收縮，D錯誤。]
8.B　[若圖為核移植過程，在體細胞核移植過程中，應(yīng)選擇成熟的卵母細胞作為受體細胞，因此需要將卵母細胞培養(yǎng)至成熟，且需要去掉卵母細胞的細胞核，不是直接作為受體，A錯誤；若圖為動物細胞融合過程，所獲得的是雜種細胞，而不能獲得動物個體，C錯誤；若圖為植物體細胞雜交過程，則形成的④(雜交細胞)，具有兩個親本的全部遺傳物質(zhì)，D錯誤。]
9.B　[垂體可以分泌促甲狀腺激素，所以若庫C中含促甲狀腺激素基因，則庫C可能是cDNA文庫，也可能是基因組文庫，庫D中含不含胰島素基因無法確定，B錯誤。]
10.D　[培育作為“生物反應(yīng)器”的動物需要的技術(shù)流程為，首先將所需要的不同蛋白質(zhì)的相關(guān)基因表達載體通過基因工程技術(shù)導(dǎo)入動物的受精卵中，該受精卵可通過體外受精獲得，而后將轉(zhuǎn)基因成功的受精卵經(jīng)早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植，而后培育出能生產(chǎn)所需要的不同蛋白質(zhì)的動物，該動物稱為生物反應(yīng)器，D正確。]
11.D　[質(zhì)粒的編碼鏈不含內(nèi)含子，與轉(zhuǎn)錄后的mRNA鏈序列一致，僅T換成U，A正確；若目的蛋白中只保留組氨酸標(biāo)簽，選擇酶切位點時優(yōu)先考慮NdeⅠ和XhoⅠ(或AvaⅠ)，以去除T7標(biāo)簽的基因序列，同時保留NdeⅠ識別序列中對應(yīng)的起始密碼子，B正確；標(biāo)簽下游TGA對應(yīng)的密碼子為UGA，為終止密碼子，不編碼氨基酸，C正確；擴增導(dǎo)入成功的目的基因時，以組氨酸標(biāo)簽的基因序列為模板設(shè)計下游引物，獲得的序列為目的基因序列＋標(biāo)簽基因序列，比預(yù)期的序列長，D錯誤。]
12.B　[導(dǎo)入目的基因前需要對M基因擴增，PCR需要兩種引物結(jié)合M基因的兩條鏈合成相應(yīng)子鏈，A正確；含M的T－DNA插入到西紅柿染色體DNA上，才能穩(wěn)定存在和表達，而不是整個Ti質(zhì)粒，B錯誤；即使M在西紅柿中成功表達，也必須做個體水平鑒定，來確定實際效果，C正確；西紅柿種植容易，成本低且易儲存，D正確。]
13.C　[采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對凝乳酶進行改造之前需要先預(yù)期蛋白質(zhì)的功能，A正確；蛋白質(zhì)工程以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，對編碼該蛋白的基因進行有目的的設(shè)計改造，以改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)，故對凝乳酶進行改造技術(shù)中直接操作對象是凝乳酶基因，B正確；該技術(shù)不能直接在體外合成凝乳酶，而是對凝乳酶基因進行改造，實現(xiàn)對凝乳酶的改造，C錯誤；改造后的凝乳酶需進行生物功能檢測，以確保獲得預(yù)期的凝乳酶，D正確。]
14.C　[“試管嬰兒”技術(shù)不涉及細胞核移植技術(shù)，A錯誤；“試管嬰兒”屬于有性生殖，而“克隆動物”屬于無性生殖，兩者原理不同，且兩者均會面臨倫理問題，B錯誤；內(nèi)細胞團將來發(fā)育為胎兒的各種組織，而滋養(yǎng)層發(fā)育為胎膜和胎盤，在現(xiàn)有技術(shù)條件下，無法將2個囊胚的內(nèi)細胞團與滋養(yǎng)層交換重組，構(gòu)建“異源嵌合體”，D錯誤。]
15.ABC　[酵母菌可進行無氧呼吸，消失的原因是養(yǎng)料耗盡、代謝廢物積累等，D錯誤。]
16.ABD　[體外受精前應(yīng)將卵母細胞培養(yǎng)至減數(shù)分裂Ⅱ中期，A錯誤；精子中含有的性染色體為X染色體或Y染色體，卵細胞中含有的性染色體為X染色體，由圖可知，在建立單倍體胚胎干細胞過程中，是去除雄原核，所以獲得的單倍體干細胞中含有的性染色體是X染色體，而不含Y染色體，B錯誤；激活卵母細胞完成MⅡ得到的是卵細胞和極體，二者都不具備分裂能力，所以不能得到單倍體胚胎干細胞，D錯誤。]
17.BC　[鑒定DNA時，應(yīng)先將絲狀物溶解在2 mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺試劑并進行沸水浴，B錯誤；瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中不含指示劑，凝膠中的DNA分子通過染色，可以在紫外燈下被檢測出來，C錯誤。]
18.BCD　[上述過程中使用的引物P2和P3的堿基不需要完全互補配對，只需要與DNA的兩條模板鏈的兩端互補配對即可，A錯誤；引物為一段核苷酸鏈，引物與DNA模板鏈結(jié)合后，能夠從其3′端開始連接脫氧核苷酸，開始子鏈的合成，B正確；結(jié)合圖示可知，融合PCR的第一步兩條鏈重疊部位互補配對，即可互為另一條鏈的引物，C正確；若融合PCR的第二步獲得了128個融合基因，引物數(shù)目和新合成的子鏈數(shù)目相同，即該過程消耗了128×2－2＝254(個)引物，D正確。]
19.(1)消毒　脫分化　(2)纖維素酶、果膠酶　去除原生質(zhì)體上殘留的酶液　X射線、碘乙酰胺　(3)有熒光　(4)聚乙二醇(PEG)
(5)乙　柴胡　甲、丙類型植株細胞的染色體與柴胡細胞中的染色體數(shù)目相同、形態(tài)相似，且含有雙親的 DNA 片段
20.(1)抗原　體液　(2)不是　EV71免疫的小鼠血清可以結(jié)合EV71、VP1和VP2多種抗原　(3)動物細胞培養(yǎng)　滅活病毒誘導(dǎo)法　聚乙二醇(PEG)　(4)①與待測抗原結(jié)合；酶催化檢測底物反應(yīng)，可通過測定酶反應(yīng)產(chǎn)物量來判斷待測抗原量　②6
21.(1)dNTP、Taq酶　(2)很多　使原始質(zhì)粒中的GATC序列的腺嘌呤甲基化　(3)感受態(tài)　DNA連接　模板和引物　引物F和引物R會互補配對，導(dǎo)致PCR產(chǎn)物減少
