資源簡介

(共100張PPT)
動物細胞工程
第59課時
1.闡明動物細胞培養(yǎng)的條件和過程。
2.闡明動物細胞核移植的原理和過程。
3.闡明動物細胞融合的概念。
4.概述細胞融合技術是單克隆抗體制備的重要技術。
5.簡述干細胞在生物醫(yī)學工程中有廣泛的應用價值。
課標要求
考情分析
1.動物細胞培養(yǎng)技術 2022·福建·T3　2022·江蘇·T14　2022·湖北·T6
2.動物細胞融合和單克隆抗體的制備 2023·北京·T12　2023·湖北·T22　2022·山東·T15　2022·福建·T13
2021·山東·T15　2021·江蘇·T11　2020·全國Ⅰ·T38
3.動物細胞核移植技術 2023·天津·T7　2021·遼寧·T13　2020·天津·T1
內(nèi)容索引
考點一　　動物細胞培養(yǎng)
考點二　　動物細胞融合技術與單克隆抗體
課時精練
考點三　　動物體細胞核移植技術和克隆動物
考點一
動物細胞培養(yǎng)
1.動物細胞培養(yǎng)的概念
從動物體中取出相關的組織，將它分散成 ，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細胞 的技術。
單個細胞
生長和增殖
2.動物細胞培養(yǎng)的條件
血清
培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具
7.2～7.4
維持培養(yǎng)液的pH
3.動物細胞培養(yǎng)的過程
胰蛋白
膠原蛋白
單個細胞
細胞懸液
原代
懸浮
貼壁
傳代培養(yǎng)
分裂受阻或停止
(1)細胞貼壁：體外培養(yǎng)的大多數(shù)動物細胞往往 在培養(yǎng)瓶的瓶壁上。
(2)接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面 時，細胞通常會停止 。
(3)原代培養(yǎng)： 之前的細胞培養(yǎng)，即動物組織經(jīng)處理后的 。
(4)傳代培養(yǎng)： 后的細胞培養(yǎng)。
貼附
相互接觸
分裂增殖
分瓶
初次培養(yǎng)
分瓶
4.干細胞培養(yǎng)及其應用
種類 胚胎干細胞 成體干細胞 誘導多能干細胞
來源 __________ 骨髓、臍帶血和外周血 體細胞(如成纖維細胞等)
特點 能分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細胞，并進一步形成機體的組織和器官甚至_____ 分化成__________ _________ 能誘導分化成類似___________的細胞
早期胚胎
特定的細
胞或組織
胚胎干細胞
個體
種類 胚胎干細胞 成體干細胞 誘導多能干細胞
應用 分化成心肌細胞、神經(jīng)元和造血干細胞等 造血干細胞用于治療白血病等；神經(jīng)干細胞用于治療帕金森病、阿爾茨海默病等 治療小鼠的鐮狀細胞貧血、阿爾茨海默病、心血管疾病等
(1)在進行細胞培養(yǎng)時，通常采用培養(yǎng)皿或打開培養(yǎng)瓶蓋的方式以獲取新陳代謝所必需的O2(　　)
提示　動物細胞培養(yǎng)時通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶。
×
(2)將動物細胞置于含有95%O2和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)
(　　)
提示　將動物細胞置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
×
(3)動物細胞在培養(yǎng)過程中都具有細胞貼壁的現(xiàn)象(　　)
提示　體外培養(yǎng)的動物細胞可以分為兩大類：一類細胞能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖，不具有細胞貼壁的現(xiàn)象；另一類則需要貼附于某些基質表面才能生長增殖，大多數(shù)細胞屬于這種類型。
×
(4)培養(yǎng)動物細胞的第一代(即第一次細胞增殖)被稱為原代培養(yǎng)(　　)
提示　人們通常將分瓶之前的細胞培養(yǎng)，即動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)，原代培養(yǎng)時細胞增殖不止一代。
×
(5)干細胞都能分化成多種類型的細胞(　　)
×
提示　胚胎干細胞能分化產(chǎn)生多種類型的組織或細胞，成體干細胞一般只能分化成特定的細胞或組織。
(6)胚胎干細胞是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多、應用也最為成熟的一類成體干細胞
(　　)
×
提示　造血干細胞是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多、應用也最為成熟的一類成體干細胞。
為研究長春新堿(VCR)對肝癌細胞凋亡的影響，科研人員進行了相關研究。
①將等量的小鼠肝癌Hepa 1－6細胞懸液，分別接種于若干個含有等量培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中；
②將培養(yǎng)瓶放于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，靜置、去除上清液；
③分別加入等量但含不同濃度VCR的培養(yǎng)液，置于37 ℃、5%的CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；
④分別在24 h、36 h、48 h時吸取培養(yǎng)液，觀察結果，得到不同濃度VCR作用于肝癌細胞不同時間的抑制率(%)如表所示。
請回答下列問題：
(1)步驟③中需要設置對照組，對照組的處理方法為_______________________
_____________________。步驟③中每個實驗組設置5個培養(yǎng)瓶同時進行培養(yǎng)，計數(shù)后統(tǒng)計平均值，目的是什么？
液(或只加等量培養(yǎng)液)
加入等量不含VCR的培養(yǎng)
提示　目的是減小誤差，使實驗結果更準確。
濃度 24 h 36 h 48 h
0.5 mg/mL 12.5 17.2 26
1.0 mg/mL 20.5 31 42
2.0 mg/mL 31.5 38.8 47
(2)根據(jù)表格中的結果可以得出的結論是什么？
提示　VCR對肝癌細胞的抑制率與VCR的濃度和作用時間呈正相關。
濃度 24 h 36 h 48 h
0.5 mg/mL 12.5 17.2 26
1.0 mg/mL 20.5 31 42
2.0 mg/mL 31.5 38.8 47
1
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考向一　動物細胞培養(yǎng)
1.航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細胞跳動的視頻。下列相關敘述正確的是
A.培養(yǎng)心肌細胞的器具和試劑都要先進行高壓蒸汽滅菌
B.培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳
C.心肌細胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖
D.心肌細胞在神經(jīng)細胞發(fā)出的神經(jīng)沖動的支配下跳動
√
培養(yǎng)心肌細胞的器具要先進行高壓蒸汽滅菌，但是試劑并不都需要高壓蒸汽滅菌，如動物血清不能進行高壓蒸汽滅菌，否則會使其中的成分失活，A錯誤；
心肌細胞高度分化，不能進行有絲分裂，C錯誤。
1
2
2.(2022·湖北，6)某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能是
A.實驗材料取自小鼠胚胎的腦組織
B.為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封
C.血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基
D.所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性
√
1
2
小鼠胚胎腦組織中含有豐富的原代神經(jīng)元，細胞增殖能力強，不會導致細胞生長緩慢，A符合題意；
培養(yǎng)瓶瓶口密封會使培養(yǎng)液中缺氧，影響細胞的有氧呼吸，造成供能不足，可能導致細胞生長緩慢，B不符合題意；
血清經(jīng)過高溫處理后，其中活性成分變性，失去原有功能，細胞的生存環(huán)境嚴重惡化，可能導致細胞生長緩慢，C不符合題意；
小鼠的內(nèi)環(huán)境為弱堿性，若所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性，會導致細胞的生存環(huán)境惡劣，可能導致細胞生長緩慢，D不符合題意。
1
2
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動物細胞融合技術與單克
隆抗體
考點二
1.動物細胞融合技術
PEG融合法、電融合法和
滅活病毒誘導法等
細胞膜的流動性
2.單克隆抗體的制備
(1)傳統(tǒng)抗體的獲得
①方法
②缺點：產(chǎn)量低、 低、 差。
抗體
血清
純度
特異性
(2)單克隆抗體的制備及優(yōu)點
①制備過程
②單克隆抗體的優(yōu)點
a.能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生 結合(特異性強、靈敏度高)。
b.可以 制備。
B淋巴細胞
選擇
雜交瘤細胞
特異性
大量
(3)單克隆抗體的應用
①被廣泛用作 試劑，在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要的作用。
②運載 ，形成抗體—藥物偶聯(lián)物，實現(xiàn)對腫瘤細胞的 殺傷。
③用于 。
診斷
藥物
選擇性
治療疾病
(1)動物細胞融合過程中既有細胞膜的融合也有核的融合(　　)
(2)動物細胞融合的結果是形成單核的雜交細胞，植物體細胞雜交的結果是得到雜種植株(　　)
(3)動物體細胞融合后的雜交細胞仍然是二倍體細胞(　　)
√
提示　兩個二倍體動物細胞融合形成的雜交細胞具有四個染色體組，是四倍體細胞。
√
×
