資源簡介

重點強化練74　基因工程的工具、原理和應用
一、選擇題
1．(2023·海口高三模擬)限制酶、DNA連接酶等的發(fā)現(xiàn)為DNA分子的切割、連接及基因表達載體的構建創(chuàng)造了條件。下列關于重組DNA技術基本工具的敘述，正確的是(　　)
A．限制酶在原核細胞內(nèi)的主要作用是切割修剪自身的DNA
B．噬菌體、動植物病毒均可作為載體將外源基因導入受體細胞
C．用作載體的質粒DNA分子上可以不含有限制酶切割位點
D．DNA 連接酶可連接DNA分子兩條鏈中堿基對之間的氫鍵
2．(2024·湖北龍泉中學高三月考)下列關于DNA的提取和DNA片段的擴增及電泳鑒定的敘述，正確的是(　　)
A．利用DNA和蛋白質在冷酒精中溶解性的差異可初步分離DNA
B．在提取白色絲狀物時雙向攪拌比單向攪拌更有利于獲得結構完整的DNA
C．PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水和移液器等在使用前都必須進行高壓滅菌處理
D．PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定，電泳時電泳緩沖液不能沒過凝膠
3．(2024·永州第一中學高三月考)運用基因工程構建的生物反應器可實現(xiàn)藥用蛋白的批量生產(chǎn)，目前常用的生物反應器有乳腺生物反應器和膀胱生物反應器，其構建過程如下：構建藥用蛋白基因的表達載體，并將表達載體導入動物的受精卵中，然后從這個受精卵發(fā)育而成的個體的乳汁或者尿液中提取藥用蛋白。下列相關說法錯誤的是(　　)
A．構建乳腺生物反應器時，需將藥用蛋白基因和乳腺蛋白基因的啟動子等重組在一起
B．在轉基因動物的乳腺細胞或膀胱上皮細胞以外的細胞中不含有藥用蛋白基因
C．與乳腺生物反應器相比，膀胱生物反應器不受性別和年齡的限制
D．將表達載體導入哺乳動物的受精卵時，常采用顯微注射技術
4．(2024·河源高三聯(lián)考)組織型纖溶酶原激活物(t－PA)能激活纖溶酶原轉化為纖溶酶，將沉積在血管內(nèi)外的纖維蛋白溶解，從而保持血管暢通。t－PA進入血漿后大部分與纖溶酶原激活劑抑制物形成復合物，并迅速失去活性。科學家對其進行改造，增加溶栓效能、減少藥用劑量和降低副作用等。下列敘述錯誤的是(　　)
A．改造t－PA可通過改造基因或合成基因來實現(xiàn)
B．改造t－PA的過程不需要構建基因表達載體
C．需根據(jù)t－PA氨基酸序列合成出相應的基因
D．利用蛋白質工程生產(chǎn)的改造t－PA在自然界中不存在
5．(2023·廈門高三模擬)如表為四種限制酶所識別的核苷酸序列及相應的切割位置(箭頭所指)，下列敘述正確的是(　　)
限制酶種類 序列及切點 限制酶種類 序列及切點
①： EcoR Ⅰ ③：Bgl Ⅱ
②：BamH Ⅰ ④：Not Ⅰ
A.①②③④可催化磷酸二酯鍵和氫鍵斷裂，形成黏性末端
B．①切出的 DNA 片段，只有用E.coliDNA連接酶才能連接起來
C．②③切出的末端連接后形成的片段，不能再被②或③識別切割
D．構建基因表達載體時，用②③進行雙酶切，可防止目的基因與載體的反向連接
6．(2023·天津和平區(qū)高三二模)農(nóng)桿菌Ti質粒上的T－DNA可以轉移并隨機插入到被侵染植物的染色體DNA中。研究者將如圖中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán)，并以此環(huán)為模板進行PCR，擴增出T－DNA插入位置兩側的未知序列，以此可確定T－DNA插入的具體位置。下列說法不正確的是(　　)
A．PCR擴增依據(jù)的是DNA分子雙鏈復制的原理
B．進行PCR擴增需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶
C．利用圖中的引物②③組合可擴增出兩側的未知序列
D．通過與受體細胞的基因組序列比對，可確定T－DNA的插入位置
7．(2023·廈門外國語學校高三模擬)研究人員將編碼甜菜紅素合成酶的四個基因BvCYP、BvDOD、cDOPA和ADH與綠色熒光蛋白基因eGFP連接，搭載到農(nóng)桿菌Ti質粒的T－DNA片段上構建多基因表達載體，利用農(nóng)桿菌轉化法使其在煙草細胞中表達，并能觀察到甜菜紅素的合成與綠色熒光。下列說法錯誤的是(　　)