22.(1)B　XhoⅠ和EcoRⅠ　四環(huán)素　(2)增加葉片傷口數(shù)量，提高農(nóng)桿菌侵染成功率　去除農(nóng)桿菌　(3)300 bp　(4)基因漂移常通過傳粉過程進行，而受精過程中，雄配子只有細胞核基因傳遞給了下一代，細胞質(zhì)基因并未傳給下一代(即細胞質(zhì)基因不能通過花粉或精子傳遞給下一代)(共64張PPT)
模塊檢測卷(二)
(時間：75分鐘　滿分：100分)
B
一、單項選擇題(共14小題，每小題2分，共28分，每小題只有一個選項符合題目要求。)
1.下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，下列敘述正確的是(　　)
成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 指示劑 瓊脂
含量/g 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0
將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL
A.根據(jù)物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基
B.蛋白胨可為目標(biāo)微生物提供氮源
C.該培養(yǎng)基也可用來篩選土壤中的尿素分解菌
D.該培養(yǎng)基的制備流程為滅菌→加入瓊脂→倒平板
解析：從配方上看，該培養(yǎng)基含有瓊脂，因此不屬于液體培養(yǎng)基，A錯誤；
蛋白胨(含有蛋白質(zhì)成分等)可為目標(biāo)微生物提供氮源，B正確；
若要篩選出土壤中的尿素分解菌，需要以尿素作為唯一氮源，需要將蛋白胨改為尿素才能用來篩選土壤中的尿素分解菌，C錯誤；
該培養(yǎng)基的制備流程為加入瓊脂→滅菌→倒平板，D錯誤。
2.某同學(xué)用白蘿卜制作泡菜后，想從泡菜汁中篩選耐高鹽乳酸菌，進行了如下實驗：取泡菜汁樣品，劃線接種于一定NaCl濃度的培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)得到了單菌落。下列敘述正確的是(　　)
A.篩選得到的微生物不一定是乳酸菌
B.培養(yǎng)基pH偏堿性
C.泡菜汁需多次稀釋后才能劃線接種
D.若采用涂布接種，所用的菌濃度應(yīng)控制在30～300個/mL
A
解析：參與泡菜發(fā)酵的微生物有乳酸菌、短乳桿菌和明串珠菌等，所以分離得到的微生物除了乳酸菌，還會有其他耐高鹽的微生物，A正確；
乳酸菌為細菌，培養(yǎng)基pH需調(diào)至中性或弱堿性，B錯誤；
平板劃線接種時不需要稀釋，C錯誤；
涂布用的菌液體積為0.1 mL，培養(yǎng)皿中菌落數(shù)要求在30～300個，則涂布用的菌濃度應(yīng)控制在300 ～3 000個/mL，D錯誤。
3.(2024·江蘇連云港階段練習(xí))人們在研究、利用微生物時，需用無菌技術(shù)培養(yǎng)獲取純種微生物，并對其進行計數(shù)或保存。下列有關(guān)敘述正確的是(　　)
A.用稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，結(jié)果往往比實際值高
B.平板劃線操作中，灼燒接種環(huán)的次數(shù)多于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)
C.高壓蒸汽滅菌后，打開排氣閥，待壓力表指針降至“0”后開蓋取物
D.獲得純種微生物后，利用涂布平板法接種至斜面培養(yǎng)基上，進行低溫保存
B
解析：用稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，由于兩個或多個細菌常形成一個菌落，因此結(jié)果往往比實際值低，A錯誤；
平板劃線法接種時第一次劃線前與每次劃線后都需要灼燒滅菌，因此灼燒接種環(huán)的次數(shù)多于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)，B正確；
高壓蒸汽滅菌后，待壓力表指針降至“0”后打開排氣閥，開蓋取物，C錯誤；
獲得純種微生物后，利用劃線分離法接種至斜面培養(yǎng)基上，進行低溫保存，D錯誤。
4.(2024·江蘇淮安階段練習(xí))為獲得優(yōu)良的發(fā)酵食品，實驗室在三支試管中培養(yǎng)了酵母菌、醋酸菌、乳酸菌。下圖中甲、乙、丙三支試管的菌種(試管內(nèi)深色區(qū)域表示菌種存在的位置)及其發(fā)酵食品對應(yīng)正確的是(　　)
A.甲試管：醋酸菌——泡菜；乙試管：乳酸菌——果酒；
丙試管：酵母菌——果醋
B.甲試管：醋酸菌——果醋；乙試管：乳酸菌——泡菜；
丙試管：酵母菌——果酒
C.甲試管：醋酸菌——果醋；乙試管：酵母菌——果酒；
丙試管：乳酸菌——泡菜
D.甲試管：酵母菌——果酒；乙試管：醋酸菌——果醋；
丙試管：乳酸菌——泡菜
B
解析：參與果醋制作的菌種是醋酸菌，為好氧細菌，在試管的上層，對應(yīng)甲試管；參與泡菜制作的菌種是乳酸菌，為厭氧菌，在試管的底層，對應(yīng)乙試管；參與果酒制作的菌種是酵母菌，為兼性厭氧菌，在試管的各個部分都有分布，對應(yīng)丙試管。A、C、D錯誤，B正確。
A.甲試管：醋酸菌——泡菜；乙試管：乳酸菌——果酒；丙試管：酵母菌——果醋
B.甲試管：醋酸菌——果醋；乙試管：乳酸菌——泡菜；丙試管：酵母菌——果酒
C.甲試管：醋酸菌——果醋；乙試管：酵母菌——果酒；丙試管：乳酸菌——泡菜
D.甲試管：酵母菌——果酒；乙試管：醋酸菌——果醋；丙試管：乳酸菌——泡菜
5.(2024·江蘇階段練習(xí))黑啤因其營養(yǎng)成分豐富、口感純正，備受人們青睞，享有“黑牛奶”的美譽。黑啤的釀造工藝流程如下圖。相關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A.不同品種的啤酒特性與
酵母菌的品種密切相關(guān)
B.麥汁煮沸的主要目的是
殺菌和終止相關(guān)酶的作用
C.發(fā)酵過程中發(fā)酵液的密度有所減小、pH有所降低
D.罐裝前通常采用巴氏消毒法殺死啤酒中全部微生物
D
