資源簡(jiǎn)介

（23）基因工程、生物技術(shù)的安全性與倫理問題
——2025高考生物學(xué)一輪復(fù)習(xí)易混易錯(cuò)專項(xiàng)復(fù)習(xí)
易混易錯(cuò)梳理
1.基因工程的易錯(cuò)點(diǎn)提示
（1）標(biāo)記基因（通常選抗性基因）的作用是：用于檢測(cè)重組質(zhì)粒是否被導(dǎo)入受體細(xì)胞（不含抗性）；而選擇性培養(yǎng)基（加抗生素的培養(yǎng)基）的作用是：篩選是否導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞?？股蒯槍?duì)的不是目的基因，而是淘汰不具有抗性的沒有導(dǎo)入目的基因的受體細(xì)胞
（2）基因工程中導(dǎo)入的目的基因通?？紤]整合到核DNA中，形成的生物可看作雜合子（Aa）產(chǎn)生配子時(shí)，可能含有目的基因，后代會(huì)發(fā)生性狀分離
（3）重組質(zhì)粒（即基因表達(dá)載體的構(gòu)建）在細(xì)胞外形成，而不是在細(xì)胞內(nèi)
（4）質(zhì)粒不是細(xì)菌的細(xì)胞器而是某些基因的載體，質(zhì)粒存在于細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的小型環(huán)狀DNA。擬核是大型環(huán)狀DNA。
（5）啟動(dòng)子、終止子是基因的結(jié)構(gòu)，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)目的基因插入兩者之間；而起始密碼、終止密碼在mRNA上
2.對(duì)復(fù)雜背景下的基因工程的綜合應(yīng)用不能把握核心基本操作
基因工程的原理是人工進(jìn)行的一種基因重組過程，由于其屬于前沿生物科技，故有大量科技文獻(xiàn)可以作為背景呈現(xiàn)考題，但考查的仍舊是基礎(chǔ)的操作步驟和基本工具等內(nèi)容，較為復(fù)雜的就是限制酶的選擇和處理結(jié)果等，但學(xué)生常被題干背景迷惑，而無法做出正確判斷和解答。
3.有關(guān)蛋白質(zhì)工程的兩點(diǎn)提醒
（1）改造對(duì)象是基因：任何一種天然蛋白質(zhì)都是由基因編碼的，改造了基因即對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行了改造，而且改造過的蛋白質(zhì)可以遺傳下去。
（2）基因突變的新基因中含有不編碼蛋白質(zhì)的序列，而蛋白質(zhì)工程中的新基因則沒有。
4.理性看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原因
（1）生物技術(shù)和其他科學(xué)技術(shù)一樣具有兩面性，是一把“雙刃劍”，既能推動(dòng)社會(huì)發(fā)展和技術(shù)進(jìn)步，也可帶來災(zāi)難。
（2）社會(huì)的發(fā)展總是和技術(shù)的發(fā)展密切聯(lián)系，從促進(jìn)社會(huì)發(fā)展的角度看，必須不斷發(fā)展生物技術(shù)，造福人類，同時(shí)盡量避免災(zāi)難。
5.治療性克隆和生殖性克隆的比較
比較 治療性克隆 生殖性克隆
不 同 點(diǎn) 概念 利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞或組織（上皮組織、神經(jīng)組織或肌肉組織等）等用于治療性移植的克隆性技術(shù) 利用克隆技術(shù)獲得胚胎，并將胚胎孕育成為人類個(gè)體的克隆性技術(shù)
目的 治療人類疾病 繁殖新個(gè)體
操作水平 細(xì)胞或組織水平 個(gè)體水平
相同點(diǎn) 都屬于無性生殖，產(chǎn)生新細(xì)胞、新組織，遺傳信息相同
6.試管嬰兒與設(shè)計(jì)試管嬰兒的區(qū)別與聯(lián)系
項(xiàng)目 設(shè)計(jì)試管嬰兒 試管嬰兒
區(qū) 別 技術(shù)手段 多了胚胎移植前進(jìn)行遺傳學(xué)診斷這一環(huán)節(jié) 不需進(jìn)行遺傳學(xué)診斷
實(shí)踐應(yīng)用 用于白血病、貧血病等疾病的預(yù)測(cè) 解決不孕不育
聯(lián)系 二者都是體外受精，體外進(jìn)行早期胚胎發(fā)育，再進(jìn)行胚胎移植，從生殖方式上應(yīng)為有性生殖
易混易錯(cuò)通關(guān)
1.某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)）和質(zhì)粒進(jìn)行切割、連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。限制酶的切割位點(diǎn)如圖所示。
下列重組表達(dá)載體構(gòu)建方案合理且效率最高的是（ ）
A.質(zhì)粒和目的基因都用酶3切割，用E. coli DNA連接酶連接
B.質(zhì)粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4 DNA連接酶連接