A．構建多基因表達載體時需用到限制酶和DNA連接酶
B．可用PCR技術檢測五個基因是否成功導入煙草細胞
C．圖中五個基因轉錄時均以DNA的同一條單鏈為模板
D．應選用含潮霉素的培養(yǎng)基篩選轉化成功的煙草細胞
8．某實驗小組利用如圖所示質粒和目的基因來構建基因表達載體，將目的基因導入大腸桿菌細胞并表達。下列敘述正確的是(　　)
A．圖中的質粒用酶a切割后，會產(chǎn)生8個游離的磷酸基團
B．在構建重組質粒時，可用酶a和酶c切割質粒和目的基因
C．成功導入目的基因的大腸桿菌可在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長
D．若用酶b和酶c切割，可以避免質粒的自身環(huán)化
9．(2024·珠海高三聯(lián)考)一種天然蛋白t－PA能高效降解因血漿纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥，但是心梗患者注射大劑量的t－PA會誘發(fā)顱內(nèi)出血。研究證實，將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低其誘發(fā)出血的副作用。據(jù)此，先對天然t－PA基因的堿基序列進行改造，然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達該改造后的基因，可制造出性能優(yōu)異的改良t－PA蛋白(注：圖中表示相關的目的基因、載體及限制酶，pCLY11為質粒)。下列敘述不正確的是(　　)
A．改造后的t－PA基因的黏性末端如圖所示，則需要選用限制酶XmaⅠ和NheⅠ切割質粒pCLY11
B．成功轉入重組質粒的受體細胞在培養(yǎng)基上會出現(xiàn)白色菌落
C．以上技術制造出性能優(yōu)異的改良t－PA過程被稱為蛋白質工程
D．改良t－PA基因的表達可在一定程度上降低顱內(nèi)出血的概率
10．(2023·東莞實驗中學高三模擬)干擾素是動物或人體細胞受到病毒侵染后產(chǎn)生的一種糖蛋白，可以用于對抗病毒的感染和癌癥，但體外保存相當困難。如圖是利用蛋白質工程設計生產(chǎn)干擾素的流程圖，據(jù)圖分析不正確的是(　　)
A．圖中構建新的干擾素模型的主要依據(jù)是蛋白質的預期功能
B．圖中新的干擾素基因必須插入質粒上的啟動子和終止子之間才能表達
C．圖中改造干擾素結構的實質是改造干擾素基因的結構
D．圖中各項技術并沒有涉及基因工程技術
二、非選擇題
11．(2024·廣州白云中學高三月考)如圖表示某種綠色熒光蛋白基因表達載體的構建過程，綠色熒光蛋白基因有820個堿基對(bp)，質粒有5 369個堿基對(bp)。請據(jù)圖回答問題：
(1)上述基因表達載體的構建過程需要的基本工具包括：______________________________。過程①②用相同的兩種限制酶切割，與單一酶切相比，優(yōu)勢有________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)過程②目的基因的擴增可通過PCR技術實現(xiàn)，進行PCR時除提供DNA母鏈、4種脫氧核苷酸外，還需要__________________________(至少填兩個)等基本條件。PCR可呈指數(shù)形式擴增目的基因，每個循環(huán)一般可分為________________________________________。
(3)已知圖中質粒經(jīng)BamH Ⅰ、Hind Ⅲ雙酶切后進行電泳，若出現(xiàn)了一條長度為5 150 bp的DNA條帶，則重組質粒的長度為____________的DNA片段條帶。
(4)若想獲得發(fā)綠色熒光的小鼠，可將重組質粒用____________法導入小鼠的____________(細胞)中。
12．(2024·深圳紅嶺中學高三月考)新型冠狀病毒的抗原性和感染性與其表面的S蛋白(刺突糖蛋白)密切相關，現(xiàn)利用基因工程的方法生產(chǎn)相關疫苗。圖甲為構建S蛋白基因表達載體的過程，圖乙為重組質粒被相關酶切后的電泳結果。請回答下列問題：