解析：不同種類的酵母具有不同的發(fā)酵能力和風(fēng)味特點，A正確；
麥汁煮沸的主要目的是使淀粉酶失活，終止酶的作用，并對糖漿殺菌，B正確；
隨著發(fā)酵程度的加深，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分逐漸被消耗，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分的濃度降低，其液體密度自然就下降了，由于發(fā)酵過程中酵母菌細胞呼吸會產(chǎn)生CO2，溶于發(fā)酵液會降低發(fā)酵液的pH，C正確；
罐裝前用巴氏消毒法殺死啤酒中大多數(shù)微生物，延長它的保存期，D錯誤。
A.不同品種的啤酒特性與酵母菌的品種密切相關(guān)
B.麥汁煮沸的主要目的是殺菌和終止相關(guān)酶的作用
C.發(fā)酵過程中發(fā)酵液的密度有所減小、pH有所降低
D.罐裝前通常采用巴氏消毒法殺死啤酒中全部微生物
6.中藥藿香長期種植會出現(xiàn)種質(zhì)退化、易感染病蟲害等問題。為解決這些問題，研究者對組織培養(yǎng)過程中不同階段的藿香進行了輻射處理(如圖)，以期獲得性狀優(yōu)良的突變株。下列敘述錯誤的是(　　)
A.組織培養(yǎng)過程中細胞分裂旺盛，
輻射處理易發(fā)生不定向突變
B.過程①在接種前，外植體常用
無水乙醇和氯化汞溶液消毒
C.②③④過程添加的植物激素濃度和比例不相同
D.篩選出目標(biāo)突變株后可利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)藥用成分
B
解析：植物組織培養(yǎng)過程中細胞分裂旺盛，輻射處理易發(fā)生突變，且突變是不定向的，A正確；
消毒通常使用體積分數(shù)為70%的酒精，不使用無水乙醇，B錯誤；
②③④過程添加的植物激素種類相同，但濃度和比例不同，C正確；
篩選出目標(biāo)突變株后可利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進行細胞代謝產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)，生產(chǎn)藥用成分，D正確。
A.組織培養(yǎng)過程中細胞分裂旺盛，輻射處理易發(fā)生不定向突變
B.過程①在接種前，外植體常用無水乙醇和氯化汞溶液消毒
C.②③④過程添加的植物激素濃度和比例不相同
D.篩選出目標(biāo)突變株后可利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)藥用成分
7.(2024·江蘇揚州階段練習(xí))航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細胞跳動的視頻。下列相關(guān)敘述正確的是(　　)
A.培養(yǎng)心肌細胞的器具和試劑都要先進行高壓蒸汽滅菌
B.培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳
C.心肌細胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖
D.心肌細胞在無重力的作用下不能完成收縮
B
解析：培養(yǎng)心肌細胞的器具要先進行高壓蒸汽滅菌，但是試劑并不都需要滅菌，如動物血清不能進行高壓蒸汽滅菌，否則會使其中的成分失活，A錯誤；
培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣(有助于進行有氧呼吸)也需要二氧化碳(有助于維持培養(yǎng)液的pH)，B正確；
心肌細胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂增殖，但增殖一定時間后會出現(xiàn)接觸抑制，C錯誤；
心肌細胞在無重力的作用下也能完成收縮，D錯誤。
8.生物工程的操作常常涉及下面的流程，下列說法正確的是(　　)
A.若圖為核移植過程，則從卵巢中獲取的②卵母
細胞可直接作為受體細胞和①供體細胞融合
B.若圖為單克隆抗體的制備過程，需要篩選出產(chǎn)
生所需抗體的雜交瘤細胞
C.若圖為動物細胞融合過程，所獲得的動物個體不可育
D.若圖為植物體細胞雜交過程，則形成的④具有兩個親本的全部優(yōu)良性狀
B
解析：若圖為核移植過程，在體細胞核移植過程中，應(yīng)選擇成熟的卵母細胞作為受體細胞，因此需要將卵母細胞培養(yǎng)至成熟，且需要去掉卵母細胞的細胞核，不是直接作為受體，A錯誤；
若圖為單克隆抗體的制備過程，則①和②是經(jīng)過免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，形成融合細胞需要經(jīng)過篩選，篩出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞，B正確；
若圖為動物細胞融合過程，所獲得的是雜種細胞，而不能獲得動物個體，C錯誤；
若圖為植物體細胞雜交過程，則形成的④(雜交細胞)，具有兩個親本的全部遺傳物質(zhì)，D錯誤。
A.若圖為核移植過程，則從卵巢中獲取的②卵母細胞可直接作為受體細胞和①供體細胞融合
B.若圖為單克隆抗體的制備過程，需要篩選出產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞
C.若圖為動物細胞融合過程，所獲得的動物個體不可育
D.若圖為植物體細胞雜交過程，則形成的④具有兩個親本的全部優(yōu)良性狀
9.科研人員制作了某哺乳動物三個組織或細胞的基因組文庫和cDNA文庫，標(biāo)號如圖所示。下列敘述錯誤的是(　　)
A.若庫A中不含甲狀腺激素基因，則庫B中含
血紅蛋白基因
B.若庫C中含促甲狀腺激素基因，則庫D中不
含胰島素基因
C.若庫E中不含任何基因，則庫F中可能含有很少量的基因
D.庫A和庫B含有相同的基因，但這些基因的長度一般有差別
B
解析：該腺體為胰島，若庫A中不含甲狀腺激素基因，說明庫A表示cDNA文庫，則庫B為基因組文庫，則庫B中含血紅蛋白基因，A正確；
