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人教版 選擇性必修3
第1章 發(fā)酵工程
第2節(jié) 微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用
（二） 微生物的選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
自然界中微生物數(shù)量繁多，種類龐雜，要想從中分離出需要的特定微生物并不容易，尤其當(dāng)要分離的微生物在混合的菌群中不是優(yōu)勢(shì)種群時(shí)，僅通過(guò)一般的平板劃線法或稀釋涂布平板法很難實(shí)現(xiàn)。該怎么辦呢？
引 言
1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌？
分離：獲得分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物
計(jì)數(shù)：測(cè)定分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量
怎么分離？
如何計(jì)數(shù)？
土壤菌液（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）
01. 選擇培養(yǎng)基
科學(xué)實(shí)例：尋找耐高溫的DNA聚合酶
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種在體外擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫的DNA聚合酶。
到哪里去尋找這種酶？
耐高溫的酶
耐高溫生物體
高溫環(huán)境（熱泉、火山口）
尋找
尋找
思路：
科學(xué)實(shí)例：尋找耐高溫的DNA聚合酶
美國(guó)黃石公園
1973年，布魯克在美國(guó)黃石國(guó)家公園的一個(gè)熱泉中發(fā)現(xiàn)了耐熱的水生棲熱菌，并從這種菌種提取出耐高溫的DNA聚合酶。
因?yàn)樗鷹珶峋茉?70-80 ℃的高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存。
為什么水生棲熱菌能從熱泉中被篩選出來(lái)？
01. 選擇培養(yǎng)基
啟示：根據(jù)微生物對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。
耐寒微生物
耐熱微生物
石油分解菌
纖維素分解菌
你還知道哪些條件能影響微生物的生存和繁殖？
特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、pH、O2等。
這對(duì)在實(shí)驗(yàn)室中選擇培養(yǎng)特定的微生物有什么啟示？
01. 選擇培養(yǎng)基
啟示：根據(jù)微生物對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。
耐寒微生物
耐熱微生物
石油分解菌
纖維素分解菌
人為提供有利于目的菌生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度和pH）等，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。
實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理
選擇培養(yǎng)基
01. 選擇培養(yǎng)基
1.概念
在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。
01. 選擇培養(yǎng)基
回憶必修二開(kāi)展的“探究抗生素對(duì)細(xì)菌的選擇作用”
一般情況下，一定濃度的抗生素會(huì)殺死細(xì)菌，但變異的細(xì)菌可能產(chǎn)生耐藥性。在實(shí)驗(yàn)室連續(xù)培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，如果向培養(yǎng)基中添加抗生素，耐藥菌有可能存活下來(lái)。
通過(guò)觀察細(xì)菌在含有抗生素的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況，探究抗生素對(duì)細(xì)菌的選擇作用。
1.概念
在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。
01. 選擇培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基
選擇培養(yǎng)基
+某種抗生素
接種培養(yǎng)
培養(yǎng)結(jié)果
上述過(guò)程能否充分說(shuō)明該選擇培養(yǎng)基具有選擇性？
1.概念
在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。
01. 選擇培養(yǎng)基
設(shè)置基礎(chǔ)培養(yǎng)基或完全培養(yǎng)基作為對(duì)照，若基礎(chǔ)培養(yǎng)基或完全培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌落數(shù)菌多于該選擇培養(yǎng)基，則該選擇培養(yǎng)基具有選擇性。
怎么證明一個(gè)選擇培養(yǎng)基具有選擇性？
基礎(chǔ)培養(yǎng)基
選擇培養(yǎng)基
01. 選擇培養(yǎng)基
2.選擇培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)
常見(jiàn)的分解尿素的微生物：芽孢桿菌、小球菌、棒狀桿菌等細(xì)菌。
CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3
脲酶
01. 選擇培養(yǎng)基
2.選擇培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)
如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
瓊脂 20.0g
蒸餾水 定容到1000ml
培養(yǎng)基一
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素 1.0g
瓊脂 15.0g
蒸餾水 定容到1000ml
培養(yǎng)基二
選擇哪種培養(yǎng)基更合適？

可作為完全培養(yǎng)基
（起對(duì)照作用）
01. 選擇培養(yǎng)基
2.選擇培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)
以尿素作為唯一氮源設(shè)計(jì)選擇培養(yǎng)基，可以將分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)。
1. 如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，
培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？
討論
這種培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比，只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其他營(yíng)養(yǎng)成分基本相同。
2. 該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？
3.選擇培養(yǎng)基的類型
類型 條件 分離得到的菌種
改變培養(yǎng)條件 高溫環(huán)境 水生棲熱菌等
高鹽環(huán)境 金黃色葡萄球菌等耐鹽菌
添加某種化學(xué)物質(zhì) 加入青霉素 酵母菌、霉菌等真菌
特殊碳源、氮源 尿素是唯一氮源 能分解尿素的微生物
