資源簡(jiǎn)介 單元檢測(cè)卷(三)(時(shí)間:75分鐘 滿分:100分) 一、單項(xiàng)選擇題(共14小題,每小題2分,共28分,每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求。)1.基因工程操作離不開(kāi)三種工具,下列有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是( )用相同的限制性內(nèi)切核酸酶處理目的基因和質(zhì)粒,可獲得相同的黏性末端常用載體質(zhì)粒的基本單位是脫氧核糖核苷酸,另外兩種工具的基本單位是氨基酸DNA聚合酶能夠催化形成磷酸二酯鍵,是基因工程中的“分子黏合劑”限制性內(nèi)切核酸酶主要從原核生物中分離獲得,具有識(shí)別特定核苷酸序列的能力2.圖1表示DNA的平面結(jié)構(gòu)示意圖,圖2表示某種限制酶的識(shí)別序列和作用位點(diǎn),下列相關(guān)說(shuō)法正確的是( )圖1中a所示部位即圖2中箭頭所示部位圖2所示的DNA片段被限制酶切割后獲得的末端形式與圖1末端相同T4 DNA連接酶可以將兩個(gè)圖1所示結(jié)構(gòu)連接成為一個(gè)DNA片段基因工程的載體必須具有圖2所示的堿基序列3.(2024·江蘇揚(yáng)州階段練習(xí))用XhoⅠ和SalⅠ兩種限制性內(nèi)切核酸酶分別處理同一DNA片段(限制酶在對(duì)應(yīng)切點(diǎn)一定能切開(kāi)),酶切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。下列敘述錯(cuò)誤的是( )圖1中兩種酶識(shí)別的核苷酸序列不同圖1中酶催化反應(yīng)的化學(xué)鍵是氫鍵圖2中②可能是用XhoⅠ處理得到的酶切產(chǎn)物用XhoⅠ和SalⅠ同時(shí)處理該DNA,電泳后得到6種產(chǎn)物4.(2023·連云港高二期中)某線性DNA分子含有3 000個(gè)堿基對(duì)(bp),先用限制酶a切割,再把得到的產(chǎn)物用限制酶b切割,得到的DNA片段大小如下表所示。限制酶a和b的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列說(shuō)法正確的是( )酶a切割產(chǎn)物(bp) 酶b再次切割產(chǎn)物(bp)1 600;1 100;300 800;300酶a 酶b5′-A↓GATC T-3′ 5′-G↓GATC C-3′3′-T CTAG↑A-5′ 3′-C CTAG↑G-5′在該DNA分子中,酶a與酶b的識(shí)別序列分別有3個(gè)和2個(gè)這兩種酶切出的黏性末端不能相互連接這兩種酶切斷的化學(xué)鍵分別為磷酸二酯鍵和氫鍵用這兩種酶和DNA連接酶對(duì)該DNA分子進(jìn)行反復(fù)切割、連接操作,若干循環(huán)后,所得DNA分子中序列會(huì)明顯增多5.PCR是體外快速大量擴(kuò)增DNA的一種技術(shù),下列關(guān)于PCR技術(shù)敘述錯(cuò)誤的是( )增加模板DNA的量可以提高反應(yīng)速度退火溫度過(guò)低會(huì)造成引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)增加延伸時(shí),DNA聚合酶從引物的5′端連接脫氧核苷酸PCR反應(yīng)體系中一般需加Mg2+以激活DNA聚合酶6.蜘蛛絲(蛛絲蛋白)被稱為“生物鋼”,有著超強(qiáng)的抗張強(qiáng)度,下圖為蛛絲蛋白基因?qū)?yīng)的DNA片段結(jié)構(gòu)示意圖,其中1~4表示DNA上引物可能結(jié)合的位置,目前利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)蜘蛛絲已取得成功。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( )若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因,會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵若用PCR技術(shù)獲取目的基因,則圖中的1、4分別是2種引物結(jié)合的位置若受體細(xì)胞為大腸桿菌,則需先用Ca2+處理,更利于實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化在PCR儀中根據(jù)選定的引物至少需經(jīng)過(guò)6次循環(huán)才可獲得32個(gè)符合要求的目的基因7.(2024·江蘇南京開(kāi)學(xué)考試)下列關(guān)于DNA粗提取和鑒定的敘述,正確的是( )新鮮洋蔥、菠菜、豬肝、豬血等都是DNA粗提取的理想實(shí)驗(yàn)材料將過(guò)濾液放入4 ℃冰箱或加入預(yù)冷的乙醇都可抑制DNA酶的活性鑒定DNA時(shí),應(yīng)將絲狀物直接加入到二苯胺試劑中并進(jìn)行沸水浴利用電泳鑒定DNA時(shí),應(yīng)在瓊脂糖凝膠緩沖液中加入二苯胺試劑作為染料8.(2023·湖北卷,4)用氨芐青霉素抗性基因(AmpR)、四環(huán)素抗性基因(TetR)作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒,構(gòu)建基因表達(dá)載體(重組質(zhì)粒),并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯(cuò)誤的是( )若用HindⅢ酶切,目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同若用PvuⅠ酶切,在含Tet(四環(huán)素)培養(yǎng)基中的菌落,不一定含有目的基因若用SphⅠ酶切,可通過(guò)DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否若用SphⅠ酶切,攜帶目的基因的受體菌在含Amp(氨芐青霉素)和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落9.基因工程為花卉育種提供了新的技術(shù)保障。如圖為花卉育種的過(guò)程(字母代表相應(yīng)的物質(zhì)或結(jié)構(gòu),序號(hào)代表過(guò)程或方法)。下列說(shuō)法正確的是( )①過(guò)程需要的酶有限制酶和DNA聚合酶②過(guò)程常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法③、④過(guò)程為分化和再分化,該過(guò)程體現(xiàn)了植物細(xì)胞具有全能性轉(zhuǎn)基因生物DNA上是否插入目的基因,可用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)10.為了增加菊花花色類(lèi)型,研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1),擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組,再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟环氖? )用限制性內(nèi)切核酸酶EcoRⅠ和DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰?xì)胞在培養(yǎng)基中添加卡那霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞用PCR技術(shù)檢測(cè)C基因是否整合到菊花染色體上11.為使玉米獲得抗除草劑性狀,科研人員進(jìn)行了相關(guān)操作(如圖所示)。含有內(nèi)含子的報(bào)告基因不能在原核生物中正確表達(dá),但能在真核生物中正確表達(dá),其正確表達(dá)產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì) K 變?yōu)樗{(lán)色物質(zhì)。轉(zhuǎn)化過(guò)程中愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌,殘留的農(nóng)桿菌會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織也可在含除草劑的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。下列敘述錯(cuò)誤的是( )T-DNA可將基因G轉(zhuǎn)移并整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA 上利用物質(zhì)K和抗生素進(jìn)行篩選1,可獲得藍(lán)色的農(nóng)桿菌菌落利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選 2,易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株題中愈傷組織重新分化為芽、根等器官的過(guò)程中,需要添加植物激素12.(2023·宿遷高二質(zhì)檢)近年來(lái),基因工程的發(fā)展非常迅速,科學(xué)家可以用DNA探針和外源基因?qū)氲姆椒ㄟM(jìn)行遺傳病的診斷和治療。下列做法錯(cuò)誤的是( )用DNA探針檢測(cè)鐮狀細(xì)胞貧血用DNA探針檢測(cè)病毒性肝炎用導(dǎo)入外源基因的方法治療鐮狀細(xì)胞貧血用基因替換的方法治療21三體綜合征13.下列有關(guān)基因工程的成果及應(yīng)用的說(shuō)法,錯(cuò)誤的是( )基因工程中抗蟲(chóng)、抗病轉(zhuǎn)基因植物的種植減少了農(nóng)藥的使用基因工程在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用主要是培育高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗逆性的農(nóng)作物基因治療是把正常基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,以達(dá)到治療的目的利用基因工程技術(shù),將人產(chǎn)生胰島素的基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌后,大腸桿菌內(nèi)表達(dá)出的胰島素與人的胰島素結(jié)構(gòu)相同14.科學(xué)家運(yùn)用蛋白質(zhì)工程對(duì)綠色熒光蛋白進(jìn)行改造獲得黃色熒光蛋白,熒光蛋白在細(xì)胞內(nèi)生命活動(dòng)的檢測(cè)、腫瘤的示蹤研究領(lǐng)域有著重要的作用。下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的敘述,錯(cuò)誤的是( )蛋白質(zhì)工程能夠生產(chǎn)自然界中不存在的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程遵循的原理包括中心法則蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)的基本思路是從基因開(kāi)始基因定點(diǎn)突變技術(shù)可幫助改造生產(chǎn)新的蛋白質(zhì)二、多項(xiàng)選擇題(共4小題,每小題3分,共12分。每題有不止一個(gè)選項(xiàng)符合題意,每題全選對(duì)者得3分,選對(duì)但不全的得1分,錯(cuò)選或不答的得0分。)15.科研人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗病毒蛋白基因C導(dǎo)入番木瓜,培育出轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜,Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)模式圖如圖所示。下列敘述正確的是( )農(nóng)桿菌的T-DNA與番木瓜基因發(fā)生重組構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶和DNA聚合酶含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌具有四環(huán)素抗性轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜具有卡那霉素抗性16.(2023·江蘇南通期末)多重PCR是指在反應(yīng)體系中加入多種引物,最終擴(kuò)增出多種目的DNA片段的技術(shù),如下圖。下列相關(guān)敘述正確的是( )多重PCR加入的引物之間不能互補(bǔ)配對(duì)形成局部雙鏈不同對(duì)引物的退火溫度差異越大,擴(kuò)增的特異性越強(qiáng)多重PCR擴(kuò)增出的大小不一的DNA片段可用電泳檢測(cè)多重PCR可用于多種病原體感染的檢測(cè)17.(2023·江蘇徐州階段練習(xí))如圖為某科研人員利用DNA分子探針鑒定50 mL菌液樣品中是否含有某特定DNA的細(xì)菌的示意圖。下列敘述錯(cuò)誤的是( )培養(yǎng)皿中菌落數(shù)就是樣品中含有的實(shí)際活菌數(shù)目重組質(zhì)粒與探針進(jìn)行分子雜交的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)原則外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間才能進(jìn)行復(fù)制放射自顯影結(jié)果可以顯示原培養(yǎng)皿中含有特定DNA的細(xì)菌菌落位置18.