資源簡介

2.2.2動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體學(xué)案
【預(yù)習(xí)新知】
（一）動物細(xì)胞融合技術(shù)
1．定義：使 個(gè)或 個(gè)動物細(xì)胞結(jié)合形成 個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。
2．結(jié)果：融合后形成的雜交細(xì)胞具有原來 個(gè)或 個(gè)細(xì)胞的遺傳信息。
3．原理： 。
4．誘導(dǎo)融合常用的方法： 、 、 。
(1) 法是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結(jié)構(gòu)。
(2) 不滅活的病毒會 細(xì)胞，因而不能用于誘導(dǎo)細(xì)胞融合。
(3) 與植物原生質(zhì)體融合方法對比，誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的特有方法是 。
5．特點(diǎn)：突破了 的局限，使 成為可能。
6．動物細(xì)胞融合技術(shù)涉及的變異類型是 。
7．應(yīng)用
(1) 間、屬間、科間，甚至動物與植物之間的細(xì)胞融合都已獲得了成功。
(2)動物細(xì)胞融合技術(shù)已成為研究細(xì)胞 、細(xì)胞 、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。
(3)利用動物細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來的 技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。
（二）單克隆抗體及其應(yīng)用
1．傳統(tǒng)抗體
(1)制備方法：向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種________，使之產(chǎn)生相應(yīng)抗體，從動物________中分離出所需抗體。
(2)缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、________、________。
2．單克隆抗體制備原理
(1)B淋巴細(xì)胞特點(diǎn)：一種B淋巴細(xì)胞只分泌____________。
(2)骨髓瘤細(xì)胞特點(diǎn)：能在體外大量________。
(3)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞，既能________又能產(chǎn)生大量________。
3．制備過程
4．單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)
能準(zhǔn)確地識別______________，與特定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，并且可以________。
5．單克隆抗體的應(yīng)用
(1)作為________，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。
(2)用于________和________。
【鞏固訓(xùn)練】
1.利用細(xì)胞融合技術(shù)可以制備單克隆抗體，下列關(guān)于該過程的敘述正確的是( )
A.雜交瘤細(xì)胞能無限增殖，無需進(jìn)行傳代培養(yǎng)
B.利用抗原抗體反應(yīng)即可篩選出雜交瘤細(xì)胞
C.外界抗原多次刺激動物可以提高動物體內(nèi)雜交瘤細(xì)胞的數(shù)量
D.體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞需提供CO2以維持培養(yǎng)液的pH
2.科研人員以甲型H1N1流感病毒的HA蛋白為抗原對小鼠進(jìn)行免疫，取其脾臟的淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，獲得產(chǎn)生抗HA蛋白抗體的雜交瘤細(xì)胞。下列敘述錯誤的是( )
A.淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞1：1混合后，發(fā)生融合的細(xì)胞不全是雜交瘤細(xì)胞
B.選擇培養(yǎng)基上獲得的雜交瘤細(xì)胞可能產(chǎn)生抗HA蛋白抗體
C.可在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防止雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染
D.抗HA蛋白抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高，可廣泛用于各種流感病毒的檢測
3.為解決雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)過程中出現(xiàn)來自B淋巴細(xì)胞的染色體丟失問題，研究者將抗原刺激后的B淋巴細(xì)胞用EBV（一種病毒顆粒）感染，獲得“染色體核型穩(wěn)定”的EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞。EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞能夠在HAT培養(yǎng)基中存活，但對烏本苷（Oua）敏感。骨髓瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基中不能存活，但對Oua不敏感。下圖表示操作過程，下列有關(guān)分析錯誤的是( )