垂體可以分泌促甲狀腺激素，所以若庫C中含促甲狀腺激素基因，則庫C可能是cDNA文庫，也可能是基因組文庫，庫D中含不含胰島素基因無法確定，B錯誤；
A.若庫A中不含甲狀腺激素基因，則庫B中含血紅蛋白基因
B.若庫C中含促甲狀腺激素基因，則庫D中不含胰島素基因
C.若庫E中不含任何基因，則庫F中可能含有很少量的基因
D.庫A和庫B含有相同的基因，但這些基因的長度一般有差別
哺乳動物成熟的紅細胞沒有細胞核，由于基因組文庫的范圍一般比cDNA大，所以若庫E中不含任何基因，則庫E為cDNA文庫，庫F為基因組文庫，可能含有很少量的基因，C正確；
根據(jù)cDNA文庫的建立過程，其基因中不含有內(nèi)含子，而基因組文庫中雖然有與cDNA文庫相同的基因，但是其基因中含有內(nèi)含子，所以，這些基因的長度一般有差別，D正確。
A.若庫A中不含甲狀腺激素基因，則庫B中含血紅蛋白基因
B.若庫C中含促甲狀腺激素基因，則庫D中不含胰島素基因
C.若庫E中不含任何基因，則庫F中可能含有很少量的基因
D.庫A和庫B含有相同的基因，但這些基因的長度一般有差別
10.動物生物反應(yīng)器和研究開發(fā)重點是動物乳腺反應(yīng)器，可把人體相關(guān)基因?qū)氲讲溉閯游锏穆鸭毎校股龅霓D(zhuǎn)基因動物長大后產(chǎn)生的乳汁中含有人類所需要的不同蛋白質(zhì)。培育作為“生物反應(yīng)器”的動物涉及的現(xiàn)代生物技術(shù)有(　　)
①基因工程　②體外受精　③胚胎移植　④早期胚胎培養(yǎng)
A.①②③ B.②③④ C.①③④ D.①②③④
解析：培育作為“生物反應(yīng)器”的動物需要的技術(shù)流程為，首先將所需要的不同蛋白質(zhì)的相關(guān)基因表達載體通過基因工程技術(shù)導(dǎo)入動物的受精卵中，該受精卵可通過體外受精獲得，而后將轉(zhuǎn)基因成功的受精卵經(jīng)早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植，而后培育出能生產(chǎn)所需要的不同蛋白質(zhì)的動物，該動物稱為生物反應(yīng)器，D正確。
D
11.(2024·江蘇連云港一模)基因工程中，為方便純化蛋白質(zhì)，構(gòu)建表達載體時可將目的基因序列與標(biāo)簽基因序列連接，表達含有標(biāo)簽的融合蛋白。下圖為某質(zhì)粒編碼鏈(轉(zhuǎn)錄時的非模板鏈)的部分序列。下列相關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A.轉(zhuǎn)錄后的mRNA序列與
圖中DNA序列一致，僅T
替換為U
B.若目的蛋白中只保留
組氨酸標(biāo)簽，選擇酶切
位點時優(yōu)先考慮NdeⅠ和XhoⅠ(或AvaⅠ)
C.若目的蛋白中保留了組氨酸標(biāo)簽，翻譯時標(biāo)簽下游的基因序列不編碼氨基酸
D.以組氨酸標(biāo)簽的基因序列為模板設(shè)計下游引物，擴增導(dǎo)入成功的目的基因時，獲得的序列可能比預(yù)期的序列短
D
解析：質(zhì)粒的編碼鏈不含內(nèi)含子，與轉(zhuǎn)錄后的mRNA鏈序列一致，僅T換成U，A正確；
若目的蛋白中只保留組氨酸標(biāo)簽，選擇酶切位點時優(yōu)先考慮NdeⅠ和XhoⅠ(或AvaⅠ)，以去除T7標(biāo)簽的基因序列，同時保留NdeⅠ識別序列中對應(yīng)的起始密碼子，B正確；
標(biāo)簽下游TGA對應(yīng)的密碼子為UGA，為終止密碼子，不編碼氨基酸，C正確；
擴增導(dǎo)入成功的目的基因時，以組氨酸標(biāo)簽的基因序列為模板設(shè)計下游引物，獲得的序列為目的基因序列＋標(biāo)簽基因序列，比預(yù)期的序列長，D錯誤。
A.轉(zhuǎn)錄后的mRNA序列與圖中DNA序列一致，僅T替換為U
B.若目的蛋白中只保留組氨酸標(biāo)簽，選擇酶切位點時優(yōu)先考慮NdeⅠ和XhoⅠ(或AvaⅠ)
C.若目的蛋白中保留了組氨酸標(biāo)簽，翻譯時標(biāo)簽下游的基因序列不編碼氨基酸
D.以組氨酸標(biāo)簽的基因序列為模板設(shè)計下游引物，擴增導(dǎo)入成功的目的基因時，獲得的序列可能比預(yù)期的序列短
12.科學(xué)家利用基因工程培育出了能產(chǎn)生乙肝病毒蛋白質(zhì)的西紅柿，被稱之為“西紅柿乙肝疫苗”。具體操作是：將乙肝抗原基因M導(dǎo)入農(nóng)桿菌，然后利用農(nóng)桿菌將M導(dǎo)入西紅柿細胞。實驗顯示小白鼠連續(xù)五周吃這樣的西紅柿，體內(nèi)產(chǎn)生了抗乙肝病毒的抗體，下列敘述錯誤的是(　　)
A.實驗用PCR技術(shù)對M基因進行擴增，需要兩種引物
B.含M的重組Ti質(zhì)粒必須插入到西紅柿染色體DNA上
C.即使M在西紅柿中成功表達，也要做個體水平鑒定
D.西紅柿乙肝疫苗成本相對較低且易于儲存
B
解析：導(dǎo)入目的基因前需要對M基因擴增，PCR需要兩種引物結(jié)合M基因的兩條鏈合成相應(yīng)子鏈，A正確；
含M的T－DNA插入到西紅柿染色體DNA上，才能穩(wěn)定存在和表達，而不是整個Ti質(zhì)粒，B錯誤；
即使M在西紅柿中成功表達，也必須做個體水平鑒定，來確定實際效果，C正確；
西紅柿種植容易，成本低且易儲存，D正確。
13.凝乳酶是奶酪生產(chǎn)中的關(guān)鍵性酶。科學(xué)家采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對凝乳酶進行改造，將其第20位和第24位氨基酸改變?yōu)榘腚装彼幔呋芰μ岣吡?倍。下列敘述錯誤的是(　　)
A.該技術(shù)需要先預(yù)期蛋白質(zhì)的功能
B.該技術(shù)直接操作對象是凝乳酶基因
C.該技術(shù)可直接在體外合成凝乳酶
D.改造后的凝乳酶需進行生物功能檢測
C
解析：采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對凝乳酶進行改造之前需要先預(yù)期蛋白質(zhì)的功能，A正確；