研究人員將一種海魚(yú)抗凍蛋白基因afp整合到土壤農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上,利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得抗凍番茄。afp基因可插入宿主染色體的單一位點(diǎn)或同時(shí)插入多個(gè)位點(diǎn),經(jīng)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化后的番茄作為親本自交得F1。正常情況下,下列敘述正確的是( )轉(zhuǎn)化是指afp基因進(jìn)入番茄細(xì)胞內(nèi),并在番茄細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定并表達(dá)出抗凍蛋白的過(guò)程可使用番茄新鮮葉片或花序與農(nóng)桿菌進(jìn)行共培養(yǎng),篩選出轉(zhuǎn)化細(xì)胞并組織培養(yǎng)再生植株F1植株自交,F(xiàn)2種子單株收種并播種,其中3/4的番茄具有抗凍性狀時(shí),親本為單一位點(diǎn)插入的植株F1植株自交,F(xiàn)2種子單株收種并播種,子代若全為抗凍番茄,則親本至少一對(duì)染色體上均有afp基因插入三、非選擇題(共4小題,共60分。)19.(15分)(2024·九省聯(lián)考)植物在高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,SOS3和SOS2激活位于質(zhì)膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SOS1,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路與胞質(zhì)內(nèi)Na+結(jié)合并將其排出細(xì)胞外,維持其正常生命活動(dòng)。回答下列問(wèn)題:(1)(2分)植物利用SOS信號(hào)通路將Na+排出細(xì)胞外,這種運(yùn)輸方式的特點(diǎn)是____________________________。(2)(5分)通過(guò)基因工程在水稻中過(guò)量表達(dá)SOS1蛋白,以期增強(qiáng)水稻抗鹽能力。①為獲得編碼SOS1蛋白的基因,可提取野生型水稻總RNA,通過(guò)________獲得模板DNA,再經(jīng)PCR獲得SOS1基因片段。②測(cè)序表明,SOS1基因編碼序列含有3 444個(gè)核苷酸,其中A+T含量占53%,模板鏈中C含量為26%,那么SOS1基因雙鏈序列中G+C的含量為_(kāi)_______%。③構(gòu)建表達(dá)載體時(shí),在下圖所示載體含有的限制酶識(shí)別位點(diǎn)插入SOS1基因。序列分析發(fā)現(xiàn)SOS1基因內(nèi)部有XbaⅠ的識(shí)別序列,為使載體中SOS1基因和綠色熒光蛋白基因正確表達(dá),應(yīng)在SOS1基因兩端分別添加________兩種限制酶的識(shí)別序列,將SOS1基因插入載體前,應(yīng)選用________兩種限制酶對(duì)載體酶切。(3)(4分)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化水稻后,選取可發(fā)綠色熒光的植株,鑒定其抗鹽能力是否增強(qiáng),采取的操作是_________________________________________________________________________________________________________________________。(4)(4分)若發(fā)現(xiàn)水稻中過(guò)量表達(dá)SOS1基因并不能明顯提高其抗鹽能力,從信號(hào)通路角度分析,可能的原因是____________________________________________________________________________________________________________________。20.(14分)(2024·江蘇揚(yáng)州模擬)水稻胚乳可作為生物反應(yīng)器用于開(kāi)發(fā)功能性產(chǎn)品。從豬瘟病毒抗原蛋白的預(yù)期功能出發(fā),研究小組設(shè)計(jì)其預(yù)期的結(jié)構(gòu),推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列,合成新的基因X。利用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增并連接啟動(dòng)子1,形成Z片段。把Z片段插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中,將構(gòu)建好的基因表達(dá)載體導(dǎo)入水稻細(xì)胞完成轉(zhuǎn)化,在胚乳中獲得相應(yīng)蛋白,最終將蛋白進(jìn)一步加工為植物源豬瘟疫苗。相關(guān)信息如圖所示。回答下列問(wèn)題。(1)(5分)研究小組通過(guò)PCR擴(kuò)增Z片段,延伸過(guò)程中,4種脫氧核苷三磷酸在________________催化作用下合成新的DNA鏈。酶切時(shí),限制酶識(shí)別序列的重疊會(huì)降低切割效率。為構(gòu)建基因表達(dá)載體,選擇限制酶HindⅢ和________進(jìn)行切割,可使Z片段插入T-DNA的效率最高。為使基因能夠正常表達(dá),質(zhì)粒上的N和J應(yīng)都為_(kāi)_______。(2)(3分)為獲得含蛋白X的水稻材料,首先誘導(dǎo)水稻種子脫分化形成________,然后通過(guò)________的侵染,使目的基因進(jìn)入水稻細(xì)胞并完成轉(zhuǎn)化,再將其轉(zhuǎn)接到含特定激素的培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)其________形成具有根、莖、葉的完整植株。(3)(6分)為驗(yàn)證水稻中目的基因X是否表達(dá)(轉(zhuǎn)錄和翻譯),分子水平上的檢測(cè)方法有_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________(答出2點(diǎn)即可)。21.(15分)人胰島素由A鏈和B鏈構(gòu)成,其中B鏈的第20~29位氨基酸是胰島素分子間相互作用形成多聚體的關(guān)鍵區(qū)域。丹麥科學(xué)家將B28位脯氨酸替換為天冬氨酸,從而有效抑制了胰島素分子間的聚合,由此研發(fā)出速效胰島素類(lèi)似物,并已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用。回答下列相關(guān)問(wèn)題:(1)(8分)在對(duì)胰島素基因進(jìn)行改造時(shí),常采用重疊延伸PCR技術(shù)引入特定位點(diǎn)突變,過(guò)程如圖所示:除模板DNA、引物外,PCR反應(yīng)還需要________________________等物質(zhì)條件才能順利進(jìn)行。PCR②③過(guò)程分別至少需要經(jīng)過(guò)________輪反應(yīng)可得到等長(zhǎng)的DNA片段。PCR②③過(guò)程不能在同一反應(yīng)容器內(nèi)同時(shí)進(jìn)行,原因是________________________________________。經(jīng)⑤過(guò)程形成的改造后的胰島素基因在PCR擴(kuò)增時(shí),需要添加的引物是________________。(2)(7分)若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的速效胰島素和天然胰島素的降血糖能力的差異,簡(jiǎn)要寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路:____________________________________________________________________________________________________________________________________________。22.(16分)(2023·江蘇卷,22)為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融合表達(dá),運(yùn)用重組酶技術(shù)構(gòu)建質(zhì)粒,如圖1所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)(2分)分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段F1與片段F2時(shí),配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有________,擴(kuò)增程序中最主要的不同是________。(2)(1分)有關(guān)基因序列如圖2。引物F2-F、F1-R應(yīng)在下列選項(xiàng)中選用________。EGFP基因序列:5′ATGGTGAGCAAGGGC—GACGAGCTGTACAAG3′AnB1基因序列:5′CATGTCCAGCTGCAG—CCAAAACCACAACCA3′圖2A.ATGGTG——CAACCAB.TGGTTG——CACCATC.GACGAG——CTGCAGD.CTGCAG——CTCGTC(3)(3分)將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后,在重組酶作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒,直接用于轉(zhuǎn)化細(xì)菌。這一過(guò)程與傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程相比,無(wú)需使用的酶主要有________________。(4)(1分)轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選,下列敘述錯(cuò)誤的有________。A.稀釋涂布平板需控制每個(gè)平板30~300個(gè)菌落B.抗性平板上未長(zhǎng)出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高C.抗性平板上常常會(huì)出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落D.抗性平板上長(zhǎng)出的單菌落無(wú)需進(jìn)一步劃線純化(5)(2分)為了驗(yàn)證平板上菌落中的質(zhì)粒是否符合設(shè)計(jì),用不同菌落的質(zhì)粒為模板,用引物F1-F和F2-R進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,質(zhì)粒P1~P4的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖3。根據(jù)圖中結(jié)果判斷,可以舍棄的質(zhì)粒有________。(6)(7分)對(duì)于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒,通常需進(jìn)一步通過(guò)基因測(cè)序確認(rèn),原因是____________________________________________________________。單元檢測(cè)卷(三)1.C [構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),常用相同的限制性內(nèi)切核酸酶處理目的基因和質(zhì)粒,以產(chǎn)生相同的黏性末端,以便于二者連接,A正確;質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是DNA,其基本單位是脫氧核糖核苷酸;限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì),其基本單位是氨基酸,B正確;DNA連接酶能夠催化形成磷酸二酯鍵,是基因工程中的“分子黏合劑”,C錯(cuò)誤;限制性內(nèi)切核酸酶主要從原核生物中分離獲得,具有識(shí)別特定核苷酸序列的能力,即具有特異性(專一性),D正確。]2.C [圖1中a所示部位為一個(gè)脫氧核苷酸內(nèi)部磷酸和脫氧核糖連接的化學(xué)鍵,圖2中箭頭所示部位為相鄰的兩個(gè)脫氧核苷酸之間連接的磷酸二酯鍵,二者不同,A錯(cuò)誤;圖2所示的DNA片段被限制酶切割后獲得的末端為黏性末端,圖1為平末端,故圖2所示的DNA片段被限制酶切割后獲得的末端形式與圖1末端不同,B錯(cuò)誤;T4 DNA連接酶可以連接平末端和黏性末端,因此T4 DNA連接酶可以將兩個(gè)圖1所示結(jié)構(gòu)連接成為一個(gè)DNA片段,C正確;基因工程的載體一般具有多個(gè)限制酶識(shí)別序列,即不一定具有圖2所示的堿基序列,D錯(cuò)誤。]