石油是唯一碳源 能消除石油污染的微生物
營(yíng)養(yǎng)缺陷 不加碳源 自養(yǎng)型微生物
不加氮源 固氮菌
01. 選擇培養(yǎng)基
02. 微生物的選擇培養(yǎng)
選擇培養(yǎng)基平板準(zhǔn)備好，還需要準(zhǔn)備什么？
土壤微生物
細(xì)菌宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長(zhǎng)，絕大部分分布在距地表3~8cm的土壤層。鏟去表層土3cm左右，取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。
02. 微生物的選擇培養(yǎng)
土壤收集后能不能直接倒入平板內(nèi)培養(yǎng)？應(yīng)該怎么操作？
將土樣加入盛有無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻，取菌液加入平板內(nèi)培養(yǎng)。
圖1 完全培養(yǎng)基
圖2 選擇培養(yǎng)基
配制菌液土樣時(shí)取多少？無(wú)菌水加多少？培養(yǎng)時(shí)取多少液體？
土壤細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到特定微生物的純培養(yǎng)物，需要對(duì)土壤進(jìn)行充分稀釋，然后再將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上。
02. 微生物的選擇培養(yǎng)
怎么確定稀釋度是合適的？
將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面的方法。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。
稀釋涂布平板法
A.梯度稀釋菌液 B.涂布平板
主要操作:
02. 微生物的選擇培養(yǎng)
A.梯度稀釋菌液
主要操作:
1×10
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1×102
1×103
1×104
1×105
1×106
1×107
9 mL 無(wú)菌水
90mL無(wú)菌水
10g
②在火焰旁將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL無(wú)菌水的試管中，依次等比稀釋。
①鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。
02. 微生物的選擇培養(yǎng)
②涂布平板
主要過(guò)程:
④將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。
⑥用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。
⑤將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布。
③取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。
微量移液器（槍）：
可精準(zhǔn)吸取少量液體，有不同量程，配合對(duì)應(yīng)規(guī)格的一次性滅菌槍頭使用
02. 微生物的選擇培養(yǎng)
①按照無(wú)菌操作的方法，進(jìn)行規(guī)范操作：取土樣時(shí)用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌；稀釋涂布全過(guò)程在超凈工作臺(tái)、酒精燈火焰附近操作，涂布器要灼燒滅菌等。操作完成后，一定要洗手。
【注意事項(xiàng)】
②將涂布器從酒精中取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼燒。不要將過(guò)熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。
③本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標(biāo)記。
02. 微生物的選擇培養(yǎng)
恒溫培養(yǎng)箱
待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30-37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1-2d。
與平板劃線一樣，完成涂布后，應(yīng)將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)，目的是：
檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。
在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的單菌落。
同樣是分離得到單菌落，平板劃線法和稀釋涂布平板法有何不同？
微生物的分離方法
比較 平板劃線法 稀釋涂布平板法
工具 接種環(huán) 涂布器
原理 通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面連續(xù)劃線操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。（不能計(jì)數(shù)） 將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，稀釋度足夠高時(shí)，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞。（可計(jì)數(shù)）
特點(diǎn) 方法簡(jiǎn)單，但不適宜計(jì)數(shù) 可計(jì)數(shù)，但操作復(fù)雜
平板 示圖
共同點(diǎn) 使培養(yǎng)基上形成由單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體——菌落
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
①原理：
當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。
通過(guò)計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。
菌落數(shù) 活菌數(shù)
不是。樣品的稀釋倍數(shù)將直接影響平板上的菌落數(shù)。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)和計(jì)數(shù)。
是否每個(gè)稀釋倍數(shù)的樣品液都可以進(jìn)行計(jì)數(shù)？
1.間接計(jì)數(shù) — 稀釋涂布平板法
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
①原理：
當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。
通過(guò)計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。
不同微生物在土壤中含量不同，分離不同的微生物宜采用不同的稀釋度計(jì)數(shù)。
測(cè)細(xì)菌數(shù)：一般用104、105、106稀釋液
測(cè)放線菌：一般用103、104、105稀釋液
測(cè)真菌數(shù)：一般用102、103、104稀釋液
②計(jì)數(shù)原則：
一定稀釋范圍：保證獲得菌落數(shù)為30~300、適宜計(jì)數(shù)的平板。
初次實(shí)驗(yàn)可以將稀釋的范圍放寬一點(diǎn)
菌落數(shù) 活菌數(shù)
1.間接計(jì)數(shù) — 稀釋涂布平板法
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
①原理：