(1)①過程所使用的酶為______________，為保證PCR技術擴增S蛋白基因正常進行，該反應體系的主要成分有____________________________________________________________。
PCR技術中復性的目的是________________________________________________________
_____________________________________________________________________________。
(2)PCR過程經(jīng)過4次循環(huán)，消耗的引物的數(shù)量是______________個。
(3)構建好的重組質粒長度共2 000 bp，用限制酶Hind Ⅲ及限制酶Hind Ⅲ和BamH Ⅰ分別對重組質粒進行切割并電泳，結果如圖乙所示，可推測BamH Ⅰ在重組質粒上有____________個酶切位點。
(4)腺病毒載體疫苗是將S蛋白基因插入到改造后的腺病毒基因組中，該疫苗進入人體后，S蛋白基因利用人體細胞的蛋白質表達系統(tǒng)指導S蛋白的合成，其過程是__________________
___________________________________________________________(用文字和箭頭表示)。
重點強化練74　基因工程的工具、原理和應用（解析班）
一、選擇題
1．(2023·海口高三模擬)限制酶、DNA連接酶等的發(fā)現(xiàn)為DNA分子的切割、連接及基因表達載體的構建創(chuàng)造了條件。下列關于重組DNA技術基本工具的敘述，正確的是(　　)
A．限制酶在原核細胞內(nèi)的主要作用是切割修剪自身的DNA
B．噬菌體、動植物病毒均可作為載體將外源基因導入受體細胞
C．用作載體的質粒DNA分子上可以不含有限制酶切割位點
D．DNA 連接酶可連接DNA分子兩條鏈中堿基對之間的氫鍵
答案　B
解析　限制酶主要從原核生物中分離純化而來，其在原核細胞中的主要作用是切割外源DNA使之失效，從而達到保護自身的目的，A錯誤；作為載體的質粒上必須有限制酶的切割位點，這是質粒作為運載體的條件之一， C錯誤；DNA連接酶連接的是磷酸二酯鍵，D錯誤。
2．(2024·湖北龍泉中學高三月考)下列關于DNA的提取和DNA片段的擴增及電泳鑒定的敘述，正確的是(　　)
A．利用DNA和蛋白質在冷酒精中溶解性的差異可初步分離DNA
B．在提取白色絲狀物時雙向攪拌比單向攪拌更有利于獲得結構完整的DNA
C．PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水和移液器等在使用前都必須進行高壓滅菌處理
D．PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定，電泳時電泳緩沖液不能沒過凝膠
答案　A
解析　在提取白色絲狀物時用玻璃棒輕輕單向攪拌更有利于獲得結構完整的DNA，B錯誤；PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水在使用前都必須進行高壓滅菌處理，移液器不需要進行高壓滅菌處理，C錯誤；通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產(chǎn)物時，電泳緩沖液沒過凝膠1 mm為宜，D錯誤。
3．(2024·永州第一中學高三月考)運用基因工程構建的生物反應器可實現(xiàn)藥用蛋白的批量生產(chǎn)，目前常用的生物反應器有乳腺生物反應器和膀胱生物反應器，其構建過程如下：構建藥用蛋白基因的表達載體，并將表達載體導入動物的受精卵中，然后從這個受精卵發(fā)育而成的個體的乳汁或者尿液中提取藥用蛋白。下列相關說法錯誤的是(　　)
A．構建乳腺生物反應器時，需將藥用蛋白基因和乳腺蛋白基因的啟動子等重組在一起
B．在轉基因動物的乳腺細胞或膀胱上皮細胞以外的細胞中不含有藥用蛋白基因
C．與乳腺生物反應器相比，膀胱生物反應器不受性別和年齡的限制