3.B [酶具有專一性,不同的限制酶識(shí)別并切割不同的核苷酸序列,A正確;圖1中酶用來(lái)切割DNA,DNA單鏈中的脫氧核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵相連,因此酶催化反應(yīng)的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵, B錯(cuò)誤;分析圖1,限制酶XhoⅠ有2處切割位點(diǎn),切割后產(chǎn)生3個(gè)DNA片段,圖2中②是用XhoⅠ處理得到的酶切產(chǎn)物,C正確;分析圖1,限制酶XhoⅠ和SalⅠ有5處切割位點(diǎn),切割后產(chǎn)生6個(gè)DNA片段,即用XhoⅠ和SalⅠ同時(shí)處理該DNA,電泳后得到6種產(chǎn)物,D正確。]4.D [由表格可知,該線性DNA經(jīng)酶a切割后得到了3個(gè)DNA片段,故在該DNA分子中,酶a的識(shí)別序列有2個(gè),經(jīng)酶b再次切割后得到3個(gè)800 bp和2個(gè)300 bp的DNA片段,則酶b的識(shí)別序列也有2個(gè),且酶a和酶b的識(shí)別位點(diǎn)不同,A錯(cuò)誤;圖中顯示雖然這兩種酶的識(shí)別序列不同,但是切割后的黏性末端可以相互連接,B錯(cuò)誤;這兩種酶切斷的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵,C錯(cuò)誤;這兩種酶切割后的黏性末端在DNA連接酶的作用下可以相互連接,所以用這兩種酶和DNA連接酶對(duì)該DNA分子進(jìn)行反復(fù)切割、連接操作,若干循環(huán)后,所得DNA分子中序列會(huì)明顯增多,D正確。]5.C [PCR過(guò)程中,以DNA分子為模板合成子代DNA分子,因此增加模板DNA的量可以提高反應(yīng)速度,A正確;PCR技術(shù)中,退火是指引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上,退火溫度過(guò)低會(huì)造成引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)增加,B正確;DNA的復(fù)制需要引物的主要原因是DNA聚合酶只能從引物的3′端連接脫氧核苷酸,C錯(cuò)誤。]6.B [若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因,DNA每條鏈上會(huì)破壞2個(gè)磷酸二酯鍵,共會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵,A正確;由于DNA聚合酶只能從5′→3′延伸子鏈,圖中的磷酸基團(tuán)為5′端,羥基為3′端,由引物3′端延伸子鏈,子鏈和模板鏈反向平行,因此根據(jù)引物的延伸方向可知圖中與引物結(jié)合的位置是2、3,B錯(cuò)誤。]7.B [哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞核和細(xì)胞器,因此新鮮豬血不能作為提取DNA的材料,而新鮮洋蔥、菠菜、豬肝等都是DNA粗提取的理想實(shí)驗(yàn)材料,A錯(cuò)誤;將過(guò)濾液放入4 ℃冰箱或加入預(yù)冷的乙醇都可抑制DNA酶的活性,避免DNA被水解,另一方面加入預(yù)冷的乙醇溶液可以析出DNA,B正確;鑒定DNA時(shí),應(yīng)將絲狀物溶解在2(mol·L-1)的NaCl溶液中,再加入二苯胺試劑并進(jìn)行沸水浴,C錯(cuò)誤;二苯胺試劑使用時(shí)需要加熱,不能作為電泳鑒定DNA的染料,D錯(cuò)誤。]8.D [若用HindⅢ酶切,目的基因可能正向插入,也可能反向插入,轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同,A正確;若用PvuⅠ酶切,重組質(zhì)粒和質(zhì)粒中都有四環(huán)素抗性基因(TetR),因此在含Tet(四環(huán)素)培養(yǎng)基中的菌落,不一定含有目的基因,B正確;DNA凝膠電泳技術(shù)可以分離不同大小的DNA片段,重組質(zhì)粒的大小與質(zhì)粒不同,能夠鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否,C正確;SphⅠ的酶切位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因中,若用SphⅠ酶切,會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因,重組質(zhì)粒中含氨芐青霉素抗性基因(AmpR),因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp(氨芐青霉素)的培養(yǎng)基中能形成菌落,在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落,D錯(cuò)誤。]9.B [①過(guò)程是基因表達(dá)載體的構(gòu)建,需要的酶有限制酶和DNA連接酶,A錯(cuò)誤;由于受體細(xì)胞為植物細(xì)胞,所以②過(guò)程常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,B正確;由植物細(xì)胞培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因植株的③、④過(guò)程分別為脫分化和再分化,該過(guò)程體現(xiàn)了植物細(xì)胞具有全能性,C錯(cuò)誤;檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因,應(yīng)采用DNA分子雜交法,不能采用抗原—抗體雜交技術(shù),D錯(cuò)誤。]10.C [根據(jù)目的基因兩側(cè)的限制酶切割位點(diǎn)可知,用限制性內(nèi)切核酸酶EcoRⅠ和DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒,A正確;將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,即用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰?xì)胞,B正確;圖2中顯示標(biāo)記基因是潮霉素抗性基因,因此可在培養(yǎng)基中添加潮霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞,C錯(cuò)誤。]11.B [農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上,根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn),將目的基因(基因G)插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上,通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用,就可以把目的基因(基因G)整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA上,A正確;農(nóng)桿菌屬于原核生物,含有內(nèi)含子的報(bào)告基因不能在原核生物中正確表達(dá),故不會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色的農(nóng)桿菌菌落,B錯(cuò)誤;根據(jù)題意可知,報(bào)告基因的正確表達(dá)產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色,而愈傷組織表面殘留的農(nóng)桿菌會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),因此利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選2,更易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株,C正確;愈傷組織重新分化為芽、根等器官的過(guò)程中,需要添加植物激素,如生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素,D正確。]12.D [21三體綜合征屬于染色體遺傳病,患者的21號(hào)染色體比正常人多一條,無(wú)法從基因水平上對(duì)其進(jìn)行治療,D錯(cuò)誤。]13.D [基因工程中抗蟲(chóng)、抗病轉(zhuǎn)基因植物的種植減少了農(nóng)藥的使用,有利于降低生產(chǎn)成本,減少農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的污染,A正確;基因工程的應(yīng)用很廣泛,基因工程在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用主要是培育高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗逆性的農(nóng)作物,B正確;基因治療是把正常基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療疾病的目的,基因治療的原理是基因重組,這是治療遺傳病的最有效手段,C正確;利用基因工程技術(shù),將人產(chǎn)生胰島素的基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌后,大腸桿菌內(nèi)表達(dá)出的胰島素與人的胰島素結(jié)構(gòu)不相同,因?yàn)榇竽c桿菌沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器,不能對(duì)胰島素進(jìn)行加工,D錯(cuò)誤。]14.C [蛋白質(zhì)工程能對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行基因改造,或制造新的、生產(chǎn)自然界中不存在的蛋白質(zhì),以滿足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需要,A正確;蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),對(duì)編碼該蛋白的基因進(jìn)行有目的的設(shè)計(jì)改造,以改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì),最后合成所需的蛋白質(zhì),基因控制蛋白質(zhì)合成的過(guò)程中包括中心法則,B正確;蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)的基本思路是從蛋白質(zhì)的預(yù)期功能開(kāi)始,C錯(cuò)誤;基因定點(diǎn)突變技術(shù)可改變基因的結(jié)構(gòu),可幫助改造生產(chǎn)新的蛋白質(zhì),D正確。]15.AD [構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶和DNA連接酶,B錯(cuò)誤;抗病毒蛋白基因C的插入位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因內(nèi)部,插入抗病毒蛋白基因C后,重組Ti質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因被破壞,含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌不具有四環(huán)素抗性,C錯(cuò)誤;轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜含有卡那霉素抗性基因,故轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜具有卡那霉素抗性,D正確。]16.ACD [多重PCR加入的不同引物的堿基排列順序不能互補(bǔ),如果互補(bǔ),就會(huì)使引物之間形成雙鏈,不能與模板鏈結(jié)合,降低擴(kuò)增的效率,A正確;一般而言,引物的GC含量越高,結(jié)合特異性越強(qiáng),擴(kuò)增的特異性越強(qiáng),與退火溫度關(guān)系不大,B錯(cuò)誤;電泳技術(shù)可分離不同大小的DNA分子,故多重PCR擴(kuò)增出的大小不一的DNA片段可用電泳檢測(cè),C正確;PCR鑒定病原體的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì),該體系中加入多種引物,最終擴(kuò)增出多種目的DNA片段,故多重PCR可用于多種病原體感染的檢測(cè),D正確。]17.AC [根據(jù)培養(yǎng)皿中菌落數(shù)只能估算樣品中含有的活菌數(shù)目,A錯(cuò)誤;重組質(zhì)粒與探針能進(jìn)行分子雜交是因?yàn)镈NA分子的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,B正確;外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間才能表達(dá),而復(fù)制需要有復(fù)制原點(diǎn),C錯(cuò)誤;放射自顯影結(jié)果可以顯示原培養(yǎng)皿中含有特定DNA的細(xì)菌菌落位置,因?yàn)榫涓街谀ど系奈恢檬枪潭ǖ模鶕?jù)放射自顯影結(jié)果可以一一對(duì)應(yīng)起來(lái),D正確。]