蛋白質(zhì)工程以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，對編碼該蛋白的基因進行有目的的設(shè)計改造，以改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì)，故對凝乳酶進行改造技術(shù)中直接操作對象是凝乳酶基因，B正確；
該技術(shù)不能直接在體外合成凝乳酶，而是對凝乳酶基因進行改造，實現(xiàn)對凝乳酶的改造，C錯誤；
改造后的凝乳酶需進行生物功能檢測，以確保獲得預(yù)期的凝乳酶，D正確。
14.一對夫婦都是O 型血，通過“試管嬰兒”技術(shù)卻生下一個A型血的孩子。經(jīng)檢測，作為獨生子的丈夫被確診為“異源嵌合體”(指身體中存在來自不同受精卵的細胞群)，該孩子的血型與“異源嵌合體”有關(guān)。下列敘述正確的是(　　)
A.“試管嬰兒”的培育過程涉及細胞核移植、體外受精等技術(shù)
B.“試管嬰兒”與“克隆動物”的原理相同，不會面臨倫理問題
C.該丈夫可能是在胚胎期“吸收”了異卵雙生兄弟的早期胚胎
D.可將2個囊胚的內(nèi)細胞團與滋養(yǎng)層交換重組，構(gòu)建“異源嵌合體”
C
解析：“試管嬰兒”技術(shù)不涉及細胞核移植技術(shù)，A錯誤；
“試管嬰兒”屬于有性生殖，而“克隆動物”屬于無性生殖，兩者原理不同，且兩者均會面臨倫理問題，B錯誤；
分析題意可知，“異源嵌合體”是指身體中存在來自不同受精卵的細胞群，一對夫婦都是O 型血，卻生下一個A型血的孩子，據(jù)此推測該丈夫可能是在胚胎期“吸收”了異卵雙生兄弟的早期胚胎，被吸收的早期胚胎含有A型血相關(guān)基因，C正確；
內(nèi)細胞團將來發(fā)育為胎兒的各種組織，而滋養(yǎng)層發(fā)育為胎膜和胎盤，在現(xiàn)有技術(shù)條件下，無法將2個囊胚的內(nèi)細胞團與滋養(yǎng)層交換重組，構(gòu)建“異源嵌合體”，D錯誤。
二、多項選擇題(共4小題，每小題3分，共12分。每題有不止一個選項符合題意，每題全選對者得3分，選對但不全的得1分，錯選或不答的得0分。)
15.(2024·江蘇連云港階段練習(xí))魚茶味酸而微咸，富含多種必需氨基酸。魚茶的發(fā)酵菌群主要是乳酸菌，如圖是某同學(xué)繪制的魚茶發(fā)酵過程中各菌種數(shù)量及發(fā)酵液pH的變化曲線。下列敘述正確的是(　 　)
A.與制作傳統(tǒng)泡菜類似，魚茶發(fā)酵也無需嚴格滅菌
B.魚茶發(fā)酵初期，各菌種的種間關(guān)系主要是種間競爭
C.利用顯微鏡直接計數(shù)可快速直觀檢測微生物數(shù)量
D.醋酸菌和酵母菌消失的原因都是因為氧氣已耗盡
ABC
解析：傳統(tǒng)泡菜制作和魚茶發(fā)酵過程都是傳統(tǒng)發(fā)酵過程，一般利用的是自然條件下的微生物，不需要嚴格滅菌，A正確；
由圖可以看出，醋酸菌、酵母菌和乳酸菌的數(shù)量在發(fā)生變化，醋酸菌和酵母菌的數(shù)量呈先上升后下降趨勢，而乳酸菌的含量呈先上升后保持相對穩(wěn)定的趨勢，據(jù)此推測魚茶發(fā)酵初期各菌種的種間關(guān)系主要是種間競爭，B正確；
顯微鏡直接計數(shù)可利用血球計數(shù)板等快速觀察并統(tǒng)計微生物的數(shù)量，C正確；
酵母菌可進行無氧呼吸，消失的原因是養(yǎng)料耗盡、代謝廢物積累等，D錯誤。
A.與制作傳統(tǒng)泡菜類似，魚茶發(fā)酵也無需嚴格滅菌
B.魚茶發(fā)酵初期，各菌種的種間關(guān)系主要是種間競爭
C.利用顯微鏡直接計數(shù)可快速直觀檢測微生物數(shù)量
D.醋酸菌和酵母菌消失的原因都是因為氧氣已耗盡
16.單倍體胚胎干細胞是指只含一套染色體，但擁有類似于正常干細胞分裂分化能力的細胞群。利用小鼠建立單倍體胚胎干細胞的操作如圖所示。下列敘述錯誤的是(　 　)
A.體外受精前應(yīng)將卵母細胞培養(yǎng)至MⅠ中期
B.建立的單倍體胚胎干細胞中只含一條性染
色體X或Y
C.上述過程涉及動物細胞培養(yǎng)、體外受精等
操作
D.理論上可用物質(zhì)激活卵母細胞完成MⅡ?qū)崿F(xiàn)由①直接轉(zhuǎn)變?yōu)棰?br/>ABD
解析：體外受精前應(yīng)將卵母細胞培養(yǎng)至減數(shù)分裂Ⅱ中期，A錯誤；
精子中含有的性染色體為X染色體或Y染色體，卵細胞中含有的性染色體為X染色體，由圖可知，在建立單倍體胚胎干細胞過程中，是去除雄原核，所以獲得的單倍體干細胞中含有的性染色體是X染色體，而不含Y染色體，B錯誤；
由圖可知，在培養(yǎng)單倍體胚胎干細胞的過程中，首先發(fā)生體外受精，然后去除雄原核，再對去除雄原核的細胞進行培養(yǎng)，C正確；
激活卵母細胞完成MⅡ得到的是卵細胞和極體，二者都不具備分裂能力，所以不能得到單倍體胚胎干細胞，D錯誤。
A.體外受精前應(yīng)將卵母細胞培養(yǎng)至MⅠ中期
B.建立的單倍體胚胎干細胞中只含一條性染色體X或Y
C.上述過程涉及動物細胞培養(yǎng)、體外受精等操作
D.理論上可用物質(zhì)激活卵母細胞完成MⅡ?qū)崿F(xiàn)由①直接轉(zhuǎn)變?yōu)棰?br/>17.(2024·江蘇南通階段練習(xí))下列關(guān)于“DNA的粗提取和鑒定”“利用PCR技術(shù)擴增DNA片段并完成電泳鑒定”實驗的敘述，錯誤的是(　　)
A.將預(yù)冷乙醇加入上清液后，出現(xiàn)的白色絲狀物為粗提取的DNA
B.鑒定DNA時應(yīng)將絲狀物直接加到二苯胺試劑中進行水浴加熱
C.將擴增得到的PCR產(chǎn)物與含指示劑的電泳緩沖液混合，注入加樣孔
D.在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小、構(gòu)象等有關(guān)
BC
解析：DNA不溶于乙醇溶液，細胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于乙醇，因此將預(yù)冷乙醇加入上清液后，出現(xiàn)的白色絲狀物為粗提取的DNA，A正確；
鑒定DNA時，應(yīng)先將絲狀物溶解在2 mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺試劑并進行沸水浴，B錯誤；
瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中不含指示劑，凝膠中的DNA分子通過染色，可以在紫外燈下被檢測出來，C錯誤；
DNA分子在凝膠中的遷移速率除了與DNA分子大小、構(gòu)象等有關(guān)外，還與凝膠的濃度有關(guān)，D正確。
18.融合PCR技術(shù)采用具有互補末端的引物，形成具有重疊鏈的PCR產(chǎn)物，通過PCR產(chǎn)物重疊鏈的延伸，從而將不同來源的任意DNA片段連接起來。其原理如圖所示，據(jù)圖分析正確的是( 　　)
A.上述過程中使用的引物P2和P3的堿基
需要完全互補配對
B.設(shè)計引物的目的是為了能夠從其3′端
開始連接脫氧核苷酸
C.融合PCR的第一步兩條鏈重疊部位可
互為另一條鏈的引物
D.若融合PCR的第二步獲得128個融合基因，理論上該過程消耗了254個引物
BCD
解析：上述過程中使用的引物P2和P3的堿基不需要完全互補配對，只需要與DNA的兩條模板鏈的兩端互補配對即可，A錯誤；
引物為一段核苷酸鏈，引物與DNA模板鏈結(jié)合后，能夠從其3′端開始連接脫氧核苷酸，開始子鏈的合成，B正確；
結(jié)合圖示可知，融合PCR的第一步兩條鏈重疊部位互補配對，即可互為另一條鏈的引物，C正確；
若融合PCR的第二步獲得了128個融合基因，引物數(shù)目和新合成的子鏈數(shù)目相同，即該過程消耗了128×2－2＝254(個)引物，D正確。
A.上述過程中使用的引物P2和P3的堿基需要完全互補配對
B.設(shè)計引物的目的是為了能夠從其3′端開始連接脫氧核苷酸
C.融合PCR的第一步兩條鏈重疊部位可互為另一條鏈的引物
D.若融合PCR的第二步獲得128個融合基因，理論上該過程消耗了254個引物
三、非選擇題(共4小題，共60分。)
19.(15分)不對稱體細胞雜交是指利用射線破壞供體細胞的染色質(zhì)，與未經(jīng)射線照射的受體細胞融合，所得融合細胞含受體全部遺傳物質(zhì)及供體部分遺傳物質(zhì)。紅豆杉的次級代謝產(chǎn)物紫杉醇是一種高效抗癌藥物，但由于紅豆杉野生資源匱乏，且紅豆杉植株紫杉醇含量極低，導(dǎo)致了紫杉醇的供應(yīng)嚴重不足。因此，研究人員嘗試運用不對稱體細胞雜交將紅豆杉(2n＝24)與柴胡(2n＝12)進行了融合，培育能產(chǎn)生紫杉醇的柴胡，過程如下圖。請回答下列問題。
注：X 射線處理能隨機破壞染色體結(jié)構(gòu)，使其發(fā)生斷裂、易位、染色體消除等，使細胞不再持續(xù)分裂； 碘乙酰胺處理使細胞質(zhì)中的某些酶失活，抑制細胞分裂。
(1)過程①中需將植物組織經(jīng)________后接種于 MS 培養(yǎng)基上誘導(dǎo)________過程，產(chǎn)生愈傷組織。
(2)過程②中將愈傷組織加入________________酶液去壁，離心后棄去上清液，加入洗液多次洗滌后獲得原生質(zhì)體。多次洗滌的目的是________________________。對紅豆杉和柴胡原生質(zhì)體進行的 A、B 處理分別為________________。
消毒
脫分化
纖維素酶、果膠酶
去除原生質(zhì)體上殘留的酶液
X射線、碘乙酰胺
(3)采用二乙酸熒光素(FDA) 法可測定原生質(zhì)體活力。已知FDA本身無熒光，當(dāng)其進入細胞后可被酯酶分解為無毒、具有熒光的物質(zhì)，該熒光物質(zhì)不能透過活細胞質(zhì)膜，會留在細胞內(nèi)發(fā)出熒光。據(jù)此應(yīng)選擇________的原生質(zhì)體用于融合。
(4)過程③常用的化學(xué)試劑是____________________，經(jīng)誘導(dǎo)融合后，只有異源融合的原生質(zhì)體可持續(xù)分裂形成再生細胞團。
有熒光
聚乙二醇(PEG)
(5)科研人員對獲得的部分植株細胞進行染色體觀察、計數(shù)和DNA 分子標(biāo)記鑒定，結(jié)果如下：
后代植株類型 染色體數(shù)目、形態(tài) DNA分子標(biāo)記鑒定
甲 12，形態(tài)與柴胡染色體相似 含雙親DNA片段
乙 12，形態(tài)與柴胡染色體相似 無紅豆杉DNA片段
丙 12, 形態(tài)與柴胡染色體相似 含雙親DNA片段和新的DNA片段
由表可知，后代植株中________類型一定不是所需植株。科研人員推測雜種植株的染色體主要來源親本________的染色體，另一方親本的遺傳物質(zhì)可能不是以染色體的形式存在于雜種植株細胞中，而是以DNA片段的方式整合進柴胡的基因組，作出以上推測的依據(jù)是_________________________________________
_____________________________________________________________________。
乙
柴胡
甲、丙類型植株細胞的染色體與柴胡細胞中的染色體數(shù)目相同、形態(tài)相似，且含有雙親的 DNA 片段
解析：(1)植物組織培養(yǎng)之前需要對外植體進行消毒，之后誘導(dǎo)脫分化形成愈傷組織。
(2)原生質(zhì)體為去除了植物細胞壁后的結(jié)構(gòu)，要獲得原生質(zhì)體，需要用纖維素酶和果膠酶處理植物細胞；為了去除原生質(zhì)體上殘留的酶液需要加入洗液多次洗滌；要培育能產(chǎn)生紫杉醇的柴胡，紅豆杉是供體需要X射線照射，柴胡是受體需要碘乙酰胺處理。
(3)根據(jù)題干信息可知，熒光的強度與原生質(zhì)體的活力呈正相關(guān)，因此應(yīng)選擇有熒光的原生質(zhì)體用于融合。
(4)誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的化學(xué)方法有聚乙二醇(PEG)法；X 射線處理能隨機破壞染色體結(jié)構(gòu)，使其發(fā)生斷裂、易位、染色體消除等，使細胞不再持續(xù)分裂，碘乙酰胺處理使細胞質(zhì)中的某些酶失活，抑制細胞分裂，單獨的紅豆杉和柴胡細胞都不能分裂，雜種細胞由于融合后在細胞核和細胞質(zhì)的功能上實現(xiàn)了互補，使細胞恢復(fù)正常分裂，因此只有異源融合的原生質(zhì)體可持續(xù)分裂形成再生細胞團。