C.質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4 DNA連接酶連接
D.質(zhì)粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E. coli DNA連接酶連接
2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建（即目的基因與運(yùn)載體結(jié)合）是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其構(gòu)建目的是使目的基因能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。如圖為含有某目的基因的DNA片段、質(zhì)粒體的酶切位點(diǎn)及限制酶識(shí)別切割位點(diǎn)，則據(jù)圖分析，下列敘述正確的是（ ）
A.質(zhì)粒作為基因工程運(yùn)載體，只需具備啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)即可
B.不能用BclⅠ和BglⅡ切割質(zhì)粒和含有目的基因的DNA片段，因?yàn)槎唣ば阅┒讼嗤?br/>C.限制酶切割部位與DNA連接酶作用的部位不完全相同
D.構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，目的基因必須接在啟動(dòng)子和終止子之間，以確保轉(zhuǎn)錄的正常進(jìn)行
3.像BclⅠ（-T↓GATCA-）、BglⅡ（-A↓GATCT-）、MboⅠ（-↓GATC-）這樣，識(shí)別序列不同、，但能產(chǎn)生相同的黏性末端的一類限制酶被稱為同尾酶。如圖表示目的基因及質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)。選用不同的限制酶對(duì)質(zhì)粒和目的基因進(jìn)行切割，并用DNA連接酶進(jìn)行連接。下列分析錯(cuò)誤的是（ ）
選項(xiàng) 切割質(zhì)粒 切割目的基因 結(jié)果分析
A BclI和BglⅡ BclI和BglⅡ 形成的重組質(zhì)粒的堿基排列順序不一定相同
B BclI和BglⅡ MboI 切割后的質(zhì)粒不可自我環(huán)化，切割后的目的基因可以自我環(huán)化
C MboI BclI和BglⅡ 形成的重組質(zhì)粒可被MboI再次切開，但可能無法被BclI和BglⅡ再次切開
D MboI MboI 切割后的質(zhì)粒可以自我環(huán)化，切割后的目的基因也可以自我環(huán)化
A.A B.B C.C D.D
4.通過設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用PCR技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)目的基因的定點(diǎn)誘變。如圖為基因工程中獲取突變基因的過程，其中引物1序列中含有一個(gè)堿基T不能與目的基因片段配對(duì)，但不影響引物與模板鏈的整體配對(duì)，反應(yīng)體系中引物1和引物2的5'端分別設(shè)計(jì)增加限制酶a和限制酶b的識(shí)別位點(diǎn)。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
A.在PCR反應(yīng)體系中還需要加入4種游離的脫氧核苷酸、解旋酶Taq、DNA聚合酶等
B.第2輪PCR，引物1能與圖中②結(jié)合并且形成兩條鏈等長的突變基因
C.引物中設(shè)計(jì)兩種限制酶識(shí)別位點(diǎn)有利于目的基因定向插入載體
D.第3輪PCR結(jié)束后，含突變堿基對(duì)且兩條鏈等長的DNA占1/2
5.下圖表示應(yīng)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)干擾素（一種分泌蛋白）的三條途徑，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A.途徑甲中，過程Ⅱ采用的方法是顯微注射法
B.途徑乙中，過程Ⅱ一般所采用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
C.途徑丙中，過程Ⅱ可用Ca2+處理大腸桿菌，以制備感受態(tài)細(xì)胞
D.三條途徑中，由于使用的目的基因相同，因此表達(dá)出的干擾素的結(jié)構(gòu)也完全相同
6.如圖為利用大腸桿菌重組表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)HPV疫苗的過程。質(zhì)粒中l(wèi)acZ基因可使細(xì)菌利用培養(yǎng)基中的X-gal，從而使菌落呈藍(lán)色，若無該基因，則菌落呈白色。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ）
A.過程①最好選用限制酶BamHⅠ和EcoRⅠ
B.進(jìn)行過程②之前，需要先用Ca2+處理大腸桿菌，使其處于感受態(tài)
C.篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入X-gal和青霉素