18.ACD [轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程,A正確;可以使用番茄新鮮葉片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng),篩選出轉(zhuǎn)化細(xì)胞并組織培養(yǎng)再生植株,或?qū)⒒ㄐ蛑苯咏](méi)在含有農(nóng)桿菌的溶液中一段時(shí)間,然后培養(yǎng)植株并獲得種子,再進(jìn)行篩選鑒定,B錯(cuò)誤;F2種子單株收種并播種,其中3/4的番茄具有抗凍性狀,則F1是一對(duì)等位基因的雜合子,即親本為單一位點(diǎn)插入的植株,C正確;F2種子單株收種并播種,子代若全為抗凍番茄,則親本為純合子,親本至少一對(duì)染色體上均有afp基因插入,D正確。]19.(1)需要能量、需要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 (2)①逆轉(zhuǎn)錄 ②47 ③SpeⅠ、EcoRⅠ XbaⅠ、EcoRⅠ (3)將轉(zhuǎn)基因水稻和普通水稻種植于高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,觀察兩種水稻的生長(zhǎng)狀況 (4)過(guò)量表達(dá)SOS1基因使轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SOS1含量增多,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路將胞質(zhì)內(nèi)的Na+過(guò)多地排出細(xì)胞外,影響細(xì)胞本身對(duì)Na+的利用20.(1)熱穩(wěn)定的DNA聚合酶 EcoRⅠ 終止子 (2)愈傷組織 農(nóng)桿菌 再分化 (3)通過(guò)分子雜交技術(shù)檢測(cè)水稻細(xì)胞中目的基因X是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA;從轉(zhuǎn)基因水稻中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測(cè)是否翻譯出了蛋白質(zhì)21.(1)熱穩(wěn)定的DNA聚合酶、四種脫氧核苷三磷酸 2 引物2和3中存在互補(bǔ)配對(duì)片段,置于同一反應(yīng)系統(tǒng)時(shí)它們會(huì)發(fā)生結(jié)合而失去作用 引物4和引物1(2)將生理狀況相同的糖尿病小鼠均分為三組,編號(hào)為A、B、C,分別注射等量的蛋白質(zhì)工程改造后的速效胰島素、天然胰島素和生理鹽水,一段時(shí)間后檢測(cè)三組小鼠的血糖情況22.(1)模板、引物 退火溫度 (2)CD(3)限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)和DNA連接酶 (4)ABC (5)P3、P4 (6)電泳只能顯示擴(kuò)增片段的大致長(zhǎng)度,不能顯示精準(zhǔn)的DNA堿基數(shù)量,也不能呈現(xiàn)DNA堿基序列解析 (1)PCR反應(yīng)進(jìn)行的條件:引物、酶、4種脫氧核苷三磷酸、模板和緩沖液(其中需要Mg2+)等。分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段F1與片段F2時(shí),配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有模板(片段F1、片段F2)、引物。擴(kuò)增程序中最主要的不同是退火溫度不同。(2)由圖1可知,F(xiàn)2-F與F1-R互補(bǔ),因此選項(xiàng)中A、B一組,C、D一組,再由圖1可知,F(xiàn)2-F與F1片段(EGFP基因序列3′端)部分相同,與F2片段(AnB1基因序列5′端)部分互補(bǔ),即C項(xiàng)“GACGAG”與EGFP基因的“5′GACGAG3′”相同,“5′CTGCAG3′”與AnB1基因序列的“5′CTGCAG3′”互補(bǔ),即C項(xiàng)符合要求;F1-R與F2片段(AnB1基因序列5′端)部分相同,與F1片段(EGFP基因序列3′端)部分互補(bǔ),即D項(xiàng)符合要求,故選C、D。(3)傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建需要使用限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)切割質(zhì)粒使其具有與目的基因相同的黏性末端,之后再用DNA連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒。題干將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后,在重組酶的作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒,不需要使用限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)和DNA連接酶。(4)用稀釋涂布平板法培養(yǎng)計(jì)數(shù)時(shí),為了使結(jié)果更準(zhǔn)確,應(yīng)選擇有30~300個(gè)菌落數(shù)的平板,但篩選時(shí)不需控制數(shù)目,A錯(cuò)誤;培養(yǎng)基溫度太高可將接種的菌落殺死,會(huì)導(dǎo)致抗性平板上未長(zhǎng)出菌落,屬于操作失誤,不是一般原因,B錯(cuò)誤;轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選,一般含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌才能發(fā)展為菌落,故不會(huì)出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落,C錯(cuò)誤;稀釋涂布平板法和平板劃線法均為分離純化細(xì)菌的方法,用稀釋涂布平板法在抗性平板上長(zhǎng)出的單菌落無(wú)需進(jìn)一步劃線純化,D正確。(5)EGFP為720 bp,AnB1為390 bp,二者的總大小為720+390=1 110(bp),用引物F1-F和F2-R進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,其大小接近于P1、P2,根據(jù)圖中結(jié)果判斷,可以舍棄的質(zhì)粒有P3、P4。(6)瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)只能顯示擴(kuò)增片段的大致長(zhǎng)度,不能顯示精準(zhǔn)的DNA堿基數(shù)量,也不能呈現(xiàn)DNA堿基序列,因此對(duì)于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒,通常需進(jìn)一步通過(guò)基因測(cè)序確認(rèn)。(共63張PPT)單元檢測(cè)卷(三)(時(shí)間:75分鐘 滿分:100分)C一、單項(xiàng)選擇題(共14小題,每小題2分,共28分,每小題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題目要求。)1.基因工程操作離不開(kāi)三種工具,下列有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是( )A.用相同的限制性內(nèi)切核酸酶處理目的基因和質(zhì)粒,可獲得相同的黏性末端B.常用載體質(zhì)粒的基本單位是脫氧核糖核苷酸,另外兩種工具的基本單位是氨基酸C.DNA聚合酶能夠催化形成磷酸二酯鍵,是基因工程中的“分子黏合劑”D.限制性內(nèi)切核酸酶主要從原核生物中分離獲得,具有識(shí)別特定核苷酸序列的能力解析:構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),常用相同的限制性內(nèi)切核酸酶處理目的基因和質(zhì)粒,以產(chǎn)生相同的黏性末端,以便于二者連接,A正確;質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是DNA,其基本單位是脫氧核糖核苷酸;限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì),其基本單位是氨基酸,B正確;DNA連接酶能夠催化形成磷酸二酯鍵,是基因工程中的“分子黏合劑”,C錯(cuò)誤;限制性內(nèi)切核酸酶主要從原核生物中分離獲得,具有識(shí)別特定核苷酸序列的能力,即具有特異性(專一性),D正確。2.圖1表示DNA的平面結(jié)構(gòu)示意圖,圖2表示某種限制酶的識(shí)別序列和作用位點(diǎn),下列相關(guān)說(shuō)法正確的是( )A.圖1中a所示部位即圖2中箭頭所示部位B.圖2所示的DNA片段被限制酶切割后獲得的末端形式與圖1末端相同C.T4 DNA連接酶可以將兩個(gè)圖1所示結(jié)構(gòu)連接成為一個(gè)DNA片段D.基因工程的載體必須具有圖2所示的堿基序列C解析:圖1中a所示部位為一個(gè)脫氧核苷酸內(nèi)部磷酸和脫氧核糖連接的化學(xué)鍵,圖2中箭頭所示部位為相鄰的兩個(gè)脫氧核苷酸之間連接的磷酸二酯鍵,二者不同,A錯(cuò)誤;圖2所示的DNA片段被限制酶切割后獲得的末端為黏性末端,圖1為平末端,故圖2所示的DNA片段被限制酶切割后獲得的末端形式與圖1末端不同,B錯(cuò)誤;T4 DNA連接酶可以連接平末端和黏性末端,因此T4 DNA連接酶可以將兩個(gè)圖1所示結(jié)構(gòu)連接成為一個(gè)DNA片段,C正確;基因工程的載體一般具有多個(gè)限制酶識(shí)別序列,即不一定具有圖2所示的堿基序列,D錯(cuò)誤。A.圖1中a所示部位即圖2中箭頭所示部位B.圖2所示的DNA片段被限制酶切割后獲得的末端形式與圖1末端相同C.T4 DNA連接酶可以將兩個(gè)圖1所示結(jié)構(gòu)連接成為一個(gè)DNA片段D.基因工程的載體必須具有圖2所示的堿基序列3.(2024·江蘇揚(yáng)州階段練習(xí))用XhoⅠ和SalⅠ兩種限制性內(nèi)切核酸酶分別處理同一DNA片段(限制酶在對(duì)應(yīng)切點(diǎn)一定能切開(kāi)),酶切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。下列敘述錯(cuò)誤的是( )A.圖1中兩種酶識(shí)別的核苷酸序列不同B.圖1中酶催化反應(yīng)的化學(xué)鍵是氫鍵C.圖2中②可能是用XhoⅠ處理得到的酶切產(chǎn)物D.用XhoⅠ和SalⅠ同時(shí)處理該DNA,電泳后得到6種產(chǎn)物B解析:酶具有專一性,不同的限制酶識(shí)別并切割不同的核苷酸序列,A正確;圖1中酶用來(lái)切割DNA,DNA單鏈中的脫氧核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵相連,因此酶催化反應(yīng)的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵,B錯(cuò)誤;分析圖1,限制酶XhoⅠ有2處切割位點(diǎn),切割后產(chǎn)生3個(gè)DNA片段,圖2中②是用XhoⅠ處理得到的酶切產(chǎn)物,C正確;分析圖1,限制酶XhoⅠ和SalⅠ有5處切割位點(diǎn),切割后產(chǎn)生6個(gè)DNA片段,即用XhoⅠ和SalⅠ同時(shí)處理該DNA,電泳后得到6種產(chǎn)物,D正確。A.圖1中兩種酶識(shí)別的核苷酸序列不同B.圖1中酶催化反應(yīng)的化學(xué)鍵是氫鍵C.圖2中②可能是用XhoⅠ處理得到的酶切產(chǎn)物D.用XhoⅠ和SalⅠ同時(shí)處理該DNA,電泳后得到6種產(chǎn)物4.(2023·連云港高二期中)某線性DNA分子含有3 000個(gè)堿基對(duì)(bp),先用限制酶a切割,再把得到的產(chǎn)物用限制酶b切割,得到的DNA片段大小如下表所示。限制酶a和b的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列說(shuō)法正確的是( )D酶a切割產(chǎn)物(bp) 酶b再次切割產(chǎn)物(bp)1 600;1 100;300 800;300酶a 酶b5′-A↓GATC T-3′ 5′-G↓GATC C-3′3′-T CTAG↑A-5′ 3′-C CTAG↑G-5′A.在該DNA分子中,酶a與酶b的識(shí)別序列分別有3個(gè)和2個(gè)B.這兩種酶切出的黏性末端不能相互連接C.這兩種酶切斷的化學(xué)鍵分別為磷酸二酯鍵和氫鍵解析:由表格可知,該線性DNA經(jīng)酶a切割后得到了3個(gè)DNA片段,故在該DNA分子中,酶a的識(shí)別序列有2個(gè),經(jīng)酶b再次切割后得到3個(gè)800 bp和2個(gè)300 bp的DNA片段,則酶b的識(shí)別序列也有2個(gè),且酶a和酶b的識(shí)別位點(diǎn)不同,A錯(cuò)誤;圖中顯示雖然這兩種酶的識(shí)別序列不同,但是切割后的黏性末端可以相互連接,B錯(cuò)誤;這兩種酶切斷的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵,C錯(cuò)誤;5.PCR是體外快速大量擴(kuò)增DNA的一種技術(shù),下列關(guān)于PCR技術(shù)敘述錯(cuò)誤的是( )A.增加模板DNA的量可以提高反應(yīng)速度B.退火溫度過(guò)低會(huì)造成引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)增加C.