(5)根據(jù)表格信息可知，植株后代乙無紅豆杉DNA片段，說明其不是雜種植株。甲、丙類型植株與柴胡細胞中的染色體數(shù)目相同、形態(tài)相似，且含有雙親的DNA片段，說明甲、丙植株屬于雜種植株，它們的染色體主要由柴胡親本來源的染色體組成，紅豆杉親本的遺傳物質(zhì)可能不是以染色體的形式存在于雜種植株細胞中，而是以遺傳物質(zhì)重組的方式整合進柴胡的基因組。
20.(15分)EV71是引發(fā)手足口病的一種人腸道病毒。為制備抗EV71的單克隆抗體，科研人員用小鼠進行實驗。
(1)將EV71滅活病毒、EV71外殼蛋白VP1和VP2作為________分別注射到3組小鼠體內(nèi)，引發(fā)小鼠機體的________免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。
(2)多次免疫后，分別取上述3組小鼠的血清和未免疫小鼠血清，測定抗體與抗原的結(jié)合強度，結(jié)果如圖所示。EV71免疫的小鼠血清抗體________(填“是”或“不是”)單一抗體，判斷依據(jù)是______________________
________________________________。
抗原
體液
不是
EV71免疫的小鼠血清可
以結(jié)合EV71、VP1和VP2多種抗原
(3)在制備單克隆抗體過程中，需要利用的技術(shù)有動物細胞融合和____________，常用的誘導(dǎo)動物細胞融合的生物法是________________，化學(xué)試劑是________________。
動物細胞培養(yǎng)
滅活病毒誘導(dǎo)法
聚乙二醇(PEG)
(4)雙抗體夾心法是醫(yī)學(xué)上常用的定量檢測抗原的方法，具體原理如下圖：
①固相抗體和酶標(biāo)抗體均能與抗原結(jié)合，這是由于不同抗體與同一抗原表面的不同部位結(jié)合。該檢測方法中，酶標(biāo)抗體的作用是_________________________
_____________________________________________________________________。
②研究人員獲得三種抗EV71單克隆抗體，分別記為A、B、C，為檢測它們之中哪兩種適合用于雙抗體夾心法，科研人員需要進行________組實驗，檢測并比較各組實驗的產(chǎn)物量。
與待測抗原結(jié)合；酶催化檢
測底物反應(yīng)，可通過測定酶反應(yīng)產(chǎn)物量來判斷待測抗原量
6
解析：(1)EV71滅活病毒、EV71外殼蛋白VP1和VP2一般可作為抗原，能夠引發(fā)小鼠機體發(fā)生體液免疫，從而產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。
(2)分析柱形圖可知，EV71免疫的小鼠血清可以與EV71、VP1和VP2多種抗原相結(jié)合，由此說明EV71免疫的小鼠血清抗體不是單一抗體。
(3)制備單克隆抗體的過程需要利用的技術(shù)有動物細胞融合和動物細胞培養(yǎng)。常用的誘導(dǎo)動物細胞融合的生物法是滅活病毒誘導(dǎo)法，化學(xué)試劑是聚乙二醇(PEG)。
(4)①分析題干可知，雙抗體夾心法是常用的定量檢測抗原的方法，從圖中可以發(fā)現(xiàn)固相抗體和酶標(biāo)抗體均能與抗原結(jié)合，由此可見在該檢測方法中，酶標(biāo)抗體的作用是與待測抗原結(jié)合，另外通過酶催化檢測底物反應(yīng)，可通過測定酶反應(yīng)產(chǎn)物量來判斷待測抗原量。②由分析可知，雙抗體夾心法需要任意選擇兩種抗體，現(xiàn)有A、B、C三種抗體，若用“固定抗體/酶標(biāo)抗體”的方式來表示，應(yīng)有A/B、B/A、A/C、C/A、B/C、C/B這6種組合，因此科研人員需要進行6組實驗，檢測并比較各組實驗的產(chǎn)物量。
21.(15分)(2024·江蘇常州期末)下圖1是QuickChange定點突變技術(shù)及副反應(yīng)的示意圖，其中的F和R代表引物，其上含有突變的堿基序列。請回答下列問題。
(1)圖中PCR反應(yīng)體系進行時，除需要加入引物F和引物R、原始質(zhì)粒、緩沖液外，還需加入的物質(zhì)有________________。
dNTP、Taq酶
(2)已知DpnⅠ酶是一種限制酶，能特異性識別腺嘌呤甲基化的GATC序列。由圖可知，在原始質(zhì)粒上有________(填“0”“1”或“很多”)個DpnⅠ酶的切割位點。為成功獲得帶缺刻突變質(zhì)粒，應(yīng)對來自大腸桿菌的原始質(zhì)粒進行的處理是__________________________________________。
很多
使原始質(zhì)粒中的GATC序列的腺嘌呤甲
基化
(3)圖中的DH5a細胞是處于________的大腸桿菌，對帶缺刻突變質(zhì)粒進行修復(fù)時需要添加____________酶。圖中副反應(yīng)發(fā)生的原因是新鏈退火時，兩條新鏈互補配對，互為復(fù)制的____________，擴增出非目的片段。該技術(shù)除了圖示副反應(yīng)外，還存在的不足是______________________________________________。
感受態(tài)
DNA連接
模板和引物
引物F和引物R會互補配對，導(dǎo)致PCR
產(chǎn)物減少
解析：(1)圖中PCR反應(yīng)體系進行時，除需要加入引物F和引物R、原始質(zhì)粒、緩沖液外，還需加入的物質(zhì)有四種脫氧核苷三磷酸(dNTP)和熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Taq酶)。
(2)已知DpnⅠ酶是一種限制酶，能特異性識別腺嘌呤甲基化的GATC序列。由圖可知，在原始質(zhì)粒上有很多個DpnⅠ酶的切割位點。為成功獲得帶缺刻突變質(zhì)粒，應(yīng)對來自大腸桿菌的原始質(zhì)粒進行甲基化處理，即使原始質(zhì)粒中的GATC序列的腺嘌呤甲基化，這樣可以避免原始質(zhì)粒上相關(guān)基因的表達。