A.B淋巴細(xì)胞來源于抗原刺激后動物的脾臟
B.HAT培養(yǎng)基可去除未與EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞融合的骨髓瘤細(xì)胞和自身融合的骨髓瘤細(xì)胞
C.雜交瘤細(xì)胞染色體丟失可能會導(dǎo)致抗體的產(chǎn)生能力下降
D.雜交瘤細(xì)胞具有持續(xù)產(chǎn)生抗EBV抗體的能力
4.用單克隆抗體治療傳染性疾病獲評為2021年度大科學(xué)突破之一。下圖表示單克隆抗體的制備過程。下列有關(guān)說法錯誤的是( )
A.過程①的目的是使小鼠產(chǎn)生能分泌特定抗體的B淋巴細(xì)胞
B.過程②細(xì)胞融合后,培養(yǎng)體系中只有兩兩融合的雜種細(xì)胞
C.過程③用多孔板培養(yǎng)時(shí),每一個(gè)孔盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞
D.過程①能篩選得到分泌特定抗體的雜交瘤細(xì)胞
5.抗體—藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細(xì)胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。下列關(guān)于單克隆抗體制備過程的敘述，錯誤的是( )
A.用普通培養(yǎng)基也可對融合細(xì)胞進(jìn)行初步篩選
B.用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出的雜交瘤細(xì)胞有多種
C.用多孔板進(jìn)行克隆化培養(yǎng)過程，不存在篩選作用
D.需要利用動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)
6.人參皂苷是人參的主要活性成分。科研人員分別誘導(dǎo)人參根與胡蘿卜根產(chǎn)生愈傷組織并進(jìn)行細(xì)胞融合，以提高人參皂苷的產(chǎn)率。下列敘述錯誤的是( )
A.細(xì)胞融合前應(yīng)去除細(xì)胞壁
B.高Ca2+—高pH溶液可促進(jìn)細(xì)胞融合
C.融合的細(xì)胞即為雜交細(xì)胞
D.雜交細(xì)胞可能具有生長快速的優(yōu)勢
7.單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用作診斷試劑。下圖是醫(yī)學(xué)上常用的定量檢測抗原含量的“雙抗體夾心法”示意圖。將過量的固相抗體固定在某種固相載體表面上，加入抗原，再加入酶標(biāo)抗體，洗脫未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，最后加入無色底物，該底物在酶標(biāo)抗體上酶的催化作用下形成產(chǎn)物，通過產(chǎn)物（有色）量反映抗原量。下列說法正確的是( )
A.固相抗體和酶標(biāo)抗體均能與抗原結(jié)合，這是由于兩者結(jié)構(gòu)相同
B.實(shí)驗(yàn)過程所加入的抗原、酶標(biāo)抗體、底物均應(yīng)過量
C.反應(yīng)體系最終呈現(xiàn)的顏色深淺與抗原量呈負(fù)相關(guān)
D.加入酶標(biāo)抗體的目的是通過測定酶促反應(yīng)產(chǎn)物量來判斷待測抗原量
8.雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。下列有關(guān)敘述中，不正確的是( )
A.可用滅活病毒誘導(dǎo)法促進(jìn)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的融合
B.雜交瘤細(xì)胞具有既能大量增殖、又能產(chǎn)生抗體的特點(diǎn)
C.在雜交瘤細(xì)胞的篩選過程中，需要用到抗原—抗體雜交技術(shù)
D.用單克隆抗體診斷腫瘤等疾病時(shí)，只能用熒光標(biāo)記法
9.抗體由恒定區(qū)段和可變區(qū)段兩部分構(gòu)成，其中可變區(qū)段決定抗體的特異性。利用小鼠制備的鼠源性單克隆抗體需經(jīng)人源化改造才可應(yīng)用于臨床免疫治療。下列說法錯誤的是( )
A.制備鼠源性單克隆抗體需將小鼠B細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合
B.鼠源性單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的天然抗體
C.人源化改造降低了人對鼠源性單克隆抗體的免疫排斥反應(yīng)
D.人源化改造即將鼠源性單克隆抗體的可變區(qū)段替換成人的相應(yīng)區(qū)段
10.研究表明，髓系細(xì)胞觸發(fā)受體2（TREM2）是一種免疫抑制受體，在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮重要作用。因此，TREM2抗體藥物有望提高腫瘤免疫療法的療效。下圖為TREM2單克隆抗體的制備流程圖，下列說法正確的是( )
A.步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射TREM2蛋白和分泌TREM2抗體的雜交瘤細(xì)胞
B.經(jīng)步驟②誘導(dǎo)后融合的細(xì)胞既能分泌TREM2抗體又可無限增殖
C.步驟③和④的培養(yǎng)孔中均含有TREM2蛋白，依據(jù)的原理都是抗原一抗體雜交
D.步驟⑥和植物組織培養(yǎng)均需使用二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)
參考答案
1.答案：D
2.答案：D