延伸時(shí),DNA聚合酶從引物的5′端連接脫氧核苷酸D.PCR反應(yīng)體系中一般需加Mg2+以激活DNA聚合酶C解析:PCR過(guò)程中,以DNA分子為模板合成子代DNA分子,因此增加模板DNA的量可以提高反應(yīng)速度,A正確;PCR技術(shù)中,退火是指引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上,退火溫度過(guò)低會(huì)造成引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)增加,B正確;DNA的復(fù)制需要引物的主要原因是DNA聚合酶只能從引物的3′端連接脫氧核苷酸,C錯(cuò)誤。6.蜘蛛絲(蛛絲蛋白)被稱為“生物鋼”,有著超強(qiáng)的抗張強(qiáng)度,下圖為蛛絲蛋白基因?qū)?yīng)的DNA片段結(jié)構(gòu)示意圖,其中1~4表示DNA上引物可能結(jié)合的位置,目前利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)蜘蛛絲已取得成功。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( )A.若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因,會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵B.若用PCR技術(shù)獲取目的基因,則圖中的1、4分別是2種引物結(jié)合的位置C.若受體細(xì)胞為大腸桿菌,則需先用Ca2+處理,更利于實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化D.在PCR儀中根據(jù)選定的引物至少需經(jīng)過(guò)6次循環(huán)才可獲得32個(gè)符合要求的目的基因B解析:若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因,DNA每條鏈上會(huì)破壞2個(gè)磷酸二酯鍵,共會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵,A正確;由于DNA聚合酶只能從5′→3′延伸子鏈,圖中的磷酸基團(tuán)為5′端,羥基為3′端,由引物3′端延伸子鏈,子鏈和模板鏈反向平行,因此根據(jù)引物的延伸方向可知圖中與引物結(jié)合的位置是2、3,B錯(cuò)誤;A.若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因,會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵B.若用PCR技術(shù)獲取目的基因,則圖中的1、4分別是2種引物結(jié)合的位置C.若受體細(xì)胞為大腸桿菌,則需先用Ca2+處理,更利于實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化D.在PCR儀中根據(jù)選定的引物至少需經(jīng)過(guò)6次循環(huán)才可獲得32個(gè)符合要求的目的基因自然條件下,細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率很低,通過(guò)化學(xué)和物理方法的處理可以增強(qiáng)細(xì)菌捕獲外源 DNA 的能力,成為感受態(tài)細(xì)胞。因用Ca2+處理能促進(jìn)細(xì)菌攝取外源DNA,科學(xué)家常使用 CaCl2溶液制備感受態(tài)細(xì)胞,進(jìn)而轉(zhuǎn)入外源DNA。若受體細(xì)胞為大腸桿菌,大腸桿菌常用的轉(zhuǎn)化方法是:先用 CaCl2溶液處理細(xì)胞,再將載體DNA分子溶于緩沖液中與此種細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,C正確;A.若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因,會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵B.若用PCR技術(shù)獲取目的基因,則圖中的1、4分別是2種引物結(jié)合的位置C.若受體細(xì)胞為大腸桿菌,則需先用Ca2+處理,更利于實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化D.在PCR儀中根據(jù)選定的引物至少需經(jīng)過(guò)6次循環(huán)才可獲得32個(gè)符合要求的目的基因如題圖所示,設(shè)X基因?yàn)槟康幕颉=?jīng)過(guò)第一輪復(fù)制以親代DNA的兩條鏈做模板,可以得到①和②兩種DNA;經(jīng)過(guò)第二輪復(fù)制可以得到①和③、②和④;經(jīng)過(guò)第三輪復(fù)制可以得到①和③、③和⑤、②和④、④和⑤;第四輪復(fù)制得到16個(gè)DNA分子,即①和③、2個(gè)③和2個(gè)⑤、②和④、2個(gè)④和2個(gè)⑤、第三輪的2個(gè)⑤得到4個(gè)⑤(統(tǒng)計(jì)為①、②、3個(gè)③、3個(gè)④、8個(gè)⑤);第五輪復(fù)制得到32個(gè)DNA分子,即①和③、②和④、3個(gè)③和3個(gè)⑤、3個(gè)④和3個(gè)⑤、第四輪的8個(gè)⑤得16個(gè)⑤(統(tǒng)計(jì)為①、②、4個(gè)③、4個(gè)④、22個(gè)⑤;⑤為目的基因即還未獲得32個(gè)目的基因),第六輪復(fù)制得64個(gè)DNA分子,即①和③、②和④、4個(gè)③和4個(gè)⑤、4個(gè)④和4個(gè)⑤、第五輪的22個(gè)⑤得44個(gè)⑤(統(tǒng)計(jì)為①、②、5個(gè)③、5個(gè)④、52個(gè)⑤;⑤為目的基因,即此時(shí)獲得32以上符合條件的目的基因),綜上所述,需要至少6次循環(huán)可獲得32個(gè)符合要求的目的基因,D正確。A.若從該DNA片段中直接獲取蛛絲蛋白基因,會(huì)破壞4個(gè)磷酸二酯鍵B.若用PCR技術(shù)獲取目的基因,則圖中的1、4分別是2種引物結(jié)合的位置C.若受體細(xì)胞為大腸桿菌,則需先用Ca2+處理,更利于實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化D.在PCR儀中根據(jù)選定的引物至少需經(jīng)過(guò)6次循環(huán)才可獲得32個(gè)符合要求的目的基因7.(2024·江蘇南京開(kāi)學(xué)考試)下列關(guān)于DNA粗提取和鑒定的敘述,正確的是( )A.新鮮洋蔥、菠菜、豬肝、豬血等都是DNA粗提取的理想實(shí)驗(yàn)材料B.將過(guò)濾液放入4 ℃冰箱或加入預(yù)冷的乙醇都可抑制DNA酶的活性C.鑒定DNA時(shí),應(yīng)將絲狀物直接加入到二苯胺試劑中并進(jìn)行沸水浴D.利用電泳鑒定DNA時(shí),應(yīng)在瓊脂糖凝膠緩沖液中加入二苯胺試劑作為染料B解析:哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞核和細(xì)胞器,因此新鮮豬血不能作為提取DNA的材料,而新鮮洋蔥、菠菜、豬肝等都是DNA粗提取的理想實(shí)驗(yàn)材料,A錯(cuò)誤;將過(guò)濾液放入4 ℃冰箱或加入預(yù)冷的乙醇都可抑制DNA酶的活性,避免DNA被水解,另一方面加入預(yù)冷的乙醇溶液可以析出DNA,B正確;鑒定DNA時(shí),應(yīng)將絲狀物溶解在2(mol·L-1)的NaCl溶液中,再加入二苯胺試劑并進(jìn)行沸水浴,C錯(cuò)誤;二苯胺試劑使用時(shí)需要加熱,不能作為電泳鑒定DNA的染料,D錯(cuò)誤。8.(2023·湖北卷,4)用氨芐青霉素抗性基因(AmpR)、四環(huán)素抗性基因(TetR)作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒,構(gòu)建基因表達(dá)載體(重組質(zhì)粒),并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述錯(cuò)誤的是( )A.若用HindⅢ酶切,目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同B.若用PvuⅠ酶切,在含Tet(四環(huán)素)培養(yǎng)基中的菌落,不一定含有目的基因C.若用SphⅠ酶切,可通過(guò)DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否D.若用SphⅠ酶切,攜帶目的基因的受體菌在含Amp(氨芐青霉素)和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落D解析:若用HindⅢ酶切,目的基因可能正向插入,也可能反向插入,轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同,A正確;若用PvuⅠ酶切,重組質(zhì)粒和質(zhì)粒中都有四環(huán)素抗性基因(TetR),因此在含Tet(四環(huán)素)培養(yǎng)基中的菌落,不一定含有目的基因,B正確;DNA凝膠電泳技術(shù)可以分離不同大小的DNA片段,重組質(zhì)粒的大小與質(zhì)粒不同,能夠鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否,C正確;SphⅠ的酶切位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因中,若用SphⅠ酶切,會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因,重組質(zhì)粒中含氨芐青霉素抗性基因(AmpR),因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp(氨芐青霉素)的培養(yǎng)基中能形成菌落,在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落,D錯(cuò)誤。A.若用HindⅢ酶切,目的基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物可能不同B.若用PvuⅠ酶切,在含Tet(四環(huán)素)培養(yǎng)基中的菌落,不一定含有目的基因C.若用SphⅠ酶切,可通過(guò)DNA凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否D.若用SphⅠ酶切,攜帶目的基因的受體菌在含Amp(氨芐青霉素)和Tet的培養(yǎng)基中能形成菌落9.基因工程為花卉育種提供了新的技術(shù)保障。如圖為花卉育種的過(guò)程(字母代表相應(yīng)的物質(zhì)或結(jié)構(gòu),序號(hào)代表過(guò)程或方法)。下列說(shuō)法正確的是( )A.①過(guò)程需要的酶有限制酶和DNA聚合酶B.②過(guò)程常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法C.③、④過(guò)程為分化和再分化,該過(guò)程體現(xiàn)了植物細(xì)胞具有全能性D.轉(zhuǎn)基因生物DNA上是否插入目的基因,可用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)B解析:①過(guò)程是基因表達(dá)載體的構(gòu)建,需要的酶有限制酶和DNA連接酶,A錯(cuò)誤;由于受體細(xì)胞為植物細(xì)胞,所以②過(guò)程常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,B正確;由植物細(xì)胞培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因植株的③、④過(guò)程分別為脫分化和再分化,該過(guò)程體現(xiàn)了植物細(xì)胞具有全能性,C錯(cuò)誤;檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因,應(yīng)采用DNA分子雜交法,不能采用抗原—抗體雜交技術(shù),D錯(cuò)誤。A.①過(guò)程需要的酶有限制酶和DNA聚合酶B.②過(guò)程常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法C.③、④過(guò)程為分化和再分化,該過(guò)程體現(xiàn)了植物細(xì)胞具有全能性D.轉(zhuǎn)基因生物DNA上是否插入目的基因,可用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)10.為了增加菊花花色類(lèi)型,研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1),擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組,再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟环氖? )A.用限制性內(nèi)切核酸酶EcoRⅠ和DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒B.用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰?xì)胞C.在培養(yǎng)基中添加卡那霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞D.