D．將表達載體導入哺乳動物的受精卵時，常采用顯微注射技術
答案　B
解析　啟動子是RNA聚合酶識別和結合的位點，可用于驅動基因的轉錄，構建乳腺生物反應器時，需將藥用蛋白基因和乳腺蛋白基因的啟動子等重組在一起，以保證目的基因在乳腺細胞中能夠表達，A正確；受體細胞是動物的受精卵，所以在轉基因動物的乳腺細胞或膀胱細胞以外的其他細胞中也含有藥用蛋白基因，只是該基因沒有表達，B錯誤；乳腺生物反應器只能從哺乳期雌性個體的乳汁中獲取產(chǎn)物，與乳腺生物反應器相比，膀胱生物反應器的優(yōu)點是從雌雄個體的尿液中都可提取到產(chǎn)物，且不受性別、年齡等的限制，C正確。
4．(2024·河源高三聯(lián)考)組織型纖溶酶原激活物(t－PA)能激活纖溶酶原轉化為纖溶酶，將沉積在血管內(nèi)外的纖維蛋白溶解，從而保持血管暢通。t－PA進入血漿后大部分與纖溶酶原激活劑抑制物形成復合物，并迅速失去活性。科學家對其進行改造，增加溶栓效能、減少藥用劑量和降低副作用等。下列敘述錯誤的是(　　)
A．改造t－PA可通過改造基因或合成基因來實現(xiàn)
B．改造t－PA的過程不需要構建基因表達載體
C．需根據(jù)t－PA氨基酸序列合成出相應的基因
D．利用蛋白質工程生產(chǎn)的改造t－PA在自然界中不存在
答案　B
解析　通過蛋白質工程改造t－PA的過程仍需要構建基因表達載體，B錯誤。
5．(2023·廈門高三模擬)如表為四種限制酶所識別的核苷酸序列及相應的切割位置(箭頭所指)，下列敘述正確的是(　　)
限制酶種類 序列及切點 限制酶種類 序列及切點
①： EcoR Ⅰ ③：Bgl Ⅱ
②：BamH Ⅰ ④：Not Ⅰ
A.①②③④可催化磷酸二酯鍵和氫鍵斷裂，形成黏性末端
B．①切出的 DNA 片段，只有用E.coliDNA連接酶才能連接起來
C．②③切出的末端連接后形成的片段，不能再被②或③識別切割
D．構建基因表達載體時，用②③進行雙酶切，可防止目的基因與載體的反向連接
答案　C
解析　①②③④均為限制酶，可催化磷酸二酯鍵的斷裂，但不能催化氫鍵的斷裂，且均形成黏性末端，A錯誤；①切出的 DNA 片段，帶有黏性末端，用E.coliDNA連接酶和T4 DNA連接酶均能連接起來，B錯誤；②③切出的黏性末端相同，用DNA連接酶連接后形成的片段的堿基序列為－GGATCT－，因而不能再被②或③識別切割，C正確；構建基因表達載體時，用②③進行雙酶切，不能防止目的基因與載體的反向連接，因為這兩種限制酶切出的黏性末端是相同的，D錯誤。
6．(2023·天津和平區(qū)高三二模)農(nóng)桿菌Ti質粒上的T－DNA可以轉移并隨機插入到被侵染植物的染色體DNA中。研究者將如圖中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán)，并以此環(huán)為模板進行PCR，擴增出T－DNA插入位置兩側的未知序列，以此可確定T－DNA插入的具體位置。下列說法不正確的是(　　)
A．PCR擴增依據(jù)的是DNA分子雙鏈復制的原理
B．進行PCR擴增需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶
C．利用圖中的引物②③組合可擴增出兩側的未知序列
D．通過與受體細胞的基因組序列比對，可確定T－DNA的插入位置
答案　C
解析　由于DNA的兩條鏈反向平行，且子鏈從引物的3′端開始延伸，故利用圖中的引物①④組合可擴增出兩側的未知序列，C錯誤。
7．(2023·廈門外國語學校高三模擬)研究人員將編碼甜菜紅素合成酶的四個基因BvCYP、BvDOD、cDOPA和ADH與綠色熒光蛋白基因eGFP連接，搭載到農(nóng)桿菌Ti質粒的T－DNA片段上構建多基因表達載體，利用農(nóng)桿菌轉化法使其在煙草細胞中表達，并能觀察到甜菜紅素的合成與綠色熒光。下列說法錯誤的是(　　)
A．構建多基因表達載體時需用到限制酶和DNA連接酶
B．可用PCR技術檢測五個基因是否成功導入煙草細胞
C．圖中五個基因轉錄時均以DNA的同一條單鏈為模板
D．應選用含潮霉素的培養(yǎng)基篩選轉化成功的煙草細胞
答案　C