D.在選擇培養(yǎng)基上篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌時(shí)應(yīng)挑選藍(lán)色菌落
7.實(shí)驗(yàn)人員將一段外源DNA片段（包含約850個(gè)基因）與絲狀支原體（一種原核生物）的DNA進(jìn)行重組后，植入大腸桿菌，制造出一種“新的生命”。該生物能夠正常生長、繁殖。下列有關(guān)該技術(shù)前應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是（ ）
A.該技術(shù)可以制造某些微生物，用于生產(chǎn)藥品、制造染料、降解有毒物質(zhì)等
B.由于存在生殖隔離，因此人造生命進(jìn)入自然界并不會(huì)破壞生物多樣性
C.人造生命擴(kuò)散到自然界，有可能造成環(huán)境安全性問題
D.此項(xiàng)技術(shù)可能被用來制造生物武器，從而危及人類安全
8.我國政府不贊成、不允許、不支持、不接受任何形式的生殖性克隆人。下列屬于其原因的一組是（ ）
①克隆人只是某些人出于某種目的制造出的“產(chǎn)品”，沒有“父母”，這可能導(dǎo)致他們?cè)谛睦砩鲜艿絺?br/>②生殖性克隆技術(shù)可能帶有一定的致癌風(fēng)險(xiǎn)
③由于技術(shù)問題，可能孕育出有嚴(yán)重生理缺陷的克隆人
④克隆人的家庭地位難以認(rèn)定，可能使以血緣為紐帶的父子、兄弟和姐妹等人倫關(guān)系消亡
⑤生殖性克隆人沖擊了現(xiàn)有的一些有關(guān)婚姻、家庭和兩性關(guān)系的倫理道德觀念
⑥克隆人作為一項(xiàng)科學(xué)研究屬于中性的，但可能帶來嚴(yán)重的基因歧視
⑦生殖性克隆人是對(duì)人類尊嚴(yán)的侵犯
⑧生殖性克隆人破壞了人類基因多樣性的天然屬性，不利于人類的生存和進(jìn)化
A.①②③④⑤⑥ B.①③④⑤⑦⑧ C.①②③⑤⑦⑧ D.①④⑤⑥⑦⑧
9.轉(zhuǎn)基因作物的推廣種植，大幅提高了糧食產(chǎn)量，取得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益：碩果累累的轉(zhuǎn)基因作物相關(guān)研究在帶給人們喜悅的同時(shí)，也促使人們關(guān)注轉(zhuǎn)基因作物的安全性問題。下列有關(guān)轉(zhuǎn)基因作物安全性的敘述，錯(cuò)誤的是（ ）
A.抗性基因可能會(huì)隨花粉傳播到田間近緣野生植物體內(nèi)，造成基因污染
B.轉(zhuǎn)入抗性基因的植物可能成為“入侵物種”，影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性
C.大面積種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，有可能導(dǎo)致棉鈴蟲群體中相關(guān)抗性基因頻率增加
D.只要目的基因來自自然界，培育出的轉(zhuǎn)基因植物就不會(huì)有安全性問題
10.科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對(duì)寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四種限制性內(nèi)切核酸酶切割位點(diǎn)，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為氨芐青霉素抗性基因），其中①~④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，甲、乙表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖作答：
（1）在構(gòu)建重組DNA時(shí)，可用一種或多種限制性內(nèi)切核酸酶進(jìn)行切割，為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該選用限制性內(nèi)切核酸酶_____分別對(duì)魚抗凍蛋白基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為_____種和_____種。
（2）基因工程中的核心步驟是_____（填序號(hào)），該步驟的目的是_____。為了使目的基因正常表達(dá)，其上游必須有啟動(dòng)子，它是_____識(shí)別和結(jié)合的部位。若限制酶切出了平末端，要選擇_____進(jìn)行連接（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
（3）圖中將魚抗凍蛋白基因?qū)敕鸭?xì)胞的方法稱為_____。它是利用載體Ti質(zhì)粒中含有_____，可以將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上。
（4）檢測(cè)番茄植株細(xì)胞中魚抗凍蛋白基因是否成功表達(dá)，從分子水平上常采用的方法是_____。
答案以及解析
1.答案：C