用PCR技術(shù)檢測(cè)C基因是否整合到菊花染色體上C解析:根據(jù)目的基因兩側(cè)的限制酶切割位點(diǎn)可知,用限制性內(nèi)切核酸酶EcoRⅠ和DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒,A正確;將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,即用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰?xì)胞,B正確;圖2中顯示標(biāo)記基因是潮霉素抗性基因,因此可在培養(yǎng)基中添加潮霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞,C錯(cuò)誤。A.用限制性內(nèi)切核酸酶EcoRⅠ和DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒B.用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰?xì)胞C.在培養(yǎng)基中添加卡那霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞D.用PCR技術(shù)檢測(cè)C基因是否整合到菊花染色體上11.為使玉米獲得抗除草劑性狀,科研人員進(jìn)行了相關(guān)操作(如圖所示)。含有內(nèi)含子的報(bào)告基因不能在原核生物中正確表達(dá),但能在真核生物中正確表達(dá),其正確表達(dá)產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì) K 變?yōu)樗{(lán)色物質(zhì)。轉(zhuǎn)化過(guò)程中愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌,殘留的農(nóng)桿菌會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織也可在含除草劑的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。下列敘述錯(cuò)誤的是( )A.T-DNA可將基因G轉(zhuǎn)移并整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA 上B.利用物質(zhì)K和抗生素進(jìn)行篩選1,可獲得藍(lán)色的農(nóng)桿菌菌落C.利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選 2,易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株D.題中愈傷組織重新分化為芽、根等器官的過(guò)程中,需要添加植物激素B解析:農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞,并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上,根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn),將目的基因(基因G)插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上,通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用,就可以把目的基因(基因G)整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA上,A正確;農(nóng)桿菌屬于原核生物,含有內(nèi)含子的報(bào)告基因不能在原核生物中正確表達(dá),故不會(huì)出現(xiàn)藍(lán)色的農(nóng)桿菌菌落,B錯(cuò)誤;A.T-DNA可將基因G轉(zhuǎn)移并整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA 上B.利用物質(zhì)K和抗生素進(jìn)行篩選1,可獲得藍(lán)色的農(nóng)桿菌菌落C.利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選 2,易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株D.題中愈傷組織重新分化為芽、根等器官的過(guò)程中,需要添加植物激素根據(jù)題意可知,報(bào)告基因的正確表達(dá)產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色,而愈傷組織表面殘留的農(nóng)桿菌會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),因此利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選2,更易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株,C正確;愈傷組織重新分化為芽、根等器官的過(guò)程中,需要添加植物激素,如生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素,D正確。A.T-DNA可將基因G轉(zhuǎn)移并整合到愈傷組織細(xì)胞的染色體DNA 上B.利用物質(zhì)K和抗生素進(jìn)行篩選1,可獲得藍(lán)色的農(nóng)桿菌菌落C.利用物質(zhì)K和除草劑進(jìn)行篩選 2,易于獲得抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株D.題中愈傷組織重新分化為芽、根等器官的過(guò)程中,需要添加植物激素12.(2023·宿遷高二質(zhì)檢)近年來(lái),基因工程的發(fā)展非常迅速,科學(xué)家可以用DNA探針和外源基因?qū)氲姆椒ㄟM(jìn)行遺傳病的診斷和治療。下列做法錯(cuò)誤的是( )A.用DNA探針檢測(cè)鐮狀細(xì)胞貧血B.用DNA探針檢測(cè)病毒性肝炎C.用導(dǎo)入外源基因的方法治療鐮狀細(xì)胞貧血D.用基因替換的方法治療21三體綜合征解析:21三體綜合征屬于染色體遺傳病,患者的21號(hào)染色體比正常人多一條,無(wú)法從基因水平上對(duì)其進(jìn)行治療,D錯(cuò)誤。D13.下列有關(guān)基因工程的成果及應(yīng)用的說(shuō)法,錯(cuò)誤的是( )A.基因工程中抗蟲(chóng)、抗病轉(zhuǎn)基因植物的種植減少了農(nóng)藥的使用B.基因工程在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用主要是培育高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗逆性的農(nóng)作物C.基因治療是把正常基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,以達(dá)到治療的目的D.利用基因工程技術(shù),將人產(chǎn)生胰島素的基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌后,大腸桿菌內(nèi)表達(dá)出的胰島素與人的胰島素結(jié)構(gòu)相同D解析:基因工程中抗蟲(chóng)、抗病轉(zhuǎn)基因植物的種植減少了農(nóng)藥的使用,有利于降低生產(chǎn)成本,減少農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的污染,A正確;基因工程的應(yīng)用很廣泛,基因工程在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用主要是培育高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、品質(zhì)優(yōu)良和具有抗逆性的農(nóng)作物,B正確;基因治療是把正常基因?qū)氩∪梭w內(nèi),使該基因的表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療疾病的目的,基因治療的原理是基因重組,這是治療遺傳病的最有效手段,C正確;利用基因工程技術(shù),將人產(chǎn)生胰島素的基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌后,大腸桿菌內(nèi)表達(dá)出的胰島素與人的胰島素結(jié)構(gòu)不相同,因?yàn)榇竽c桿菌沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器,不能對(duì)胰島素進(jìn)行加工,D錯(cuò)誤。14.科學(xué)家運(yùn)用蛋白質(zhì)工程對(duì)綠色熒光蛋白進(jìn)行改造獲得黃色熒光蛋白,熒光蛋白在細(xì)胞內(nèi)生命活動(dòng)的檢測(cè)、腫瘤的示蹤研究領(lǐng)域有著重要的作用。下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程的敘述,錯(cuò)誤的是( )A.蛋白質(zhì)工程能夠生產(chǎn)自然界中不存在的蛋白質(zhì)B.蛋白質(zhì)工程遵循的原理包括中心法則C.蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)的基本思路是從基因開(kāi)始D.基因定點(diǎn)突變技術(shù)可幫助改造生產(chǎn)新的蛋白質(zhì)C解析:蛋白質(zhì)工程能對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行基因改造,或制造新的、生產(chǎn)自然界中不存在的蛋白質(zhì),以滿足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需要,A正確;蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),對(duì)編碼該蛋白的基因進(jìn)行有目的的設(shè)計(jì)改造,以改造現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造新的蛋白質(zhì),最后合成所需的蛋白質(zhì),基因控制蛋白質(zhì)合成的過(guò)程中包括中心法則,B正確;蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)的基本思路是從蛋白質(zhì)的預(yù)期功能開(kāi)始,C錯(cuò)誤;基因定點(diǎn)突變技術(shù)可改變基因的結(jié)構(gòu),可幫助改造生產(chǎn)新的蛋白質(zhì),D正確。二、多項(xiàng)選擇題(共4小題,每小題3分,共12分。每題有不止一個(gè)選項(xiàng)符合題意,每題全選對(duì)者得3分,選對(duì)但不全的得1分,錯(cuò)選或不答的得0分。)15.科研人員利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將抗病毒蛋白基因C導(dǎo)入番木瓜,培育出轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜,Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)模式圖如圖所示。下列敘述正確的是( )A.農(nóng)桿菌的T-DNA與番木瓜基因發(fā)生重組B.構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶和DNA聚合酶C.含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌具有四環(huán)素抗性D.轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜具有卡那霉素抗性AD解析:構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶和DNA連接酶,B錯(cuò)誤;抗病毒蛋白基因C的插入位點(diǎn)位于四環(huán)素抗性基因內(nèi)部,插入抗病毒蛋白基因C后,重組Ti質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因被破壞,含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌不具有四環(huán)素抗性,C錯(cuò)誤;轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜含有卡那霉素抗性基因,故轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜具有卡那霉素抗性,D正確。A.農(nóng)桿菌的T-DNA與番木瓜基因發(fā)生重組B.構(gòu)建重組質(zhì)粒需要限制酶和DNA聚合酶C.含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌具有四環(huán)素抗性D.轉(zhuǎn)基因抗病毒番木瓜具有卡那霉素抗性16.(2023·江蘇南通期末)多重PCR是指在反應(yīng)體系中加入多種引物,最終擴(kuò)增出多種目的DNA片段的技術(shù),如下圖。下列相關(guān)敘述正確的是( )A.多重PCR加入的引物之間不能互補(bǔ)配對(duì)形成局部雙鏈B.不同對(duì)引物的退火溫度差異越大,擴(kuò)增的特異性越強(qiáng)C.多重PCR擴(kuò)增出的大小不一的DNA片段可用電泳檢測(cè)D.