解析　BvCYP啟動子啟動轉錄的方向與其他的不同，所以五個基因轉錄時的模板不是同一條DNA單鏈，C錯誤；卡那霉素抗性基因不位于T－DNA中，不能表達，而潮霉素抗性基因位于T－DNA中，能表達，應選用含潮霉素的培養(yǎng)基篩選被農(nóng)桿菌轉化的煙草細胞，D正確。
8．某實驗小組利用如圖所示質粒和目的基因來構建基因表達載體，將目的基因導入大腸桿菌細胞并表達。下列敘述正確的是(　　)
A．圖中的質粒用酶a切割后，會產(chǎn)生8個游離的磷酸基團
B．在構建重組質粒時，可用酶a和酶c切割質粒和目的基因
C．成功導入目的基因的大腸桿菌可在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長
D．若用酶b和酶c切割，可以避免質粒的自身環(huán)化
答案　D
解析　質粒中含有2個酶a的切割位點，切割后會產(chǎn)生4個游離的磷酸基團，A錯誤；如果用酶a和酶c同時切割質粒，會破壞質粒的標記基因，B錯誤；若用酶b和酶c同時切割質粒和目的基因，會導致四環(huán)素抗性基因被破壞，則導入目的基因的大腸桿菌不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長，C錯誤。
9．(2024·珠海高三聯(lián)考)一種天然蛋白t－PA能高效降解因血漿纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥，但是心梗患者注射大劑量的t－PA會誘發(fā)顱內(nèi)出血。研究證實，將t－PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低其誘發(fā)出血的副作用。據(jù)此，先對天然t－PA基因的堿基序列進行改造，然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達該改造后的基因，可制造出性能優(yōu)異的改良t－PA蛋白(注：圖中表示相關的目的基因、載體及限制酶，pCLY11為質粒)。下列敘述不正確的是(　　)
A．改造后的t－PA基因的黏性末端如圖所示，則需要選用限制酶XmaⅠ和NheⅠ切割質粒pCLY11
B．成功轉入重組質粒的受體細胞在培養(yǎng)基上會出現(xiàn)白色菌落
C．以上技術制造出性能優(yōu)異的改良t－PA過程被稱為蛋白質工程
D．改良t－PA基因的表達可在一定程度上降低顱內(nèi)出血的概率
答案　A
解析　t－PA改良基因的黏性末端如圖所示，需選用限制酶Xma Ⅰ和 Bgl Ⅱ切開質粒pCLY11，才能與t－PA改良基因連接，A錯誤。
10．(2023·東莞實驗中學高三模擬)干擾素是動物或人體細胞受到病毒侵染后產(chǎn)生的一種糖蛋白，可以用于對抗病毒的感染和癌癥，但體外保存相當困難。如圖是利用蛋白質工程設計生產(chǎn)干擾素的流程圖，據(jù)圖分析不正確的是(　　)
A．圖中構建新的干擾素模型的主要依據(jù)是蛋白質的預期功能
B．圖中新的干擾素基因必須插入質粒上的啟動子和終止子之間才能表達
C．圖中改造干擾素結構的實質是改造干擾素基因的結構
D．圖中各項技術并沒有涉及基因工程技術
答案　D
解析　啟動子是RNA聚合酶識別和結合的位點，從而驅動轉錄，而終止子提供轉錄終止的信號，因此圖中新的干擾素基因必須插入到質粒上的啟動子和終止子之間才能表達，B正確；利用蛋白質工程設計生產(chǎn)干擾素的流程圖中，合成新的干擾素基因后，要構建基因表達載體在受體細胞中表達，這屬于基因工程技術，D錯誤。
二、非選擇題
11．(2024·廣州白云中學高三月考)如圖表示某種綠色熒光蛋白基因表達載體的構建過程，綠色熒光蛋白基因有820個堿基對(bp)，質粒有5 369個堿基對(bp)。請據(jù)圖回答問題：
(1)上述基因表達載體的構建過程需要的基本工具包括：______________________________。過程①②用相同的兩種限制酶切割，與單一酶切相比，優(yōu)勢有________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(2)過程②目的基因的擴增可通過PCR技術實現(xiàn)，進行PCR時除提供DNA母鏈、4種脫氧核苷酸外，還需要__________________________(至少填兩個)等基本條件。PCR可呈指數(shù)形式擴增目的基因，每個循環(huán)一般可分為________________________________________。