(4)將抗原注入小鼠體內(nèi)，是為了獲得能產(chǎn)生相應抗體的B淋巴細胞(　　)
(5)將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行誘導融合，培養(yǎng)液中融合后的細胞即雜交瘤細胞(　　)
提示　將骨髓瘤細胞和B淋巴細胞混合，經(jīng)誘導后融合的細胞不都是雜交瘤細胞，還有B細胞自身融合的細胞、骨髓瘤細胞自身融合的細胞等，需要進行篩選。
√
×
(6)單克隆抗體診斷試劑提高了診斷的準確性、靈敏性(　　)
√
長春新堿(VCR)能夠干擾腫瘤細胞的有絲分裂，也會影響正常細胞的增殖和分裂，導致藥物副作用的發(fā)生。H18雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗人肝癌單克隆抗體HAb18對于人體肝癌的診斷和靶向治療具有重要的意義。回答下列問題：
(1)抗人肝癌單克隆抗體HAb18的制備過程中，需要向小鼠體內(nèi)注射肝癌細胞懸液，其目的是什么？
提示　刺激機體發(fā)生免疫應答，從而得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞。
(2)單克隆抗體被廣泛用作診斷試劑的原因是什么？
提示　單克隆抗體能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結合，并且可以大量制備。
(3)資料：①細胞合成DNA包括D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。
②免疫的B淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但它不能分裂增殖，其本身也不能在體外長期存活。
③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，但它能不斷分裂增殖。如果它的D途徑被阻斷的話，它會因不能合成DNA而死亡。
抗人肝癌單克隆抗體HAb18的制備過程中，需要兩次篩選，請根據(jù)上述資料提出第1次篩選的目的和具體方法。
提示　第1次篩選的目的是篩選出雜交瘤細胞；第1次篩選的具體方法是利用加入氨基蝶呤的選擇培養(yǎng)基篩選。
(4)將VCR與抗人肝癌單克隆抗體HAb18通過接頭連接形成抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)，可實現(xiàn)對肝癌細胞的特異性殺傷，ADC的作用機制如圖。據(jù)圖分析，ADC的抗體和藥物(VCR)各具有什么作用？
提示　ADC的抗體主要發(fā)揮靶向運輸作用，攜帶 VCR 與肝癌細胞特異性結合；藥物(VCR)發(fā)揮治療效應，通過抑制微管蛋白聚合妨礙紡錘體的形成，從而阻斷肝癌細胞分裂，誘導肝癌細胞凋亡。
考向二　動物細胞融合技術與單克隆抗體
3.(2021·山東，15)一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內(nèi)，可利用該小鼠的免疫細胞制備抗p72的單抗，也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗。下列說法正確的是
A.注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大
B.單抗制備過程中通常將分離出的漿細胞與骨髓瘤細胞融合
C.利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗
D.p72部分結構改變后會出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的情況
3
4
√
單抗的制作需要篩選，而多抗不需要篩選，抗原純度越高，產(chǎn)生的多抗純度越高，因此抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響小，A錯誤；
單抗制備過程中通常是免疫后將脾臟破碎，然后用離心法將脾臟細胞(包含各種產(chǎn)生或不產(chǎn)生抗體的B細胞)和紅細胞分開，然后用脾細胞與骨髓瘤細胞融合，而不能直接分離出漿細胞，B錯誤；
3
4
非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72上有多種抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，所以向小鼠體內(nèi)注入p72 后，可以刺激小鼠產(chǎn)生多種抗p72的單抗，C錯誤；
p72 部分結構改變只改變了部分抗原決定簇，因此由這部分抗原決定簇產(chǎn)生的抗體失效，但由于還存在由其他抗原決定簇刺激機體產(chǎn)生的抗體，所以多抗仍有效，D正確。
3
4
4.(2023·湖北，22節(jié)選)某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴重。我國學者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病毒，其主要技術路線如圖所示。
3
4
回答下列問題：
(1)與小鼠骨髓瘤細胞融合前，已免疫的脾細胞(含漿細胞)________(填“需要”或“不需要”)通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量；添加脂溶性物質PEG可促進細胞融合，該過程中PEG對細胞膜的作用是__________________________________
__________________________。
3
4
不需要
使細胞接觸處的磷脂分子重新排布，
細胞膜打開，細胞發(fā)生融合
漿細胞是高度分化的細胞，不能增殖，所以不能通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量。脂溶性物質PEG可使細胞接觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。
3
4
(2)在雜交瘤細胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基(如HAT培養(yǎng)基)，該培養(yǎng)基對_____________________和________________________生長具有抑制作用。
3
4
未融合的親本細胞
融合的具有同種核的細胞
在雜交瘤細胞篩選過程中，常用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。
3
4
(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，其目的是_________________________________________________。
3
4
通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞
單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，是運用了抗原—抗體雜交技術，抗體檢測呈陽性的細胞，即為所需的雜交瘤細胞。
3
4
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動物體細胞核移植技術和克隆動物
考點三
1.動物細胞核移植技術的概念和類型
(1)概念
將動物一個細胞的 移入去核的 中，使這個重新組合的細胞發(fā)育成 ，繼而發(fā)育為 的技術。
(2)原理： 。
(3)類型：哺乳動物核移植可分為 核移植和 核移植，其中 核移植較易成功。
細胞核
卵母細胞
新胚胎
動物個體
動物體細胞核具有全能性
胚胎細胞
體細胞
胚胎細胞
2.體細胞核移植的過程
重構胚
MⅡ
提醒　目前動物細胞核移植技術中普遍使用的去核方法是顯微操作法。也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。
3.體細胞核移植技術的應用前景和存在的問題
前景 畜牧業(yè) 加速家畜___________進程、促進優(yōu)良畜群繁育
醫(yī)藥 衛(wèi)生 ①作為 生產(chǎn)醫(yī)用蛋白；
② 的細胞、組織或器官可以用于異種移植；
③人核移植 經(jīng)過誘導分化形成相應的細胞、組織或器官，可用于器官移植
遺傳改良
生物反應器
轉基因克隆動物
胚胎干細胞
前景 科學研究 ①研究克隆動物可使人類更深入地了解_________及衰老過程；②克隆一批遺傳背景相同的動物，可以通過它們之間的對比來分析___________；③克隆特定疾病模型的動物，為研究__________和開發(fā)相應的藥物提供幫助
保護瀕危物種 增加瀕危物種的存活數(shù)量
問題 ①成功率_______；②絕大多數(shù)克隆動物存在_____問題，表現(xiàn)出____ __________
胚胎發(fā)育
致病基因
致病機制
非常低
健康
遺傳
和生理缺陷
(1)通過克隆技術形成重組細胞并發(fā)育成一個新個體，體現(xiàn)了動物細胞的全能性(　　)
√
提示　動物體細胞核移植的原理是動物體細胞核的全能性，而不是動物細胞的全能性。
×
(2)核移植過程中供體理論上是提供細胞核，但操作過程中可以把整個細胞注入去核的卵母細胞中(　　)
(3)重構胚是指人工重新構建的胚胎，具有發(fā)育成完整個體的能力(　　)
(4)可用Ca2＋載體激活重構胚，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程(　　)
(5)克隆動物的性狀與供核動物完全相同(　　)
提示　克隆動物細胞質中的遺傳物質來自卵母細胞，與供核細胞不完全相同，且克隆動物與供核動物的生活環(huán)境可能有差異，因此二者的性狀不完全相同。
√
√
×
癌癥早中期的患者往往通過相應的組織或者器官摘除來進行治療，但是組織和器官摘除往往嚴重影響患者的正常生活和身心健康，如圖是利用體細胞核移植技術生產(chǎn)器官的過程。分析并回答下列問題：
(1)細胞A一般選用卵母細胞，為什么？
提示　因為卵母細胞體積大，易操作；營養(yǎng)豐富；卵母細胞中含有激發(fā)細胞核全能性的物質。
(2)在將體細胞的核移植到細胞A之前，為什么必須先對細胞A進行去核操作？
提示　為了使核移植的胚胎或核遺傳物質全部來自患者提供的正常體細胞。
考向三　動物體細胞核移植技術和克隆動物