多重PCR可用于多種病原體感染的檢測(cè)ACD解析:多重PCR加入的不同引物的堿基排列順序不能互補(bǔ),如果互補(bǔ),就會(huì)使引物之間形成雙鏈,不能與模板鏈結(jié)合,降低擴(kuò)增的效率,A正確;一般而言,引物的GC含量越高,結(jié)合特異性越強(qiáng),擴(kuò)增的特異性越強(qiáng),與退火溫度關(guān)系不大,B錯(cuò)誤;電泳技術(shù)可分離不同大小的DNA分子,故多重PCR擴(kuò)增出的大小不一的DNA片段可用電泳檢測(cè),C正確;PCR鑒定病原體的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì),該體系中加入多種引物,最終擴(kuò)增出多種目的DNA片段,故多重PCR可用于多種病原體感染的檢測(cè),D正確。A.多重PCR加入的引物之間不能互補(bǔ)配對(duì)形成局部雙鏈B.不同對(duì)引物的退火溫度差異越大,擴(kuò)增的特異性越強(qiáng)C.多重PCR擴(kuò)增出的大小不一的DNA片段可用電泳檢測(cè)D.多重PCR可用于多種病原體感染的檢測(cè)17.(2023·江蘇徐州階段練習(xí))如圖為某科研人員利用DNA分子探針鑒定50 mL菌液樣品中是否含有某特定DNA的細(xì)菌的示意圖。下列敘述錯(cuò)誤的是( )A.培養(yǎng)皿中菌落數(shù)就是樣品中含有的實(shí)際活菌數(shù)目B.重組質(zhì)粒與探針進(jìn)行分子雜交的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)原則C.外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間才能進(jìn)行復(fù)制D.放射自顯影結(jié)果可以顯示原培養(yǎng)皿中含有特定DNA的細(xì)菌菌落位置AC解析:根據(jù)培養(yǎng)皿中菌落數(shù)只能估算樣品中含有的活菌數(shù)目,A錯(cuò)誤;重組質(zhì)粒與探針能進(jìn)行分子雜交是因?yàn)镈NA分子的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,B正確;外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間才能表達(dá),而復(fù)制需要有復(fù)制原點(diǎn),C錯(cuò)誤;放射自顯影結(jié)果可以顯示原培養(yǎng)皿中含有特定DNA的細(xì)菌菌落位置,因?yàn)榫涓街谀ど系奈恢檬枪潭ǖ模鶕?jù)放射自顯影結(jié)果可以一一對(duì)應(yīng)起來(lái),D正確。A.培養(yǎng)皿中菌落數(shù)就是樣品中含有的實(shí)際活菌數(shù)目B.重組質(zhì)粒與探針進(jìn)行分子雜交的原理是堿基互補(bǔ)配對(duì)原則C.外源DNA必須位于重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間才能進(jìn)行復(fù)制D.放射自顯影結(jié)果可以顯示原培養(yǎng)皿中含有特定DNA的細(xì)菌菌落位置18.研究人員將一種海魚(yú)抗凍蛋白基因afp整合到土壤農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上,利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得抗凍番茄。afp基因可插入宿主染色體的單一位點(diǎn)或同時(shí)插入多個(gè)位點(diǎn),經(jīng)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化后的番茄作為親本自交得F1。正常情況下,下列敘述正確的是( )A.轉(zhuǎn)化是指afp基因進(jìn)入番茄細(xì)胞內(nèi),并在番茄細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定并表達(dá)出抗凍蛋白的過(guò)程B.可使用番茄新鮮葉片或花序與農(nóng)桿菌進(jìn)行共培養(yǎng),篩選出轉(zhuǎn)化細(xì)胞并組織培養(yǎng)再生植株C.F1植株自交,F(xiàn)2種子單株收種并播種,其中3/4的番茄具有抗凍性狀時(shí),親本為單一位點(diǎn)插入的植株D.F1植株自交,F(xiàn)2種子單株收種并播種,子代若全為抗凍番茄,則親本至少一對(duì)染色體上均有afp基因插入ACD解析:轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程,A正確;可以使用番茄新鮮葉片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng),篩選出轉(zhuǎn)化細(xì)胞并組織培養(yǎng)再生植株,或?qū)⒒ㄐ蛑苯咏](méi)在含有農(nóng)桿菌的溶液中一段時(shí)間,然后培養(yǎng)植株并獲得種子,再進(jìn)行篩選鑒定,B錯(cuò)誤;F2種子單株收種并播種,其中3/4的番茄具有抗凍性狀,則F1是一對(duì)等位基因的雜合子,即親本為單一位點(diǎn)插入的植株,C正確;F2種子單株收種并播種,子代若全為抗凍番茄,則親本為純合子,親本至少一對(duì)染色體上均有afp基因插入,D正確。三、非選擇題(共4小題,共60分。)19.(15分)(2024·九省聯(lián)考)植物在高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,SOS3和SOS2激活位于質(zhì)膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SOS1,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路與胞質(zhì)內(nèi)Na+結(jié)合并將其排出細(xì)胞外,維持其正常生命活動(dòng)。回答下列問(wèn)題:(1)植物利用SOS信號(hào)通路將Na+排出細(xì)胞外,這種運(yùn)輸方式的特點(diǎn)是____________________________。(2)通過(guò)基因工程在水稻中過(guò)量表達(dá)SOS1蛋白,以期增強(qiáng)水稻抗鹽能力。①為獲得編碼SOS1蛋白的基因,可提取野生型水稻總RNA,通過(guò)________獲得模板DNA,再經(jīng)PCR獲得SOS1基因片段。需要能量、需要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白逆轉(zhuǎn)錄②測(cè)序表明,SOS1基因編碼序列含有3 444個(gè)核苷酸,其中A+T含量占53%,模板鏈中C含量為26%,那么SOS1基因雙鏈序列中G+C的含量為_(kāi)_______%。③構(gòu)建表達(dá)載體時(shí),在下圖所示載體含有的限制酶識(shí)別位點(diǎn)插入SOS1基因。序列分析發(fā)現(xiàn)SOS1基因內(nèi)部有XbaⅠ的識(shí)別序列,為使載體中SOS1基因和綠色熒光蛋白基因正確表達(dá),應(yīng)在SOS1基因兩端分別添加______________兩種限制酶的識(shí)別序列,將SOS1基因插入載體前,應(yīng)選用______________兩種限制酶對(duì)載體酶切。47SpeⅠ、EcoRⅠXbaⅠ、EcoRⅠ(3)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化水稻后,選取可發(fā)綠色熒光的植株,鑒定其抗鹽能力是否增強(qiáng),采取的操作是____________________________________________________________________________________。(4)若發(fā)現(xiàn)水稻中過(guò)量表達(dá)SOS1基因并不能明顯提高其抗鹽能力,從信號(hào)通路角度分析,可能的原因是______________________________________________________________________________________________________________________。將轉(zhuǎn)基因水稻和普通水稻種植于高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,觀察兩種水稻的生長(zhǎng)狀況過(guò)量表達(dá)SOS1基因使轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SOS1含量增多,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路將胞質(zhì)內(nèi)的Na+過(guò)多地排出細(xì)胞外,影響細(xì)胞本身對(duì)Na+的利用解析:(1)由題干信息“在高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路與胞質(zhì)內(nèi)Na+結(jié)合并將其排出細(xì)胞外”可知,植物利用SOS信號(hào)通路將Na+排出細(xì)胞外是逆濃度梯度運(yùn)輸,因此運(yùn)輸方式為主動(dòng)運(yùn)輸,特點(diǎn)是需要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,需要能量。(2)①為獲得編碼SOS1蛋白的基因,可提取野生型水稻總RNA,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄獲得模板DNA,再經(jīng)PCR獲得SOS1基因片段。②SOS1基因編碼序列中A+T含量占53%,則G+C含量為47%。③由圖可知,綠色熒光蛋白基因內(nèi)部存在SpeⅠ和BamHⅠ兩種限制酶切割位點(diǎn),因此對(duì)載體酶切時(shí)不能選擇這兩種酶,并且不能選擇限制酶SmaⅠ,否則會(huì)導(dǎo)致載體中SOS1基因和綠色熒光蛋白基因不能正確表達(dá),故選擇XbaⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶對(duì)載體酶切,由于SOS1基因內(nèi)部有XbaⅠ的識(shí)別序列,故不能選擇限制酶XbaⅠ對(duì)目的基因酶切,但需要目的基因有與載體相同的黏性末端,故可在SOS1基因兩端分別添加SpeⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶的識(shí)別序列。(3)鑒定水稻抗鹽能力是否增強(qiáng),采取的操作是將轉(zhuǎn)基因水稻和普通水稻種植于高于胞內(nèi)Na+濃度的環(huán)境下,觀察兩種水稻的生長(zhǎng)狀況。(4)過(guò)量表達(dá)SOS1基因使轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SOS1含量增多,SOS1通過(guò)SOS信號(hào)通路將胞質(zhì)內(nèi)的Na+過(guò)多地排出細(xì)胞外,影響細(xì)胞本身對(duì)Na+的利用。20.(14分)(2024·江蘇揚(yáng)州模擬)水稻胚乳可作為生物反應(yīng)器用于開(kāi)發(fā)功能性產(chǎn)品。從豬瘟病毒抗原蛋白的預(yù)期功能出發(fā),研究小組設(shè)計(jì)其預(yù)期的結(jié)構(gòu),推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列,合成新的基因X。利用PCR技術(shù)對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增并連接啟動(dòng)子1,形成Z片段。把Z片段插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中,將構(gòu)建好的基因表達(dá)載體導(dǎo)入水稻細(xì)胞完成轉(zhuǎn)化,在胚乳中獲得相應(yīng)蛋白,最終將蛋白進(jìn)一步加工為植物源豬瘟疫苗。相關(guān)信息如圖所示。回答下列問(wèn)題。(1)研究小組通過(guò)PCR擴(kuò)增Z片段,延伸過(guò)程中,4種脫氧核苷三磷酸在____________________催化作用下合成新的DNA鏈。酶切時(shí),限制酶識(shí)別序列的重疊會(huì)降低切割效率。為構(gòu)建基因表達(dá)載體,選擇限制酶HindⅢ和________進(jìn)行切割,可使Z片段插入T-DNA的效率最高。為使基因能夠正常表達(dá),質(zhì)粒上的N和J應(yīng)都為_(kāi)_______。(2)為獲得含蛋白X的水稻材料,首先誘導(dǎo)水稻種子脫分化形成________,然后通過(guò)________的侵染,使目的基因進(jìn)入水稻細(xì)胞并完成轉(zhuǎn)化,再將其轉(zhuǎn)接到含特定激素的培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)其________形成具有根、莖、葉的完整植株。熱穩(wěn)定的DNA聚合酶EcoRⅠ終止子愈傷組織農(nóng)桿菌再分化(3)為驗(yàn)證水稻中目的基因X是否表達(dá)(轉(zhuǎn)錄和翻譯),分子水平上的檢測(cè)方法有_________________________________________________________________________________________________________________________________________________ (答出2點(diǎn)即可)。