(3)已知圖中質粒經(jīng)BamH Ⅰ、Hind Ⅲ雙酶切后進行電泳，若出現(xiàn)了一條長度為5 150 bp的DNA條帶，則重組質粒的長度為____________的DNA片段條帶。
(4)若想獲得發(fā)綠色熒光的小鼠，可將重組質粒用____________法導入小鼠的____________(細胞)中。
答案　(1)限制酶、DNA連接酶、載體　可以避免目的基因自身環(huán)化、使目的基因定向插入到載體中　(2)TaqDNA聚合酶和引物　變性、復性、延伸　(3)5 970 bp　(4)顯微注射　受精卵
解析　(2)利用PCR技術擴增DNA時，除需要模板DNA分子、4種脫氧核苷酸外，還需要TaqDNA聚合酶和引物。擴增時，每個循環(huán)一般需要經(jīng)過“變性、復性、延伸”三個過程。(3)綠色熒光蛋白基因有820個堿基對，質粒有5 369個堿基對，質粒經(jīng)BamHⅠ、HindⅢ雙酶切后進行電泳，出現(xiàn)了一條長度為5 150 bp的DNA條帶，說明5 150 bp的DNA條帶是原質粒中切去部分片段的質粒，故重組質粒的長度＝5 150＋820＝5 970(bp)。
12．(2024·深圳紅嶺中學高三月考)新型冠狀病毒的抗原性和感染性與其表面的S蛋白(刺突糖蛋白)密切相關，現(xiàn)利用基因工程的方法生產(chǎn)相關疫苗。圖甲為構建S蛋白基因表達載體的過程，圖乙為重組質粒被相關酶切后的電泳結果。請回答下列問題：
(1)①過程所使用的酶為______________，為保證PCR技術擴增S蛋白基因正常進行，該反應體系的主要成分有____________________________________________________________。
PCR技術中復性的目的是________________________________________________________
_____________________________________________________________________________。
(2)PCR過程經(jīng)過4次循環(huán)，消耗的引物的數(shù)量是______________個。
(3)構建好的重組質粒長度共2 000 bp，用限制酶Hind Ⅲ及限制酶Hind Ⅲ和BamH Ⅰ分別對重組質粒進行切割并電泳，結果如圖乙所示，可推測BamH Ⅰ在重組質粒上有____________個酶切位點。
(4)腺病毒載體疫苗是將S蛋白基因插入到改造后的腺病毒基因組中，該疫苗進入人體后，S蛋白基因利用人體細胞的蛋白質表達系統(tǒng)指導S蛋白的合成，其過程是__________________
___________________________________________________________(用文字和箭頭表示)。
答案　(1)逆轉錄酶　模板DNA(目的基因片段)、四種脫氧核苷酸(或dNTP)、引物、耐高溫的DNA聚合酶、緩沖液　低溫下，引物能與相應互補DNA序列結合(引物通過堿基互補配對與單鏈DNA結合)　(2)30　(3)3　(4)S蛋白基因mRNAS蛋白
解析　(2)PCR 技術大量擴增目的基因時，消耗的引物個數(shù)計算公式為2n＋1－2，因此若一個該 DNA 分子在 PCR 儀中經(jīng)過4次循環(huán)，需要消耗引物24＋1－2＝30(個)。(3)用Hind Ⅲ將質粒(2 000 bp)切割后形成了200 bp、400 bp和1 400 bp共3個片段，而用HindⅢ和BamH Ⅰ將質粒切割后形成了200 bp、420 bp、560 bp的片段，2 000＝420×2＋560＋200×3，所以一共形成了6個片段，共有5個酶切位點，因此 BamH Ⅰ 在重組質粒上有5－2＝3(個)酶切位點。

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