解析：抗HA蛋白抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高,可用于甲型H1N1流感病毒的檢測,而不是各種流感病毒的檢測,D錯誤。
3.答案：D
解析：D、由于雜交瘤細(xì)胞在傳代培養(yǎng)中出現(xiàn)來自B淋巴細(xì)胞染色體丟失的問題,所以有的雜交瘤細(xì)胞不一定具有持續(xù)產(chǎn)生抗EBV抗體的能力,D錯誤。
故選D。
4.答案：B
解析：過程①對小鼠注射特定抗原,刺激其體內(nèi)發(fā)生特異性免疫,產(chǎn)生能分泌相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞,A正確;過程②是將已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合,由于融合是隨機(jī)的,培養(yǎng)體系中有未融合的細(xì)胞、融合的具有同種核的細(xì)胞,以及B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的雜種細(xì)胞,B錯誤;過程③為克隆化培養(yǎng),每個(gè)孔盡量只接種一個(gè)雜交瘤細(xì)胞,是為了保證繁殖得到的細(xì)胞群體來自同一雜交瘤細(xì)胞,產(chǎn)生的是同一種抗體,以便后續(xù)抗體檢測,C正確;過程④為抗體檢測,加入抗原后,能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞所在的孔會發(fā)生陽性反應(yīng),篩選得到所需雜交瘤細(xì)胞,D正確。
5.答案：A
解析：A、用選擇培養(yǎng)基對融合細(xì)胞進(jìn)行初步篩選，A錯誤;
B、用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出的雜交瘤細(xì)胞有多種，還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，才能得到所需雜交瘤細(xì)胞，B正確;
C、用多孔板進(jìn)行克隆化培養(yǎng)過程，不存在篩選作用，抗體檢測過程涉及篩選作用，C正確;
D、單克隆抗體制備過程中需要利用動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)，D正確。
6.答案：C
解析：融合的細(xì)胞中有人參根﹣人參根細(xì)胞、人參根﹣胡蘿卜根細(xì)胞、胡蘿卜根﹣胡蘿卜根細(xì)胞，只有人參根﹣胡蘿卜根細(xì)胞才是雜交細(xì)胞，C錯誤。
7.答案：D
解析：A、據(jù)圖可知，固相抗體和酶標(biāo)抗體分別與抗原的不同部位結(jié)合，說明兩者的結(jié)構(gòu)不同，A錯誤；
B、該方法通過產(chǎn)物（有色）量反映抗原量，所以抗原不能過量，B錯誤；
C、抗原越多，留下的酶標(biāo)抗體越多，顏色越深，因此反應(yīng)體系最終呈現(xiàn)的顏色深淺與抗原量呈正相關(guān)，C錯誤；
D、加入酶標(biāo)抗體的目的是酶催化檢測底物反應(yīng)，可通過測定酶反應(yīng)產(chǎn)物量來判斷待測抗原量，D正確。
故選D。
8.答案：D
解析：A、可用滅活病毒誘導(dǎo)法促進(jìn)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的融合，A正確；
B、雜交瘤細(xì)胞具有既能大量增殖、又能產(chǎn)生抗體的特點(diǎn)，B正確；
C、在雜交瘤細(xì)胞的篩選過程中，需要經(jīng)過多次篩選，其中需要用到抗原—抗體雜交技術(shù)，C正確；
D、用單克隆抗體診斷腫瘤等疾病時(shí)，可以使用熒光標(biāo)記法或同位素標(biāo)記法，D錯誤。
故選D。
9.答案：D
解析：A、制備鼠源性單克隆抗體需將小鼠B細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，并經(jīng)篩選獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，A正確;
B、鼠源性單克隆抗體是由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的，沒有經(jīng)過改造的天然抗體，B正確;
CD、不同生物體的組織相容性抗原不同，若將鼠源性單克隆抗體直接用于人，會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，由于抗體的可變區(qū)段決定抗體的特異性，即為識別抗原的部位，因此可將鼠源性單克隆抗體的恒定區(qū)段替換成人的相應(yīng)區(qū)段，減少人對鼠源性單克隆抗體的免疫排斥反應(yīng)，C確，D錯誤。
10.答案：A
解析：A、步驟①向小鼠注射TREM2蛋白，讓小鼠發(fā)生免疫反應(yīng)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞；步驟⑤向小鼠腹腔注射雜交瘤細(xì)胞，目的是獲得單克隆抗體，A正確；
B、經(jīng)步驟②誘導(dǎo)后融合的細(xì)胞只有雜交瘤細(xì)胞才能既能分泌TREM2抗體又可無限增殖，B錯誤；
C、步驟三是特定培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞，步驟4是抗原抗體雜交，C錯誤；
D、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中二氧化碳用于調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH值，而植物組織培養(yǎng)的過程中不需要二氧化碳培養(yǎng)箱，D錯誤。
故選A。

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