通過(guò)分子雜交技術(shù)檢測(cè)水稻細(xì)胞中目的基因X是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA;從轉(zhuǎn)基因水稻中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測(cè)是否翻譯出了蛋白質(zhì)解析:(1)PCR是根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理在體外進(jìn)行DNA復(fù)制的技術(shù),體外DNA復(fù)制過(guò)程中用94 ℃左右的溫度處理DNA使其解旋,因此,在子鏈延伸過(guò)程中,4種脫氧核苷三磷酸要在熱穩(wěn)定的DNA聚合酶催化作用下合成新的DNA鏈。依題意,酶切時(shí),限制酶識(shí)別序列的重疊會(huì)降低切割效率。XbaⅠ與HindⅢ識(shí)別序列有重疊,不符合題目要求。EcoRⅤ所切末端為平末端,連接效率低,不符合題目要求。EcoRⅠ識(shí)別序列與HindⅢ識(shí)別序列無(wú)重疊,產(chǎn)生的末端是黏性末端,連接效率相對(duì)平末端高。為使基因能夠正常表達(dá),基因結(jié)構(gòu)的上游和下游各有啟動(dòng)子和終止子,因此,N和J應(yīng)都為終止子。(2)為獲得含蛋白X的水稻材料,首先誘導(dǎo)水稻種子脫分化形成愈傷組織,然后通過(guò)農(nóng)桿菌的侵染,使目的基因進(jìn)入水稻細(xì)胞并完成轉(zhuǎn)化,再將其轉(zhuǎn)接到含特定激素的培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)其再分化形成具有根、莖、葉的完整植株。(3)為驗(yàn)證水稻中目的基因X是否表達(dá)(轉(zhuǎn)錄和翻譯),可通過(guò)分子雜交技術(shù)檢測(cè)水稻細(xì)胞中目的基因X是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA;可從轉(zhuǎn)基因水稻中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測(cè)是否翻譯出了蛋白質(zhì)。21.(15分)人胰島素由A鏈和B鏈構(gòu)成,其中B鏈的第20~29位氨基酸是胰島素分子間相互作用形成多聚體的關(guān)鍵區(qū)域。丹麥科學(xué)家將B28位脯氨酸替換為天冬氨酸,從而有效抑制了胰島素分子間的聚合,由此研發(fā)出速效胰島素類(lèi)似物,并已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用。回答下列相關(guān)問(wèn)題:(1)在對(duì)胰島素基因進(jìn)行改造時(shí),常采用重疊延伸PCR技術(shù)引入特定位點(diǎn)突變,過(guò)程如圖所示:除模板DNA、引物外,PCR反應(yīng)還需要____________________________________等物質(zhì)條件才能順利進(jìn)行。PCR②③過(guò)程分別至少需要經(jīng)過(guò)________輪反應(yīng)可得到等長(zhǎng)的DNA片段。PCR②③過(guò)程不能在同一反應(yīng)容器內(nèi)同時(shí)進(jìn)行,原因是________________________________________________________________________。經(jīng)⑤過(guò)程形成的改造后的胰島素基因在PCR擴(kuò)增時(shí),需要添加的引物是________________。熱穩(wěn)定的DNA聚合酶、四種脫氧核苷三磷酸2引物2和3中存在互補(bǔ)配對(duì)片段,置于同一反應(yīng)系統(tǒng)時(shí)它們會(huì)發(fā)生結(jié)合而失去作用引物4和引物1(4)若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的速效胰島素和天然胰島素的降血糖能力的差異,簡(jiǎn)要寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。將生理狀況相同的糖尿病小鼠均分為三組,編號(hào)為A、B、C,分別注射等量的蛋白質(zhì)工程改造后的速效胰島素、天然胰島素和生理鹽水,一段時(shí)間后檢測(cè)三組小鼠的血糖情況解析:(1)PCR過(guò)程中,除模板DNA、引物外,PCR反應(yīng)還需要熱穩(wěn)定的DNA聚合酶、四種脫氧核苷三磷酸等物質(zhì)條件才能順利進(jìn)行;PCR②③過(guò)程第1次復(fù)制形成的兩個(gè)DNA分子不等長(zhǎng),第2次復(fù)制才能形成等長(zhǎng)的DNA片段;該階段必須將引物1、2和引物3、4置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中,這是因?yàn)橐?和3中存在互補(bǔ)配對(duì)片段,置于同一反應(yīng)系統(tǒng)時(shí)它們會(huì)發(fā)生結(jié)合而失去作用;由于PCR體系中引物需要與模板的3′端結(jié)合,結(jié)合題圖可知,經(jīng)⑤過(guò)程形成的改造后的胰島素基因在PCR擴(kuò)增時(shí),需要添加的引物是引物4和引物1。(2)若要比較蛋白質(zhì)工程改造后速效胰島素和天然胰島素的降血糖能力的差異,可以以兩種物質(zhì)作為自變量,分別檢測(cè)它們的降血糖能力,故實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路為:將生理狀況相同的糖尿病小鼠均分為三組,編號(hào)為A、B、C,分別注射等量的蛋白質(zhì)工程改造后的速效胰島素、天然胰島素和生理鹽水,一段時(shí)間后檢測(cè)三組小鼠的血糖情況。22.(16分)(2023·江蘇卷,22)為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融合表達(dá),運(yùn)用重組酶技術(shù)構(gòu)建質(zhì)粒,如圖1所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:(1)分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段F1與片段F2時(shí),配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有___________,擴(kuò)增程序中最主要的不同是___________。模板、引物退火溫度(2)有關(guān)基因序列如圖2。引物F2-F、F1-R應(yīng)在下列選項(xiàng)中選用________。EGFP基因序列:5′ATGGTGAGCAAGGGC—GACGAGCTGTACAAG3′AnB1基因序列:5′CATGTCCAGCTGCAG—CCAAAACCACAACCA3′圖2A.ATGGTG——CAACCAB.TGGTTG——CACCATC.GACGAG——CTGCAGD.CTGCAG——CTCGTCCD(3)將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后,在重組酶作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒,直接用于轉(zhuǎn)化細(xì)菌。這一過(guò)程與傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程相比,無(wú)需使用的酶主要有________________________________________。(4)轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選,下列敘述錯(cuò)誤的有________。A.稀釋涂布平板需控制每個(gè)平板30~300個(gè)菌落B.抗性平板上未長(zhǎng)出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高C.抗性平板上常常會(huì)出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落D.抗性平板上長(zhǎng)出的單菌落無(wú)需進(jìn)一步劃線純化限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)和DNA連接酶ABC(5)為了驗(yàn)證平板上菌落中的質(zhì)粒是否符合設(shè)計(jì),用不同菌落的質(zhì)粒為模板,用引物F1-F和F2-R進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,質(zhì)粒P1~P4的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖3。根據(jù)圖中結(jié)果判斷,可以舍棄的質(zhì)粒有________。P3、P4(6)對(duì)于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒,通常需進(jìn)一步通過(guò)基因測(cè)序確認(rèn),原因是____________________________________________________________________________________________________________________________________。電泳只能顯示擴(kuò)增片段的大致長(zhǎng)度,不能顯示精準(zhǔn)的DNA堿基數(shù)量,也不能呈現(xiàn)DNA堿基序列解析:(1)PCR反應(yīng)進(jìn)行的條件:引物、酶、4種脫氧核苷三磷酸、模板和緩沖液(其中需要Mg2+)等。分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段F1與片段F2時(shí),配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有模板(片段F1、片段F2)、引物。擴(kuò)增程序中最主要的不同是退火溫度不同。(2)由圖1可知,F(xiàn)2-F與F1-R互補(bǔ),因此選項(xiàng)中A、B一組,C、D一組,再由圖1可知,F(xiàn)2-F與F1片段(EGFP基因序列3′端)部分相同,與F2片段(AnB1基因序列5′端)部分互補(bǔ),即C項(xiàng)“GACGAG”與EGFP基因的“5′GACGAG3′”相同,“5′CTGCAG3′”與AnB1基因序列的“5′CTGCAG3′”互補(bǔ),即C項(xiàng)符合要求;F1-R與F2片段(AnB1基因序列5′端)部分相同,與F1片段(EGFP基因序列3′端)部分互補(bǔ),即D項(xiàng)符合要求,故選C、D。(3)傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建需要使用限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)切割質(zhì)粒使其具有與目的基因相同的黏性末端,之后再用DNA連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒。題干將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后,在重組酶的作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒,不需要使用限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)和DNA連接酶。(4)用稀釋涂布平板法培養(yǎng)計(jì)數(shù)時(shí),為了使結(jié)果更準(zhǔn)確,應(yīng)選擇有30~300個(gè)菌落數(shù)的平板,但篩選時(shí)不需控制數(shù)目,A錯(cuò)誤;培養(yǎng)基溫度太高可將接種的菌落殺死,會(huì)導(dǎo)致抗性平板上未長(zhǎng)出菌落,屬于操作失誤,不是一般原因,B錯(cuò)誤;轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選,一般含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌才能發(fā)展為菌落,故不會(huì)出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落,C錯(cuò)誤;稀釋涂布平板法和平板劃線法均為分離純化細(xì)菌的方法,用稀釋涂布平板法在抗性平板上長(zhǎng)出的單菌落無(wú)需進(jìn)一步劃線純化,D正確。(5)EGFP為720 bp,AnB1為390 bp,二者的總大小為720+390=1 110(bp),用引物F1-F和F2-R進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,其大小接近于P1、P2,根據(jù)圖中結(jié)果判斷,可以舍棄的質(zhì)粒有P3、P4。(6)瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)只能顯示擴(kuò)增片段的大致長(zhǎng)度,不能顯示精準(zhǔn)的DNA堿基數(shù)量,也不能呈現(xiàn)DNA堿基序列,因此對(duì)于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒,通常需進(jìn)一步通過(guò)基因測(cè)序確認(rèn)。 展開(kāi)更多...... 收起↑ 資源列表 單元檢測(cè)卷(三).docx 單元檢測(cè)卷(三).pptx 縮略圖、資源來(lái)源于二一教育資源庫(kù)