(3)圖中的DH5a細胞是處于感受態(tài)的大腸桿菌，對帶缺刻突變質(zhì)粒進行修復(fù)時需要添加DNA連接酶，這樣才能獲得完整的質(zhì)粒。圖中副反應(yīng)發(fā)生的原因是新鏈退火時，兩條新鏈互補配對，互為復(fù)制的模板和引物，擴增出非目的片段。該技術(shù)除了圖示副反應(yīng)外，還會因為引物F和引物R的互補配對，導(dǎo)致PCR產(chǎn)物減少。
22.(15分)黃瓜花葉病毒能感染多種植物，對煙草的危害尤其嚴重。病毒的Cu－4基因表達所形成的蛋白是子代病毒形成和釋放的關(guān)鍵蛋白。研究人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得能表達Cu－4基因反義RNA的轉(zhuǎn)基因煙草，反義RNA與Cu－4基因轉(zhuǎn)錄獲得的mRNA互補結(jié)合形成雙鏈RNA，阻止了mRNA的翻譯，從而獲得了抵抗該病毒的能力。在Cu－4基因(A鏈?zhǔn)悄０彐?一側(cè)連接了帶有細菌啟動子的四環(huán)素抗性基因(在植物細胞該基因會被完整切除)，如圖1所示。圖2是Ti質(zhì)粒相關(guān)基因圖譜。
備注：Cu－4基因長度為300 bp，tetr基因長度為500 bp。Ⅰ～Ⅵ是四種引物。
LB和RB是T－DNA的界，EcoRⅠ和XhoⅠ是兩種限制酶，切割后形成的黏性末端不互補。
P35S和TRBC是僅在植物細胞中發(fā)揮功能的啟動子和終止子。tetr和ampr分別是四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因。所用農(nóng)桿菌不具有氨芐青霉素、四環(huán)素和潮霉素抗性。
(1)人工合成如圖1所示的DNA片段后，利用引物組合________(A.引物Ⅰ和Ⅳ；B.引物Ⅱ和Ⅲ；C.引物Ⅰ和Ⅲ；D.引物Ⅱ和Ⅵ)進行PCR擴增，為使圖1所示的DNA片段能與載體正確連接，在引物的5′端分別添加________________酶的識別序列，將Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，可使用含有________的培養(yǎng)基進行篩選。
B
XhoⅠ和EcoRⅠ
四環(huán)素
(2)在將農(nóng)桿菌接種在煙草葉片前用砂紙輕微摩擦煙草葉片，目的是________________________________________。接種一段時間后，將煙草葉片酶解，獲取分散的葉肉細胞。將葉肉細胞培養(yǎng)在含有潮霉素的培養(yǎng)基中擴增培養(yǎng)，其中潮霉素的作用是____________。
增加葉片傷口數(shù)量，提高農(nóng)桿菌侵染成功率
去除農(nóng)桿菌
(3)提取葉肉細胞的總DNA，酶切后用相應(yīng)的PCR引物進行擴增，電泳后若觀察到長度為____________的片段，則說明所需的基因?qū)胫参锛毎小?br/>300 bp
(4)將具有黃瓜花葉病毒抗性的煙草進行自然種植時，需考慮轉(zhuǎn)基因作物的安全性問題。研究人員發(fā)現(xiàn)將目的基因轉(zhuǎn)移到植物細胞線粒體或葉綠體中可降低基因漂移發(fā)生的風(fēng)險，原理是_____________________________________________
_____________________________________________________________________ ___________________________________。
基因漂移常通過傳粉過程進行，而受精過程中，雄
配子只有細胞核基因傳遞給了下一代，細胞質(zhì)基因并未傳給下一代(即細胞質(zhì)基
因不能通過花粉或精子傳遞給下一代)
解析：(1)人工合成如圖1所示的DNA片段，該片段中含帶有細菌啟動子的四環(huán)素抗性基因，為了擴增圖示的片段，又因為子鏈的延伸發(fā)生在引物的3′端，且引物與模板鏈進行反向連接，因此該過程中利用的引物組合為引物Ⅱ和Ⅲ進行PCR擴增，B正確；為使圖1所示的DNA片段能與載體正確連接，且能起到促進B鏈轉(zhuǎn)錄的作用，因而需在引物的5′端分別添加XhoⅠ和EcoRⅠ酶的識別序列，將Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌后，可使用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基進行篩選，因為重組質(zhì)粒中含有四環(huán)素抗性基因。
(2)在將農(nóng)桿菌接種在煙草葉片前用砂紙輕微摩擦煙草葉片，目的是增加葉片傷口數(shù)量，增加植物產(chǎn)生的酚類化合物，進而提高農(nóng)桿菌侵染的成功率。接種一段時間后，將煙草葉片酶解，獲取分散的葉肉細胞。將葉肉細胞培養(yǎng)在含有潮霉素的培養(yǎng)基中擴增培養(yǎng)，由于農(nóng)桿菌對潮霉素沒有抗性，因而其中潮霉素起到了去除農(nóng)桿菌的作用。
(3)提取葉肉細胞的總DNA，酶切后用相應(yīng)的PCR引物進行擴增，電泳后若觀察到長度為300 bp的片段，則說明所需的基因?qū)胫参锛毎校驗轭}中顯示Cu－4基因的長度為300 bp。
(4)將具有黃瓜花葉病毒抗性的煙草進行自然種植時，需考慮轉(zhuǎn)基因作物的安全性問題。轉(zhuǎn)基因作物的安全性問題主要表現(xiàn)在通過傳粉過程將目的基因轉(zhuǎn)移到近緣物種，進而表現(xiàn)基因污染，而研究人員將目的基因轉(zhuǎn)移到植物細胞線粒體或葉綠體中之后，會使得轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)生的精子或花粉中不含有目的基因，因為精子中幾乎不含有細胞質(zhì)基因，因而可降低基因漂移發(fā)生的風(fēng)險，即細胞質(zhì)基因不能通過花粉或精子傳遞給下一代。

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