5.(2021·遼寧，13)如圖是利用體細胞核移植技術克隆優(yōu)質奶牛的簡易流程圖，有關敘述正確的是
A.后代丁的遺傳性狀由甲和丙
的遺傳物質共同決定
B.過程①需要提供95%空氣和5%CO2的混合氣體
C.過程②常使用顯微操作去核法對受精卵進行處理
D.過程③將激活后的重組細胞培養(yǎng)至原腸胚后移植
5
6
√
后代丁的細胞核的遺傳物質來自甲，細胞質的遺傳物質來自乙，則丁的遺傳性狀由甲和乙的遺傳物質共同決定，A錯誤；
動物細胞培養(yǎng)中需要提供95%空氣(保證細胞的有氧呼吸)和5%CO2(維持培養(yǎng)液的pH)的混合氣體，B正確；
過程②常使用顯微操作去核法對卵母細胞進行處理，C錯誤；
過程③將激活后的重組細胞培養(yǎng)至囊胚或桑葚胚后移植，D錯誤。
5
6
6.(2024·廈門高三模擬)如圖為體細胞克隆猴“中中”和“華華”的培育流程，為建立動物模型、研究疾病機理帶來光明前景。下列敘述錯誤的是
A.過程①將成纖維細胞注射到去核的卵母細胞中，說明細胞膜的控制作
用是相對的
B.卵子細胞質中含有促使成纖維
細胞核全能性表達的物質
C.中中、華華的性別由成纖維細胞的遺傳物質決定
D.“去核”去除的是紡錘體—染色體復合物
√
5
6
過程①將成纖維細胞注射到去核的卵母細胞中是在人為操作下進行的，不能說明細胞膜的控制作用是相對的，A錯誤。
5
6
1.(選擇性必修3 P44)動物細胞培養(yǎng)時，一般置于含有_________________的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。CO2的主要作用是_______________。
2.(選擇性必修3 P44)細胞貼壁： 。
3.(選擇性必修3 P44)接觸抑制：____________________________________
_____________________________。
95%空氣和5%CO2
維持培養(yǎng)液的pH
細胞貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上的現(xiàn)象
當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，
細胞通常會停止分裂增殖的現(xiàn)象
4.(選擇性必修3 P44)細胞在培養(yǎng)過程中分裂受阻的原因：______________
___________________________________________________________________________________________________________________________________________。
5.(選擇性必修3 P48)誘導動物細胞融合的常用方法有 、_____
______和_______________等。
6.(選擇性必修3 P49)雜交瘤細胞的特點是___________________________
_________________。
懸浮培養(yǎng)的細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質缺乏等因素而分裂受阻；對于貼壁細胞來說，除上述因素外，還會因為接觸抑制而停止分裂增殖
PEG融合法
電融
合法
滅活病毒誘導法
既能大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體
7.(選擇性必修3 P50)單克隆抗體的優(yōu)點是____________________________
____________________________________________。
8.(選擇性必修3 P54)核移植技術中必須先去掉受體卵母細胞的細胞核的原因是____________________________________________。
9.(選擇性必修3 P54)通過體細胞核移植技術培育的克隆動物，不是對體細胞供體動物進行了100%的復制，原因是___________________________
____________________________________________________________________。此外，動物的一些行為、習性的形成與所處環(huán)境有很大關系。
能準確地識別抗原的細微差異，
與特定抗原發(fā)生特異性結合，并且可以大量制備
保證核移植動物的核遺傳物質全部來自供體細胞
克隆動物絕大部分DNA來自供體細胞核，其核外還有少量的DNA，即線粒體中的DNA來自受體卵母細胞
10.(2020·全國Ⅰ，38節(jié)選)為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學以小鼠甲為實驗材料設計了以下實驗流程。
回答下列問題：
(1)圖述實驗前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是_______
_________________________________________。
誘導小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細胞
(2)為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞，需要進行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于 ，使用該培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)的結果是 。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是 。
只有雜交瘤細胞能夠生存
選擇培養(yǎng)基
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抗原與抗體的反應具有特異性
課時精練
一、選擇題
1.(2024·武漢高三模擬)體外培養(yǎng)動物細胞時常需要提供一個類似該細胞在生物體內(nèi)的環(huán)境條件，培養(yǎng)方式可分為懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)。下列敘述正確的是
A.懸浮培養(yǎng)一般使用液體培養(yǎng)基
B.貼壁培養(yǎng)一般使用固體培養(yǎng)基
C.懸浮培養(yǎng)會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象
D.血液中淋巴細胞適合貼壁培養(yǎng)
√
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動物細胞培養(yǎng)均采用液體培養(yǎng)基，B錯誤；
貼壁培養(yǎng)會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，懸浮培養(yǎng)不會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，C錯誤；
體外培養(yǎng)動物細胞時常需要提供一個類似該細胞在生物體內(nèi)的環(huán)境條件，因此血液中淋巴細胞適合懸浮培養(yǎng)，D錯誤。
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2.(2024·鹽城高三診斷)為初步驗證藥物P1和P2的抗癌效果，研究人員將用動物細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)的癌細胞隨機分成3份，每一份均分成5組，實驗組分別加入用生理鹽水配制的不同濃度的藥物P1和P2，實驗結果如圖所示。下列相關分析錯誤的是
A.本實驗至少要設計并完成11組實驗
B.對照組需要加入等量的生理鹽水
C.藥物P2的抗癌效果比藥物P1的抗癌
效果強
D.實驗不能說明藥物P1和P2對正常細胞有抑制作用
√
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本實驗與藥物P1有關的實驗組
有5組，與藥物P2有關的實驗組
有5組，對照組1組，因此，本
實驗至少要設計并完成11組實
驗，A正確；
為排除無關變量對實驗結果的影響，對照組需要加入等量的生理鹽水，B正確；
本實驗沒有進行藥物P1和P2對正常細胞增殖的影響，因而不能說明藥物P1和P2對正常細胞有抑制作用，D正確。
3.(2024·張家口高三模擬)科學家通過體外誘導小鼠成纖維細胞，獲得了類似胚胎干細胞的一種細胞，將它稱為誘導多能干細胞(簡稱iPS細胞)，iPS細胞增殖分化后可形成多種組織細胞，用于多種疾病的治療。如圖為該技術的實驗示意圖，下列有關說法錯誤的是
A.體外培養(yǎng)小鼠成纖維細胞和iPS細胞時，定期更換培養(yǎng)液可以清除細胞的代謝物
B.選取的小鼠成纖維組織需經(jīng)胃蛋
白酶或膠原蛋白酶處理成單個細
胞后制成細胞懸液
C.iPS細胞用于疾病治療時存在分化為腫瘤細胞的風險
D.若iPS細胞取自病人，經(jīng)誘導并移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排
斥反應
√
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選取的小鼠成纖維組織需經(jīng)胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理成單個細胞后制成細胞懸液，由于動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，B錯誤。
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4.(2024·汕頭高三調(diào)研)甲型流感單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細胞在克隆化培養(yǎng)過程中來自B淋巴細胞的染色體往往出現(xiàn)隨機丟失現(xiàn)象，不考慮基因互作和其他變異。下列相關敘述錯誤的是
A.可從多次間歇注射甲型流感疫苗的動物脾臟中篩選獲得已免疫的B淋
巴細胞
B.在HAT 選擇培養(yǎng)基上，B淋巴細胞和骨髓瘤細胞均無法長期存活
C.用96孔板培養(yǎng)和篩選雜交瘤細胞時每一個孔盡量只接種一個細胞