當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。
通過(guò)計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。
菌落數(shù) 活菌數(shù)
②計(jì)數(shù)原則：
一定稀釋范圍：保證獲得菌落數(shù)為30~300、適宜計(jì)數(shù)的平板。
在同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值。
以測(cè)定分解尿素的細(xì)菌為例，需要準(zhǔn)備多少個(gè)平板？（注意對(duì)照組的設(shè)置）
1.間接計(jì)數(shù) — 稀釋涂布平板法
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
1.間接計(jì)數(shù) — 稀釋涂布平板法
103
104
105
106
107
不同稀釋倍數(shù)的已接種的選擇培養(yǎng)基，每種稀釋倍數(shù)至少3個(gè)
減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確
不同稀釋倍數(shù)的已接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基各1個(gè)
充分說(shuō)明選擇培養(yǎng)基具有選擇性
103
104
105
106
107
接種
不接種
未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1個(gè)
未接種的選擇培養(yǎng)基1個(gè)
檢驗(yàn)選擇培養(yǎng)基和完全培養(yǎng)基是否污染
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
組 具體組別 具體操作 作用
接種組 實(shí)驗(yàn)組1 選擇培養(yǎng)基 三次重復(fù)排除偶然因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，用以分離并計(jì)數(shù)能分解尿素的細(xì)菌。
實(shí)驗(yàn)組2 選擇培養(yǎng)基
實(shí)驗(yàn)組3 選擇培養(yǎng)基
實(shí)驗(yàn)組4 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)組4與實(shí)驗(yàn)組1 、2、3組對(duì)比用以驗(yàn)證選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用。
不接種組 對(duì)照組1 選擇培養(yǎng)基 對(duì)照組1與實(shí)驗(yàn)組1 、2、3組對(duì)比用以驗(yàn)證選擇培養(yǎng)基中是否含有雜菌。
對(duì)照組2 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 對(duì)照組2與實(shí)驗(yàn)組4 對(duì)比用以驗(yàn)證牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中是否含有雜菌。
結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組1、2、3分離得到尿素分解菌的單菌落； 實(shí)驗(yàn)4組得到多種菌落；對(duì)照組1、2組正常情況下無(wú)菌落。
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
1.間接計(jì)數(shù) — 稀釋涂布平板法
每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。
一般來(lái)說(shuō)，在相同培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。請(qǐng)仔細(xì)觀察所分離到的菌落，最好以表格的形式將不同菌落的特征（如形狀、大小和顏色等）記錄下來(lái)。
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
1.間接計(jì)數(shù) — 稀釋涂布平板法
③結(jié)果計(jì)算：
4號(hào)試管的結(jié)果表明：
每克土壤中的活菌數(shù)約為 個(gè)。
1.1×108
通過(guò)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌的數(shù)目與它的實(shí)際數(shù)目相同嗎？
統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌數(shù)往往比實(shí)際數(shù)目低。因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。
④結(jié)果分析：
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
2.直接計(jì)數(shù)——顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
①原理：
利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。
血細(xì)胞計(jì)數(shù)板常用對(duì)相對(duì)較大的酵母菌細(xì)胞、霉菌孢子等；
細(xì)菌計(jì)數(shù)板可對(duì)細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。
②優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單，快速、直觀
缺點(diǎn)：統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般是菌數(shù)和死菌數(shù)的總和，不能區(qū)分死菌與活菌，計(jì)數(shù)節(jié)結(jié)果比實(shí)際值大；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)細(xì)菌的計(jì)數(shù)。
微生物的計(jì)數(shù)方法
內(nèi)容 直接計(jì)數(shù)法 間接計(jì)數(shù)法
主要用具 顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 涂布器
計(jì)數(shù)依據(jù) 細(xì)菌個(gè)數(shù) 培養(yǎng)基上菌落數(shù)
優(yōu)點(diǎn) 計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單 計(jì)數(shù)的是活菌
缺點(diǎn) 不能區(qū)分死菌與活菌 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌體連在一起時(shí),平板上觀察到的只是一個(gè)菌落
計(jì)算公式 每毫升原液含菌株數(shù)＝每小格平均菌株數(shù)×400×1 0000×稀釋倍數(shù) 每克樣品中的菌株數(shù)：(C ÷ V）× M
C：某稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)；V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù)
結(jié)果 比實(shí)際值偏大 比實(shí)際值偏小
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
實(shí)驗(yàn)流程：
樣品稀釋涂布平板
微生物的培養(yǎng)與觀察
菌落計(jì)數(shù)
土壤取樣
制備培養(yǎng)基