解析：只用一種限制酶切割質(zhì)粒和目的基因，會(huì)使質(zhì)粒和目的基因發(fā)生自身環(huán)化或者使目的基因在質(zhì)粒中反向連接，A錯(cuò)誤；用酶1切割目的基因，產(chǎn)生的是黏性末端，用酶3切割質(zhì)粒，產(chǎn)生的是平末端，無法連接，B錯(cuò)誤；質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割后，可使用T4 DNA連接酶連接，使目的基因定向插到質(zhì)粒中，C正確；酶2和酶4切割后產(chǎn)生的黏性末端相同，易導(dǎo)致目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化或者使目的基因在質(zhì)粒中反向連接，并且用酶4切割會(huì)破壞標(biāo)記基因，D錯(cuò)誤。
2.答案：D
解析：質(zhì)粒作為基因工程的運(yùn)載體需要有一個(gè)或多個(gè)限制酶的識(shí)別切割位點(diǎn)，A錯(cuò)誤；由題圖可知，限制酶BclⅠ和BglⅡ是同尾酶，同尾酶是指切割不同的DNA片段但產(chǎn)生相同的黏性末端的一類限制酶，二者切割后產(chǎn)生的黏性末端相同，所以可以用BclⅠ和BglⅡ切割質(zhì)粒和含有目的基因的DNA片段，B錯(cuò)誤；限制酶切割部位與DNA連接酶作用的部位完全相同，都是磷酸二酯鍵，C錯(cuò)誤；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，目的基因必須接在啟動(dòng)子和終止子之間，以確保轉(zhuǎn)錄的正常進(jìn)行，D正確。
3.答案：B
解析：A、切割質(zhì)粒和切割目的基因用均用BclⅠ和BglⅡ，由于兩種酶切割后產(chǎn)生的黏性末端相同，形成的重組質(zhì)粒時(shí)目的基因可能反向連接，形成的堿基排列順序不一定相同，A正確；B、切割質(zhì)粒用BclⅠ和BglⅡ，切割后產(chǎn)生的黏性末端相同，切割后的質(zhì)?？赡茏晕噎h(huán)化；切割目的基因用Mbol，切割后產(chǎn)生平末端，切割后的目的基因可以自我環(huán)化，B錯(cuò)誤；C、由題意可知，切割質(zhì)粒用Mbol，產(chǎn)生黏性末端，切割目的基因用BclⅠ和Bgl Ⅱ，也會(huì)產(chǎn)生黏性末端，形成的重組質(zhì)粒中原來的BclⅠ和Bgl Ⅱ的切割位點(diǎn)的序列發(fā)生改變，不能再被這兩種酶切割，但不影響MboⅠ的作用，C正確；D、切割質(zhì)粒用MboⅠ，切割目的基因用MboⅠ，產(chǎn)生的均為平末端，切割后的質(zhì)?？勺晕噎h(huán)化，切割后的目的基因也可以自我環(huán)化，D正確。故選：B。
4.答案：C
解析：在PCR反應(yīng)體系中還需要加入4種游離的脫氧核苷酸、TaqDNA聚合酶等，不需要加入解旋酶，A錯(cuò)誤；由圖可知，②是第二輪PCR形成的，在第3輪PCR，引物1能與圖中②結(jié)合并且形成兩條鏈等長的突變基因，B錯(cuò)誤；引物中設(shè)計(jì)兩種限制酶識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)限制酶切割后可以產(chǎn)生兩種不同的黏性末端，幫助目的基因定向定點(diǎn)插入載體，避免發(fā)生自身環(huán)化和反向連接，C正確；在第3輪PCR結(jié)束后，共產(chǎn)生8個(gè)DNA分子，含突變堿基對(duì)且兩條鏈等長的DNA有2個(gè)，所以占比為1/4，D錯(cuò)誤。
5.答案：D
解析：途徑甲中，過程Ⅱ是將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞，采用的方法是顯微注射法，A正確；途徑乙中，過程Ⅱ?qū)⒛康幕驅(qū)胫参锛?xì)胞時(shí)，一般所采用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，B正確；途徑丙中，過程Ⅱ?qū)⒛康幕驅(qū)氪竽c桿菌時(shí)，常用Ca2+處理大腸桿菌，使其成為能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞，C正確；干擾素是一種分泌蛋白，干擾素基因表達(dá)后需要在真核細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體中進(jìn)行加工后才能形成具有特定結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，大腸桿菌沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，表達(dá)出的干擾素的結(jié)構(gòu)與前兩條途徑表達(dá)出的干擾素的結(jié)構(gòu)應(yīng)該不同，D錯(cuò)誤。
6.答案：D