D.抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞即具有持續(xù)產(chǎn)生甲型流感抗體的能力
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雜交瘤細胞在克隆化培養(yǎng)過程中來自B淋巴細胞的染色體往往出現(xiàn)隨機丟失現(xiàn)象，若丟失的染色體含有產(chǎn)生甲型流感抗體的基因，則雜交瘤細胞分泌單克隆抗體的功能將喪失，D錯誤。
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5.(2024·武漢高三調(diào)研)CD47是一種細胞膜表面糖蛋白，可與巨噬細胞結合，從而抑制巨噬細胞的吞噬作用。為驗證抗CD47的單克隆抗體可以減弱CD47對巨噬細胞的抑制作用，科學家按照如圖流程進行了實驗，下列敘述錯誤的是
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A.實驗流程中CD47充當抗原
的作用
B.融合、篩選得到的雜交瘤
細胞不一定能產(chǎn)生抗CD47
的單克隆抗體
C.對照組應設置為：巨噬細胞＋正常細胞共培養(yǎng)體系＋單克隆抗體
D.預期實驗結果為實驗組的巨噬細胞的吞噬能力高于對照組
√
用CD47免疫小鼠，則CD47充當抗原，A正確；
融合、篩選得到的雜交瘤細胞不一定能產(chǎn)生抗CD47的單克隆抗體，還需要進行專一抗體檢測，B正確；
根據(jù)單一變量原則可知，應設置不加單克隆抗體的巨噬細胞和腫瘤細胞的共培養(yǎng)體系作為對照，C錯誤；
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實驗組中加入的抗CD47的單克隆抗體，與腫瘤細胞表面的CD47發(fā)生特異性結合，從而解除CD47對巨噬細胞的抑制作用，而對照組中沒有加入單克隆抗體，因此，實驗組中吞噬細胞的吞噬指數(shù)顯著高于對照組可驗證上述推測，D正確。
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6.細胞毒素類藥物能有效殺傷腫瘤細胞，但也會對健康細胞造成傷害，科學家將細胞毒素與單克隆抗體結合制成抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)，ADC又被稱作“生物導彈”，通常由抗體、接頭和藥物三部分組成(如圖所示)。下列相關敘述錯誤的是
A.雜交瘤細胞釋放單克隆抗體，體現(xiàn)了細胞膜
的流動性
B.接頭的結構不穩(wěn)定會導致藥物分子脫落，造
成正常細胞被破壞
C.ADC中的抗體能特異性識別并殺傷腫瘤細胞
D.利用放射性同位素或熒光標記的單克隆抗體可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病
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單克隆抗體由雜交瘤細胞通過胞吐的方式釋放，體現(xiàn)了細胞膜的流動性，A正確；
ADC通常由抗體、接頭和藥物三部分組成，如果接頭的結構不穩(wěn)定會導致藥物分子脫落，則藥物分子失去了靶向性，造成正常細胞被破壞，B正確；
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單克隆抗體能與抗原特異性結合，這種靶向作用使ADC中的藥物對腫瘤細胞進行殺傷，而不是抗體殺傷腫瘤細胞，C錯誤；
利用放射性同位素或熒光標記的單克隆抗體可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病，該過程利用了抗原—抗體特異性結合原理，D正確。
15
7.(2024·常州高三模擬)CD47是一種在多種細胞中廣泛表達的跨膜糖蛋白，能夠與巨噬細胞膜上的受體結合，并抑制其吞噬作用。結腸癌等多種癌細胞表面的CD47含量比正常細胞高1.6～5倍。科研人員制備抗CD47的單克隆抗體，以探究其對巨噬細胞吞噬作用的影響。下列說法正確的是
A.編碼CD47的基因是一種原癌基因
B.制備抗CD47的單克隆抗體過程中需為細胞提供95%O2、5%CO2的氣體
環(huán)境
C.制備抗 CD47的單克隆抗體過程中可利用CD47篩選出目標雜交瘤細胞
D.將細胞毒素與抗CD47單克隆抗體偶聯(lián)到一起，可實現(xiàn)對癌細胞的精準
殺傷
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由題意可知，編碼CD47的基因不是原癌基因，因為它的作用是通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能來影響腫瘤細胞的生長和轉移，而不是通過直接影響細胞的增殖和分化來促進癌癥的發(fā)生，A錯誤；
制備抗CD47的單克隆抗體過程中，細胞需在含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，B錯誤；
目標雜交瘤細胞可產(chǎn)生抗CD47抗體，可利用CD47篩選出目標雜交瘤細胞，C正確；
正常細胞表面也含有CD47，對癌細胞精準殺傷應選擇癌細胞特有蛋白質，D錯誤。
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8.(2024·廈門高三質檢)如圖表示雙抗體夾心法，該方法是醫(yī)學上常用的定量檢測抗原的方法，利用細胞工程技術制備的單克隆抗體能增強該過程的有效性，下列相關敘述錯誤的是
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A.加入酶標抗體的目的是通過測定酶反應產(chǎn)物量來判斷待測抗原量
B.固相抗體和酶標抗體雖都能與抗原結合，但二者仍具有不同的結構
C.將相關抗原注射到小鼠體內(nèi)，目的是從小鼠脾中獲得所需的單克隆抗體
D.反應體系中兩種抗體的量相對于待檢抗原需過量以確保檢測結果的準確性
√
反應體系中固相抗體的作用是固定待測抗原，酶標抗體的作用是與待測抗原結合并由酶催化檢測底物反應，這樣就可以通過測定酶促反應產(chǎn)物量來判斷待測抗原量，兩種抗體的量相對于待檢抗原需過量以確保檢測結果的準確性，A、D正確；
抗體與抗原的結合具有特異性，因此不同抗體可與同一抗原表面的不同部位結合，固相抗體和酶標抗體具有不同的結構，B正確；
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將相關抗原注射到小鼠體內(nèi)，目的是從小鼠脾臟中獲得相應的B淋巴細胞，不能直接得到單克隆抗體，C錯誤。
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9.(2024·蘇州高三模擬)2017年11月，世界上首個體細胞克隆猴“中中”在我國誕生，同年“華華”誕生，寓意為“中華”。下列敘述錯誤的是
A.“中中”和“華華”的培育過程屬于無性生殖
B.克隆猴培育過程利用的技術有核移植、體外受精和胚胎移植
C.卵母細胞中含有大量的營養(yǎng)物質，并含有誘導體細胞核表現(xiàn)全能性的
物質
D.可采用電融合法使供體細胞和去核卵母細胞融合
√
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克隆猴涉及的生物工程技術有核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植，不涉及體外受精，B錯誤。
10.科學家采集了一只一歲半的、睡眠紊亂最明顯的BMAL1(生物節(jié)律基因)敲除猴A6的體細胞，通過體細胞核移植技術，獲得了5只克隆猴——這是國際上首次成功構建的一批遺傳背景一致的生物節(jié)律紊亂獼猴模型。下列相關敘述錯誤的是
A.體細胞核移植技術的基礎是動物細胞培養(yǎng)
B.5只克隆猴細胞的核基因型與核供體細胞的完全一致
C.取自新鮮卵巢的卵母細胞可以直接作為受體細胞使用
D.該研究可以彌補實驗獼猴繁殖周期長、單胎數(shù)量少的不足
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動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎，A正確；
克隆猴細胞核基因型與核供體細胞完全一致，細胞質基因來源于受體細胞，B正確；
取自新鮮卵巢的卵母細胞需培養(yǎng)到MⅡ期，才能作為受體細胞使用，C錯誤。
11.2017年，某國批準了首例使用細胞核移植技術培育“三親嬰兒”的申請。其培育過程可選用如下技術路線。
下列敘述錯誤的是
A.卵母細胞捐獻者攜帶的紅綠色
盲基因能夠遺傳給“三親嬰兒”
B.該技術可以有效避免母親線粒
體DNA中的致病基因遺傳給后代
C.捐贈者的卵子去核實質是指去除細胞中的紡錘體—染色體復合物
D.“三親嬰兒”同時擁有自己父親、母親及卵母細胞捐獻者的部分基因
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母親為“三親嬰兒”提供的是卵母細胞的細胞核，后代的線粒體基因來自捐獻者的卵母細胞，故該技術可避免母親的線粒體遺傳病基因傳遞給后代，B正確；
捐獻者攜帶的紅綠色盲基因位于其細胞核內(nèi)，而捐獻者給“三親嬰兒”提供的是卵母細胞的細胞質，故捐獻者攜帶的紅綠色盲基因不能遺傳給“三親嬰兒”，A錯誤；
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“三親嬰兒”的細胞核基因一半來自母親，一半來自父親，細胞質基因來自卵母細胞捐獻者，所以“三親嬰兒”同時擁有自己父親、母親及卵母細胞捐獻者的部分基因，D正確。
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12.(2024·河北衡水中學高三模擬)iPS細胞被稱為誘導多能干細胞，可通過轉入相關因子來制備。iPS細胞最初是由成纖維細胞轉化而來，后來發(fā)現(xiàn)已分化的T細胞、B細胞等也能被誘導成該類細胞。下列說法錯誤的是
A.導入的物質可以是DNA、蛋白質，還可用小分子物質來誘導
B.iPS細胞的體外培養(yǎng)需要在無菌的CO2培養(yǎng)箱中進行
C.T細胞、B細胞能被誘導為iPS細胞，說明體內(nèi)細胞的分化是可逆的
D.與胚胎干細胞相比，iPS細胞具有細胞來源廣泛，不需要破壞胚胎等優(yōu)點