①結(jié)合對(duì)照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。
②你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30～300的平板 在這一稀釋度下，是否至少有2個(gè)平板的菌落數(shù)接近
③你統(tǒng)計(jì)的每克土樣中能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少 與其他同學(xué)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果接近嗎 如果差異很大，可能是什么原因引起的
如果沒(méi)有接種的培養(yǎng)基上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有被雜菌污染。如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些尿素分解菌。
如果得到了兩個(gè)或多個(gè)菌落數(shù)為30～300的平板，說(shuō)明稀釋度合適，操作比較成功，能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。
如果是用同一土樣進(jìn)行的操作，數(shù)據(jù)應(yīng)該比較接近。如果差異很大，就需要從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。
03. 微生物的數(shù)量測(cè)定
04. 土壤中分解尿素的細(xì)菌的鑒定
在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中分離出的微生物都是能分解尿素的嗎？
因?yàn)橛行┪⑸锟梢岳闷渌⑸锏拇x產(chǎn)物進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖。
不一定。
對(duì)分離的菌種進(jìn)行鑒定還需要借助生物化學(xué)的方法。
CO(NH2)2
脲酶
+ H2O
+ CO2
2NH3
原理：脲酶催化尿素分解成氨→培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)→ 酚紅變紅→脲酶陽(yáng)性
操作：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說(shuō)明該細(xì)菌能夠分解尿素。
①液體培養(yǎng)基可以直接看液體的變色情況；
②固體培養(yǎng)基上可以觀察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶，紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說(shuō)明分解能力越強(qiáng)。
微生物的數(shù)量測(cè)定
選擇培養(yǎng)基的作用
微生物選擇培養(yǎng)獲取純培養(yǎng)物的方法-稀釋涂布平板法
微
生
物
的
選
擇
培
養(yǎng)
和
計(jì)
數(shù)
選擇培養(yǎng)基
微生物的選擇培養(yǎng)
科學(xué)實(shí)例
篩選原則
選擇培養(yǎng)基的概念及舉例
稀釋涂布平板法的操作過(guò)程
間接計(jì)數(shù)法 — 稀釋涂布平板法
直接計(jì)數(shù) —計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法
土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)
培養(yǎng)基的制備
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
（1）土壤取樣
（2）樣品的稀釋
（3）稀釋涂布平板法接種
（4）微生物的培養(yǎng)與觀察
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
練習(xí)與應(yīng)用
一、概念檢測(cè)
1. 研究人員用無(wú)機(jī)鹽、瓊脂和石油配制的培養(yǎng)基從被石油污染的土壤中篩選出了一種石油降解菌，判斷下列相關(guān)表述是否正確。
（1）這種培養(yǎng)基是一種選擇培養(yǎng)基。（ ）
（2）利用這種石油降解菌可以降解石油，修復(fù)土壤。（ ）
（3）相對(duì)于未被污染的土壤，從被石油污染的土壤中更容易分離到石油降解菌。（ ）
2. 用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)，原因是（ ）
A. 菌落中的細(xì)菌數(shù)目是固定的
B. 平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌
C. 通過(guò)此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)與活菌的實(shí)際數(shù)目相同
D. 平板上的一個(gè)菌落一般來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌
√
√
√
D
練習(xí)與應(yīng)用
二、拓展應(yīng)用
1.反芻（chú）動(dòng)物，如牛和羊具有特殊的器官一瘤胃。在瘤胃中生活著多種微生物，其中許多微生物能分解尿素。請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)從瘤胃中分離出能夠分解尿素的微生物。
由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會(huì)死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基，還應(yīng)該參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
練習(xí)與應(yīng)用
二、拓展應(yīng)用
2. 地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過(guò)70 億噸，其中40%～ 60%能被土壤中某些微生物分解利用，這是因?yàn)樗鼈兡軌虍a(chǎn)生纖維素酶。對(duì)這些微生物的研究與應(yīng)用，使人們能夠利用秸稈等生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。已知?jiǎng)偣t是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不與水解后的纖維二糖、葡萄糖等發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物；而當(dāng)纖維素被纖維素分解菌分解后，復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以這些菌為中心的透明圈（如下圖所示）。
練習(xí)與應(yīng)用
二、拓展應(yīng)用
(1)現(xiàn)在要從土壤中分離纖維素分解菌，請(qǐng)你給出詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案。
(2)你打算到什么環(huán)境中去尋找纖維素分解菌？為什么？
可以選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土等。
(3)有同學(xué)說(shuō)，可以把濾紙埋在土壤中，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，再?gòu)囊迅癄€的濾紙上篩選纖維素分解菌。請(qǐng)你評(píng)價(jià)這一做法。
可行，這是人工設(shè)置適合纖維素分解菌生存的環(huán)境,腐爛的濾紙上很可能有纖維素分解菌。

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