解析：過程①是構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程，用限制酶進(jìn)行切割時(shí)，要保證目的基因和標(biāo)記基因的完整性，為防止目的基因和載體的自身環(huán)化、目的基因在載體中反向連接，一般選用兩種酶進(jìn)行酶切，故過程最好選用限制酶BamHⅠ和EcoRⅠ，A正確；過程②是將目的基因?qū)氪竽c桿菌，通常先用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，B正確；篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入青霉素和X-gal，加入青霉素可以篩選出轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒、正常質(zhì)粒的大腸桿菌，加入X-gal可以篩選出轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌，C正確；據(jù)題意，質(zhì)粒中l(wèi)acZ基因可使細(xì)菌利用培養(yǎng)基中的X-gal，使菌落呈藍(lán)色，若無該基因，菌落呈白色，又知重組質(zhì)粒中l(wèi)acZ基因被破壞，故在選擇培養(yǎng)基上篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌時(shí)，應(yīng)挑選白色菌落，D錯(cuò)誤。
7.答案：B
解析：通過導(dǎo)入不同的目的基因，可用于生產(chǎn)藥品、制造染料、降解有毒物質(zhì)等，A正確；人造生命是一個(gè)新的物種，由于其沒有天敵，進(jìn)入自然界后，可能會(huì)破壞生物的多樣性，B錯(cuò)誤；人造生命擴(kuò)散到自然界，競(jìng)爭(zhēng)能力強(qiáng)，因此可能成為“入侵的外來物種”，有可能造成環(huán)境安全性問題，C正確；利用基因工程技術(shù)，在一些不致病的微生物體內(nèi)插入致病基因，會(huì)培育出新的致病微生物，這些微生物可用于制成生物武器，D正確。
8.答案：B
解析：生殖性克隆人不會(huì)帶有致癌風(fēng)險(xiǎn)，②錯(cuò)誤；生殖性克隆人不涉及轉(zhuǎn)基因技術(shù)等，不存在基因歧視，⑥錯(cuò)誤，B正確。
9.答案：D
解析：抗性基因可能會(huì)隨花粉傳播到田間近緣野生植物體內(nèi)，造成基因污染，A正確；轉(zhuǎn)基因生物具有的某些特殊性質(zhì)，使它們?cè)诋?dāng)?shù)氐母?jìng)爭(zhēng)能力較強(qiáng)，可能成為“入侵物種”，威脅生態(tài)系統(tǒng)中其他生物的生存，從而影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，B正確；大面積種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，有可能導(dǎo)致棉鈴蟲群體中相關(guān)抗性基因頻率增加，C正確；即使目的基因來自自然界，導(dǎo)入植物細(xì)胞中可能影響植物原有基因的表達(dá)，培育出的轉(zhuǎn)基因植物仍然可能會(huì)有安全性問題，D錯(cuò)誤。
10.答案：（1）PstⅠ、SmaⅠ；4；2
（2）①；使目的基因穩(wěn)定存在、成功表達(dá)、并能遺傳給下一代；RNA聚合酶；T4DNA連接酶
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；T-DNA
（4）抗原—抗體雜交
解析：（1）據(jù)圖分析，魚的抗凍蛋白基因（目的基因）上具有三種限制酶切割位點(diǎn)，PstⅠ的切割位點(diǎn)存在于目的基因的兩側(cè)，SmaⅠ的切割位點(diǎn)存在于目的基因的左側(cè)，而AluⅠ的切割位點(diǎn)存在于目的基因的中央，因此不宜選用AluⅠ；質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四種限制酶切割位點(diǎn)，因此應(yīng)該選擇PstⅠ、SmaⅠ分別切割目的基因和質(zhì)粒，切割后目的基因所在的DNA產(chǎn)生4種DNA片段、質(zhì)粒產(chǎn)生2種DNA片段。
（2）圖中①～④分別表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、脫分化、再分化。基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，即圖中的①步驟，目的是使目的基因穩(wěn)定存在、成功表達(dá)、并能遺傳給下一代。基因表達(dá)載體中的啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位；T4DNA連接酶可以連接平末端。
（3）將目的基因?qū)敕鸭?xì)胞等植物細(xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，利用載體Ti質(zhì)粒中含有T—DNA，可以將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上。
（4）番茄植株細(xì)胞中魚抗凍蛋白基因表達(dá)的產(chǎn)物是抗凍蛋白，可以利用抗原一抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

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