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目前已采用多種方法來制備iPS細胞，包括借助載體將特定的基因導入細胞中，直接將特定蛋白導入細胞中或者用小分子化合物等來誘導形成iPS細胞，A正確；
iPS細胞的體外培養(yǎng)是利用動物細胞培養(yǎng)技術，需要在無菌的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，B正確；
T細胞、B細胞能被誘導為iPS細胞，說明離體的、已分化的細胞經(jīng)過誘導可轉化為未分化的狀態(tài)，C錯誤。
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13.(2024·重慶高三月考)一種雜交瘤細胞只能產(chǎn)生一種抗體，抗體由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈構成。科研人員通過動物細胞融合技術將兩種不同的雜交瘤細胞(A和B)融合形成雙雜交瘤細胞AB，雙雜交瘤細胞能夠懸浮在液體培養(yǎng)基中生長繁殖，產(chǎn)生的雙特異性抗體AB如圖所示。下列相關說法不正確的是
A.若雙特異性抗體應用于腫瘤治療，則α、β抗原
中至少有一種為癌細胞表面抗原
B.雙雜交瘤細胞無需識別α、β抗原，就能產(chǎn)生雙
特異性抗體
C.對培養(yǎng)到一定密度的雙雜交瘤細胞進行傳代培
養(yǎng)時，無需使用胰蛋白酶處理
D.雙雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體可與α、β兩種抗原同時結合，說明該抗體不具備特異性
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若雙特異性抗體應用于腫瘤治療，則α、β抗原中至少有一種為癌細胞表面抗原，這樣才能保證藥物定向作用于癌細胞，A正確；
雜交瘤細胞是由已免疫的B細胞和
骨髓瘤細胞融合得到的，無需接觸抗原就能產(chǎn)生抗體，B正確；
雜交瘤細胞是懸浮培養(yǎng)的細胞，在進行傳代培養(yǎng)時，懸浮培養(yǎng)的細胞直接用離心法收集，無需使用胰蛋白酶處理，C正確；
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雙雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體可與α、β兩種抗原同時結合，但不能與其他抗原結合，因此該抗體具備特異性，D錯誤。
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14.(2024·長沙高三模擬)在體細胞克隆猴培育過程中，為調(diào)節(jié)相關基因的表達，提高胚胎的發(fā)育率和妊娠率，研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重構胚，同時用組蛋白脫乙酰酶抑制劑(TSA)處理，具體流程如圖所示。下列相關敘述錯誤的是
A.常用顯微操作法去除由核膜包被
的卵母細胞的細胞核
B.去核時使用的梯度離心、紫外光
照射和化學物質處理等方法都沒
有穿透卵母細胞透明帶
C.滅活的仙臺病毒可使細胞膜上的蛋白質和脂質分子重新排布，利于融合
D.組蛋白去甲基化和乙酰化的表觀遺傳修飾都有利于重構胚的分裂和發(fā)育
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常用顯微操作法去除卵母細胞的細胞核，而此處的細胞核是紡錘體—染色體復合物，不具有核膜，A錯誤；
目前動物細胞核移植技術中
普遍使用的去核方法是顯微操作法，也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質處理等方法，這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性，B正確；
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滅活的仙臺病毒可使細胞膜上的蛋白質和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，C正確；
研究人員將組蛋白去甲基化
酶Kdm4d的mRNA注入了重構胚，同時用組蛋白脫乙酰酶抑制劑TSA處理，有利于重構胚的分裂和發(fā)育，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程，D正確。
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二、非選擇題
15.(2022·福建，13節(jié)選)美西螈具有很強的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細胞的作用機制，科研人員制備了抗巨噬細胞表面標志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下。回答下列問題：
15
(1)步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射______________________和____________________________。
CD14蛋白(CD14抗原)
分泌抗CD14抗體的雜交瘤細胞
(2)步驟②所用的SP2/0細胞的生長特點是____________。
能無限增殖
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(3)吸取③中的上清液到④的培養(yǎng)孔中，根據(jù)抗原—抗體雜交原理，需加入____________進行專一抗體檢測，檢測過程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細胞不能分泌抗CD14抗體，原因是________________________________________
________________________。
(4)步驟⑥從________中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測巨噬細胞。
15
CD14蛋白
參與形成雜交瘤細胞的B淋巴細胞種類多，
有的不能分泌抗CD14抗體
小鼠腹水
返回第59課時　動物細胞工程
課標要求 1.闡明動物細胞培養(yǎng)的條件和過程。2.闡明動物細胞核移植的原理和過程。3.闡明動物細胞融合的概念。4.概述細胞融合技術是單克隆抗體制備的重要技術。5.簡述干細胞在生物醫(yī)學工程中有廣泛的應用價值。
考情分析 1.動物細胞培養(yǎng)技術 2022·福建·T3　2022·江蘇·T14　2022·湖北·T6
2.動物細胞融合和單克隆抗體的制備 2023·北京·T12 2023·湖北·T22　2022·山東·T15　2022·福 建·T13 2021·山東·T15　2021·江蘇·T11　2020·全國Ⅰ·T38
3.動物細胞核移植技術 2023·天津·T7　2021·遼寧·T13　2020·天津·T1
考點一　動物細胞培養(yǎng)
1．動物細胞培養(yǎng)的概念
從動物體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術。
2．動物細胞培養(yǎng)的條件
3．動物細胞培養(yǎng)的過程
(1)細胞貼壁：體外培養(yǎng)的大多數(shù)動物細胞往往貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上。
(2)接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞通常會停止分裂增殖。
(3)原代培養(yǎng)：分瓶之前的細胞培養(yǎng)，即動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)。
(4)傳代培養(yǎng)：分瓶后的細胞培養(yǎng)。
4．干細胞培養(yǎng)及其應用
種類 胚胎干細胞 成體干細胞 誘導多能干細胞
來源 早期胚胎 骨髓、臍帶血和外周血 體細胞(如成纖維細胞等)
特點 能分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細胞，并進一步形成機體的組織和器官甚至個體 分化成特定的細胞或組織 能誘導分化成類似胚胎干細胞的細胞
應用 分化成心肌細胞、神經(jīng)元和造血干細胞等 造血干細胞用于治療白血病等；神經(jīng)干細胞用于治療帕金森病、阿爾茨海默病等 治療小鼠的鐮狀細胞貧血、阿爾茨海默病、心血管疾病等
判斷正誤
(1)在進行細胞培養(yǎng)時，通常采用培養(yǎng)皿或打開培養(yǎng)瓶蓋的方式以獲取新陳代謝所必需的O2(　×　)
提示　動物細胞培養(yǎng)時通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶。
(2)將動物細胞置于含有95%O2和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)(　×　)
提示　將動物細胞置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
(3)動物細胞在培養(yǎng)過程中都具有細胞貼壁的現(xiàn)象(　×　)
提示　體外培養(yǎng)的動物細胞可以分為兩大類：一類細胞能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖，不具有細胞貼壁的現(xiàn)象；另一類則需要貼附于某些基質表面才能生長增殖，大多數(shù)細胞屬于這種類型。
(4)培養(yǎng)動物細胞的第一代(即第一次細胞增殖)被稱為原代培養(yǎng)(　×　)
提示　人們通常將分瓶之前的細胞培養(yǎng)，即動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)，原代培養(yǎng)時細胞增殖不止一代。
(5)干細胞都能分化成多種類型的細胞(　×　)
提示　胚胎干細胞能分化產(chǎn)生多種類型的組織或細胞，成體干細胞一般只能分化成特定的細胞或組織。
(6)胚胎干細胞是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多、應用也最為成熟的一類成體干細胞(　×　)
提示　造血干細胞是發(fā)現(xiàn)最早、研究最多、應用也最為成熟的一類成體干細胞。
為研究長春新堿(VCR)對肝癌細胞凋亡的影響，科研人員進行了相關研究。
①將等量的小鼠肝癌Hepa 1－6細胞懸液，分別接種于若干個含有等量培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中；
②將培養(yǎng)瓶放于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，靜置、去除上清液；
③分別加入等量但含不同濃度VCR的培養(yǎng)液，置于37 ℃、5%的CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；
④分別在24 h、36 h、48 h時吸取培養(yǎng)液，觀察結果，得到不同濃度VCR作用于肝癌細胞不同時間的抑制率(%)如表所示。
濃度 24 h 36 h 48 h
0.5 mg/mL 12.5 17.2 26
1.0 mg/mL 20.5 31 42
2.0 mg/mL 31.5 38.8 47
請回答下列問題：
(1)步驟③中需要設置對照組，對照組的處理方法為加入等量不含VCR的培養(yǎng)液(或只加等量培養(yǎng)液)。步驟③中每個實驗組設置5個培養(yǎng)瓶同時進行培養(yǎng)，計數(shù)后統(tǒng)計平均值，目的是什么？
提示　目的是減小誤差，使實驗結果更準確。
(2)根據(jù)表格中的結果可以得出的結論是什么？
提示　VCR對肝癌細胞的抑制率與VCR的濃度和作用時間呈正相關。
考向一　動物細胞培養(yǎng)
1．航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細胞跳動的視頻。下列相關敘述正確的是(　　)
A．培養(yǎng)心肌細胞的器具和試劑都要先進行高壓蒸汽滅菌
B．培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳
C．心肌細胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖
D．心肌細胞在神經(jīng)細胞發(fā)出的神經(jīng)沖動的支配下跳動
答案　B
解析　培養(yǎng)心肌細胞的器具要先進行高壓蒸汽滅菌，但是試劑并不都需要高壓蒸汽滅菌，如動物血清不能進行高壓蒸汽滅菌，否則會使其中的成分失活，A錯誤；心肌細胞高度分化，不能進行有絲分裂，C錯誤。
2．(2022·湖北，6)某興趣小組開展小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)的研究，結果發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的原代神經(jīng)元生長緩慢，其原因不可能是(　　)
A．實驗材料取自小鼠胚胎的腦組織
B．為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封
C．血清經(jīng)過高溫處理后加入培養(yǎng)基
D．所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性
答案　A
解析　小鼠胚胎腦組織中含有豐富的原代神經(jīng)元，細胞增殖能力強，不會導致細胞生長緩慢，A符合題意；培養(yǎng)瓶瓶口密封會使培養(yǎng)液中缺氧，影響細胞的有氧呼吸，造成供能不足，可能導致細胞生長緩慢，B不符合題意；血清經(jīng)過高溫處理后，其中活性成分變性，失去原有功能，細胞的生存環(huán)境嚴重惡化，可能導致細胞生長緩慢，C不符合題意；小鼠的內(nèi)環(huán)境為弱堿性，若所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性，會導致細胞的生存環(huán)境惡劣，可能導致細胞生長緩慢，D不符合題意。
考點二　動物細胞融合技術與單克隆抗體
1．動物細胞融合技術
2．單克隆抗體的制備
(1)傳統(tǒng)抗體的獲得
①方法
②缺點：產(chǎn)量低、純度低、特異性差。
(2)單克隆抗體的制備及優(yōu)點
①制備過程
②單克隆抗體的優(yōu)點
a．能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結合(特異性強、靈敏度高)。
b．可以大量制備。
(3)單克隆抗體的應用
①被廣泛用作診斷試劑，在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要的作用。
②運載藥物，形成抗體—藥物偶聯(lián)物，實現(xiàn)對腫瘤細胞的選擇性殺傷。
③用于治療疾病。
判斷正誤
(1)動物細胞融合過程中既有細胞膜的融合也有核的融合(　√　)
(2)動物細胞融合的結果是形成單核的雜交細胞，植物體細胞雜交的結果是得到雜種植株(　√　)
(3)動物體細胞融合后的雜交細胞仍然是二倍體細胞(　×　)
提示　兩個二倍體動物細胞融合形成的雜交細胞具有四個染色體組，是四倍體細胞。
(4)將抗原注入小鼠體內(nèi)，是為了獲得能產(chǎn)生相應抗體的B淋巴細胞(　√　)
(5)將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行誘導融合，培養(yǎng)液中融合后的細胞即雜交瘤細胞(　×　)
提示　將骨髓瘤細胞和B淋巴細胞混合，經(jīng)誘導后融合的細胞不都是雜交瘤細胞，還有B細胞自身融合的細胞、骨髓瘤細胞自身融合的細胞等，需要進行篩選。
(6)單克隆抗體診斷試劑提高了診斷的準確性、靈敏性(　√　)
長春新堿(VCR)能夠干擾腫瘤細胞的有絲分裂，也會影響正常細胞的增殖和分裂，導致藥物副作用的發(fā)生。H18雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗人肝癌單克隆抗體HAb18對于人體肝癌的診斷和靶向治療具有重要的意義。回答下列問題：
(1)抗人肝癌單克隆抗體HAb18的制備過程中，需要向小鼠體內(nèi)注射肝癌細胞懸液，其目的是什么？
提示　刺激機體發(fā)生免疫應答，從而得到能產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞。
(2)單克隆抗體被廣泛用作診斷試劑的原因是什么？
提示　單克隆抗體能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結合，并且可以大量制備。
(3)資料：①細胞合成DNA包括D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。
②免疫的B淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但它不能分裂增殖，其本身也不能在體外長期存活。
③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，但它能不斷分裂增殖。如果它的D途徑被阻斷的話，它會因不能合成DNA而死亡。
抗人肝癌單克隆抗體HAb18的制備過程中，需要兩次篩選，請根據(jù)上述資料提出第1次篩選的目的和具體方法。
提示　第1次篩選的目的是篩選出雜交瘤細胞；第1次篩選的具體方法是利用加入氨基蝶呤的選擇培養(yǎng)基篩選。
(4)將VCR與抗人肝癌單克隆抗體HAb18通過接頭連接形成抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)，可實現(xiàn)對肝癌細胞的特異性殺傷，ADC的作用機制如圖。據(jù)圖分析，ADC的抗體和藥物(VCR)各具有什么作用？
提示　ADC的抗體主要發(fā)揮靶向運輸作用，攜帶 VCR 與肝癌細胞特異性結合；藥物(VCR)發(fā)揮治療效應，通過抑制微管蛋白聚合妨礙紡錘體的形成，從而阻斷肝癌細胞分裂，誘導肝癌細胞凋亡。
考向二　動物細胞融合技術與單克隆抗體
3．(2021·山東，15)一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內(nèi)，可利用該小鼠的免疫細胞制備抗p72的單抗，也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗。下列說法正確的是(　　)
A．注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大
B．單抗制備過程中通常將分離出的漿細胞與骨髓瘤細胞融合
C．利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗
D．p72部分結構改變后會出現(xiàn)原單抗失效而多抗仍有效的情況
答案　D
解析　單抗的制作需要篩選，而多抗不需要篩選，抗原純度越高，產(chǎn)生的多抗純度越高，因此抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響小，A錯誤；單抗制備過程中通常是免疫后將脾臟破碎，然后用離心法將脾臟細胞(包含各種產(chǎn)生或不產(chǎn)生抗體的B細胞)和紅細胞分開，然后用脾細胞與骨髓瘤細胞融合，而不能直接分離出漿細胞，B錯誤；非洲豬瘟病毒衣殼蛋白 p72 上有多種抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，所以向小鼠體內(nèi)注入p72 后，可以刺激小鼠產(chǎn)生多種抗p72的單抗，C錯誤；p72 部分結構改變只改變了部分抗原決定簇，因此由這部分抗原決定簇產(chǎn)生的抗體失效，但由于還存在由其他抗原決定簇刺激機體產(chǎn)生的抗體，所以多抗仍有效，D正確。
4．(2023·湖北，22節(jié)選)某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴重。我國學者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病毒，其主要技術路線如圖所示。
回答下列問題：
(1)與小鼠骨髓瘤細胞融合前，已免疫的脾細胞(含漿細胞)________(填“需要”或“不需要”)通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量；添加脂溶性物質PEG可促進細胞融合，該過程中PEG對細胞膜的作用是______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________。
(2)在雜交瘤細胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基(如HAT培養(yǎng)基)，該培養(yǎng)基對________________________和____________________生長具有抑制作用。
(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，其目的是_________________
______________________________________________________________________________。
答案　(1)不需要　使細胞接觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合　(2)未融合的親本細胞　融合的具有同種核的細胞　(3)通過抗體檢測呈陽性來獲得分泌所需抗體的雜交瘤細胞
解析　 (1)漿細胞是高度分化的細胞，不能增殖，所以不能通過原代培養(yǎng)擴大細胞數(shù)量。脂溶性物質PEG可使細胞接觸處的磷脂分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。(2)在雜交瘤細胞篩選過程中，常用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，是運用了抗原—抗體雜交技術，抗體檢測呈陽性的細胞，即為所需的雜交瘤細胞。
考點三　動物體細胞核移植技術和克隆動物
1．動物細胞核移植技術的概念和類型
(1)概念
將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育為動物個體的技術。
(2)原理：動物體細胞核具有全能性。
(3)類型：哺乳動物核移植可分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植，其中胚胎細胞核移植較易成功。
2．體細胞核移植的過程
提醒　目前動物細胞核移植技術中普遍使用的去核方法是顯微操作法。也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質處理等方法。這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。
3．體細胞核移植技術的應用前景和存在的問題
前景 畜牧業(yè) 加速家畜遺傳改良進程、促進優(yōu)良畜群繁育
醫(yī)藥衛(wèi)生 ①作為生物反應器生產(chǎn)醫(yī)用蛋白； ②轉基因克隆動物的細胞、組織或器官可以用于異種移植； ③人核移植胚胎干細胞經(jīng)過誘導分化形成相應的細胞、組織或器官，可用于器官移植
科學研究 ①研究克隆動物可使人類更深入地了解胚胎發(fā)育及衰老過程；②克隆一批遺傳背景相同的動物，可以通過它們之間的對比來分析致病基因；③克隆特定疾病模型的動物，為研究致病機制和開發(fā)相應的藥物提供幫助
保護瀕危物種 增加瀕危物種的存活數(shù)量
問題 ①成功率非常低；②絕大多數(shù)克隆動物存在健康問題，表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷
判斷正誤
(1)通過克隆技術形成重組細胞并發(fā)育成一個新個體，體現(xiàn)了動物細胞的全能性(　×　)
提示　動物體細胞核移植的原理是動物體細胞核的全能性，而不是動物細胞的全能性。
(2)核移植過程中供體理論上是提供細胞核，但操作過程中可以把整個細胞注入去核的卵母細胞中(　√　)
(3)重構胚是指人工重新構建的胚胎，具有發(fā)育成完整個體的能力(　√　)
(4)可用Ca2＋載體激活重構胚，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程(　√　)
(5)克隆動物的性狀與供核動物完全相同(　×　)
提示　克隆動物細胞質中的遺傳物質來自卵母細胞，與供核細胞不完全相同，且克隆動物與供核動物的生活環(huán)境可能有差異，因此二者的性狀不完全相同。
癌癥早中期的患者往往通過相應的組織或者器官摘除來進行治療，但是組織和器官摘除往往嚴重影響患者的正常生活和身心健康，如圖是利用體細胞核移植技術生產(chǎn)器官的過程。分析并回答下列問題：
(1)細胞A一般選用卵母細胞，為什么？
提示　因為卵母細胞體積大，易操作；營養(yǎng)豐富；卵母細胞中含有激發(fā)細胞核全能性的物質。
(2)在將體細胞的核移植到細胞A之前，為什么必須先對細胞A進行去核操作？
提示　為了使核移植的胚胎或核遺傳物質全部來自患者提供的正常體細胞。
考向三　動物體細胞核移植技術和克隆動物
5．(2021·遼寧，13)如圖是利用體細胞核移植技術克隆優(yōu)質奶牛的簡易流程圖，有關敘述正確的是(　　)
A．后代丁的遺傳性狀由甲和丙的遺傳物質共同決定
B．過程①需要提供95%空氣和5%CO2的混合氣體
C．過程②常使用顯微操作去核法對受精卵進行處理
D．過程③將激活后的重組細胞培養(yǎng)至原腸胚后移植
答案　B
解析　后代丁的細胞核的遺傳物質來自甲，細胞質的遺傳物質來自乙，則丁的遺傳性狀由甲和乙的遺傳物質共同決定，A錯誤；動物細胞培養(yǎng)中需要提供95%空氣(保證細胞的有氧呼吸)和5%CO2(維持培養(yǎng)液的pH)的混合氣體，B正確；過程②常使用顯微操作去核法對卵母細胞進行處理，C錯誤；過程③將激活后的重組細胞培養(yǎng)至囊胚或桑葚胚后移植，D錯誤。
6．(2024·廈門高三模擬)如圖為體細胞克隆猴“中中”和“華華”的培育流程，為建立動物模型、研究疾病機理帶來光明前景。下列敘述錯誤的是(　　)
A．過程①將成纖維細胞注射到去核的卵母細胞中，說明細胞膜的控制作用是相對的
B．卵子細胞質中含有促使成纖維細胞核全能性表達的物質
C．中中、華華的性別由成纖維細胞的遺傳物質決定
D．“去核”去除的是紡錘體—染色體復合物
答案　A
解析　過程①將成纖維細胞注射到去核的卵母細胞中是在人為操作下進行的，不能說明細胞膜的控制作用是相對的，A錯誤。
1．(選擇性必修3 P44)動物細胞培養(yǎng)時，一般置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。
2．(選擇性必修3 P44)細胞貼壁：細胞貼附在培養(yǎng)瓶的瓶壁上的現(xiàn)象。
3．(選擇性必修3 P44)接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞通常會停止分裂增殖的現(xiàn)象。
4．(選擇性必修3 P44)細胞在培養(yǎng)過程中分裂受阻的原因：懸浮培養(yǎng)的細胞會因細胞密度過大、有害代謝物積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質缺乏等因素而分裂受阻；對于貼壁細胞來說，除上述因素外，還會因為接觸抑制而停止分裂增殖。
5．(選擇性必修3 P48)誘導動物細胞融合的常用方法有PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等。
6．(選擇性必修3 P49)雜交瘤細胞的特點是既能大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的特定抗體。
7．(選擇性必修3 P50)單克隆抗體的優(yōu)點是能準確地識別抗原的細微差異，與特定抗原發(fā)生特異性結合，并且可以大量制備。
8．(選擇性必修3 P54)核移植技術中必須先去掉受體卵母細胞的細胞核的原因是保證核移植動物的核遺傳物質全部來自供體細胞。
9．(選擇性必修3 P54)通過體細胞核移植技術培育的克隆動物，不是對體細胞供體動物進行了100%的復制，原因是克隆動物絕大部分DNA來自供體細胞核，其核外還有少量的DNA，即線粒體中的DNA來自受體卵母細胞。此外，動物的一些行為、習性的形成與所處環(huán)境有很大關系。
10．(2020·全國Ⅰ，38節(jié)選)為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學以小鼠甲為實驗材料設計了以下實驗流程。
回答下列問題：
(1)上述實驗前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是誘導小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細胞。
(2)為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞，需要進行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，使用該培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)的結果是只有雜交瘤細胞能夠生存。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是抗原與抗體的反應具有特異性。
課時精練
一、選擇題
1．(2024·武漢高三模擬)體外培養(yǎng)動物細胞時常需要提供一個類似該細胞在生物體內(nèi)的環(huán)境條件，培養(yǎng)方式可分為懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)。下列敘述正確的是(　　)
A．懸浮培養(yǎng)一般使用液體培養(yǎng)基
B．貼壁培養(yǎng)一般使用固體培養(yǎng)基
C．懸浮培養(yǎng)會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象
D．血液中淋巴細胞適合貼壁培養(yǎng)
答案　A
解析　動物細胞培養(yǎng)均采用液體培養(yǎng)基，B錯誤；貼壁培養(yǎng)會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，懸浮培養(yǎng)不會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，C錯誤；體外培養(yǎng)動物細胞時常需要提供一個類似該細胞在生物體內(nèi)的環(huán)境條件，因此血液中淋巴細胞適合懸浮培養(yǎng)，D錯誤。
2．(2024·鹽城高三診斷)為初步驗證藥物P1和P2的抗癌效果，研究人員將用動物細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)的癌細胞隨機分成3份，每一份均分成5組，實驗組分別加入用生理鹽水配制的不同濃度的藥物P1和P2，實驗結果如圖所示。下列相關分析錯誤的是(　　)
A．本實驗至少要設計并完成11組實驗
B．對照組需要加入等量的生理鹽水
C．藥物P2的抗癌效果比藥物P1的抗癌效果強
D．實驗不能說明藥物P1和P2對正常細胞有抑制作用
答案　C
解析　本實驗與藥物P1有關的實驗組有5組，與藥物P2有關的實驗組有5組，對照組1組，因此，本實驗至少要設計并完成11組實驗，A正確；為排除無關變量對實驗結果的影響，對照組需要加入等量的生理鹽水，B正確；本實驗沒有進行藥物P1和P2對正常細胞增殖的影響，因而不能說明藥物P1和P2對正常細胞有抑制作用，D正確。
3．(2024·張家口高三模擬)科學家通過體外誘導小鼠成纖維細胞，獲得了類似胚胎干細胞的一種細胞，將它稱為誘導多能干細胞(簡稱iPS細胞)，iPS細胞增殖分化后可形成多種組織細胞，用于多種疾病的治療。如圖為該技術的實驗示意圖，下列有關說法錯誤的是(　　)
A．體外培養(yǎng)小鼠成纖維細胞和iPS細胞時，定期更換培養(yǎng)液可以清除細胞的代謝物
B．選取的小鼠成纖維組織需經(jīng)胃蛋白酶或膠原蛋白酶處理成單個細胞后制成細胞懸液
C．iPS細胞用于疾病治療時存在分化為腫瘤細胞的風險
D．若iPS細胞取自病人，經(jīng)誘導并移植回病人體內(nèi)后，理論上可以避免免疫排斥反應
答案　B
解析　選取的小鼠成纖維組織需經(jīng)胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理成單個細胞后制成細胞懸液，由于動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性，B錯誤。
4．(2024·汕頭高三調(diào)研)甲型流感單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細胞在克隆化培養(yǎng)過程中來自B淋巴細胞的染色體往往出現(xiàn)隨機丟失現(xiàn)象，不考慮基因互作和其他變異。下列相關敘述錯誤的是(　　)
A．可從多次間歇注射甲型流感疫苗的動物脾臟中篩選獲得已免疫的B淋巴細胞
B．在HAT 選擇培養(yǎng)基上，B淋巴細胞和骨髓瘤細胞均無法長期存活
C．用96孔板培養(yǎng)和篩選雜交瘤細胞時每一個孔盡量只接種一個細胞
D．抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞即具有持續(xù)產(chǎn)生甲型流感抗體的能力
答案　D
解析　雜交瘤細胞在克隆化培養(yǎng)過程中來自B淋巴細胞的染色體往往出現(xiàn)隨機丟失現(xiàn)象，若丟失的染色體含有產(chǎn)生甲型流感抗體的基因，則雜交瘤細胞分泌單克隆抗體的功能將喪失，D錯誤。
5．(2024·武漢高三調(diào)研)CD47是一種細胞膜表面糖蛋白，可與巨噬細胞結合，從而抑制巨噬細胞的吞噬作用。為驗證抗CD47的單克隆抗體可以減弱CD47對巨噬細胞的抑制作用，科學家按照如圖流程進行了實驗，下列敘述錯誤的是(　　)
A．實驗流程中CD47充當抗原的作用
B．融合、篩選得到的雜交瘤細胞不一定能產(chǎn)生抗CD47的單克隆抗體
C．對照組應設置為：巨噬細胞＋正常細胞共培養(yǎng)體系＋單克隆抗體
D．預期實驗結果為實驗組的巨噬細胞的吞噬能力高于對照組
答案　C
解析　用CD47免疫小鼠，則CD47充當抗原，A正確；融合、篩選得到的雜交瘤細胞不一定能產(chǎn)生抗CD47的單克隆抗體，還需要進行專一抗體檢測，B正確；根據(jù)單一變量原則可知，應設置不加單克隆抗體的巨噬細胞和腫瘤細胞的共培養(yǎng)體系作為對照，C錯誤；實驗組中加入的抗CD47的單克隆抗體，與腫瘤細胞表面的CD47發(fā)生特異性結合，從而解除CD47對巨噬細胞的抑制作用，而對照組中沒有加入單克隆抗體，因此，實驗組中吞噬細胞的吞噬指數(shù)顯著高于對照組可驗證上述推測，D正確。
6.細胞毒素類藥物能有效殺傷腫瘤細胞，但也會對健康細胞造成傷害，科學家將細胞毒素與單克隆抗體結合制成抗體—藥物偶聯(lián)物(ADC)，ADC又被稱作“生物導彈”，通常由抗體、接頭和藥物三部分組成(如圖所示)。下列相關敘述錯誤的是(　　)
A．雜交瘤細胞釋放單克隆抗體，體現(xiàn)了細胞膜的流動性
B．接頭的結構不穩(wěn)定會導致藥物分子脫落，造成正常細胞被破壞
C．ADC中的抗體能特異性識別并殺傷腫瘤細胞
D．利用放射性同位素或熒光標記的單克隆抗體可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病
答案　C
解析　單克隆抗體由雜交瘤細胞通過胞吐的方式釋放，體現(xiàn)了細胞膜的流動性，A正確；ADC通常由抗體、接頭和藥物三部分組成，如果接頭的結構不穩(wěn)定會導致藥物分子脫落，則藥物分子失去了靶向性，造成正常細胞被破壞，B正確；單克隆抗體能與抗原特異性結合，這種靶向作用使ADC中的藥物對腫瘤細胞進行殺傷，而不是抗體殺傷腫瘤細胞，C錯誤；利用放射性同位素或熒光標記的單克隆抗體可定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病，該過程利用了抗原—抗體特異性結合原理，D正確。
7．(2024·常州高三模擬)CD47是一種在多種細胞中廣泛表達的跨膜糖蛋白，能夠與巨噬細胞膜上的受體結合，并抑制其吞噬作用。結腸癌等多種癌細胞表面的CD47含量比正常細胞高1.6～5倍。科研人員制備抗CD47的單克隆抗體，以探究其對巨噬細胞吞噬作用的影響。下列說法正確的是(　　)
A．編碼CD47的基因是一種原癌基因
B．制備抗CD47的單克隆抗體過程中需為細胞提供95%O2、5%CO2的氣體環(huán)境
C．制備抗 CD47的單克隆抗體過程中可利用CD47篩選出目標雜交瘤細胞
D．將細胞毒素與抗CD47單克隆抗體偶聯(lián)到一起，可實現(xiàn)對癌細胞的精準殺傷
答案　C
解析　由題意可知，編碼CD47的基因不是原癌基因，因為它的作用是通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能來影響腫瘤細胞的生長和轉移，而不是通過直接影響細胞的增殖和分化來促進癌癥的發(fā)生，A錯誤；制備抗CD47的單克隆抗體過程中，細胞需在含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，B錯誤；目標雜交瘤細胞可產(chǎn)生抗CD47抗體，可利用CD47篩選出目標雜交瘤細胞，C正確；正常細胞表面也含有CD47，對癌細胞精準殺傷應選擇癌細胞特有蛋白質，D錯誤。
8．(2024·廈門高三質檢)如圖表示雙抗體夾心法，該方法是醫(yī)學上常用的定量檢測抗原的方法，利用細胞工程技術制備的單克隆抗體能增強該過程的有效性，下列相關敘述錯誤的是(　　)
A．加入酶標抗體的目的是通過測定酶反應產(chǎn)物量來判斷待測抗原量
B．固相抗體和酶標抗體雖都能與抗原結合，但二者仍具有不同的結構
C．將相關抗原注射到小鼠體內(nèi)，目的是從小鼠脾中獲得所需的單克隆抗體
D．反應體系中兩種抗體的量相對于待檢抗原需過量以確保檢測結果的準確性
答案　C
解析　反應體系中固相抗體的作用是固定待測抗原，酶標抗體的作用是與待測抗原結合并由酶催化檢測底物反應，這樣就可以通過測定酶促反應產(chǎn)物量來判斷待測抗原量，兩種抗體的量相對于待檢抗原需過量以確保檢測結果的準確性，A、D正確；抗體與抗原的結合具有特異性，因此不同抗體可與同一抗原表面的不同部位結合，固相抗體和酶標抗體具有不同的結構，B正確；將相關抗原注射到小鼠體內(nèi)，目的是從小鼠脾臟中獲得相應的B淋巴細胞，不能直接得到單克隆抗體，C錯誤。
9．(2024·蘇州高三模擬)2017年11月，世界上首個體細胞克隆猴“中中”在我國誕生，同年“華華”誕生，寓意為“中華”。下列敘述錯誤的是(　　)
A．“中中”和“華華”的培育過程屬于無性生殖
B．克隆猴培育過程利用的技術有核移植、體外受精和胚胎移植
C．卵母細胞中含有大量的營養(yǎng)物質，并含有誘導體細胞核表現(xiàn)全能性的物質
D．可采用電融合法使供體細胞和去核卵母細胞融合
答案　B
解析　克隆猴涉及的生物工程技術有核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植，不涉及體外受精，B錯誤。
10．科學家采集了一只一歲半的、睡眠紊亂最明顯的BMAL1(生物節(jié)律基因)敲除猴A6的體細胞，通過體細胞核移植技術，獲得了5只克隆猴——這是國際上首次成功構建的一批遺傳背景一致的生物節(jié)律紊亂獼猴模型。下列相關敘述錯誤的是(　　)
A．體細胞核移植技術的基礎是動物細胞培養(yǎng)
B．5只克隆猴細胞的核基因型與核供體細胞的完全一致
C．取自新鮮卵巢的卵母細胞可以直接作為受體細胞使用
D．該研究可以彌補實驗獼猴繁殖周期長、單胎數(shù)量少的不足
答案　C
解析　動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎，A正確；克隆猴細胞核基因型與核供體細胞完全一致，細胞質基因來源于受體細胞，B正確；取自新鮮卵巢的卵母細胞需培養(yǎng)到MⅡ期，才能作為受體細胞使用，C錯誤。
11．2017年，某國批準了首例使用細胞核移植技術培育“三親嬰兒”的申請。其培育過程可選用如下技術路線。
下列敘述錯誤的是(　　)
A．卵母細胞捐獻者攜帶的紅綠色盲基因能夠遺傳給“三親嬰兒”
B．該技術可以有效避免母親線粒體DNA中的致病基因遺傳給后代
C．捐贈者的卵子去核實質是指去除細胞中的紡錘體—染色體復合物
D．“三親嬰兒”同時擁有自己父親、母親及卵母細胞捐獻者的部分基因
答案　A
解析　捐獻者攜帶的紅綠色盲基因位于其細胞核內(nèi)，而捐獻者給“三親嬰兒”提供的是卵母細胞的細胞質，故捐獻者攜帶的紅綠色盲基因不能遺傳給“三親嬰兒”，A錯誤；母親為“三親嬰兒”提供的是卵母細胞的細胞核，后代的線粒體基因來自捐獻者的卵母細胞，故該技術可避免母親的線粒體遺傳病基因傳遞給后代，B正確；“三親嬰兒”的細胞核基因一半來自母親，一半來自父親，細胞質基因來自卵母細胞捐獻者，所以“三親嬰兒”同時擁有自己父親、母親及卵母細胞捐獻者的部分基因，D正確。
12．(2024·河北衡水中學高三模擬)iPS細胞被稱為誘導多能干細胞，可通過轉入相關因子來制備。iPS細胞最初是由成纖維細胞轉化而來，后來發(fā)現(xiàn)已分化的T細胞、B細胞等也能被誘導成該類細胞。下列說法錯誤的是(　　)
A．導入的物質可以是DNA、蛋白質，還可用小分子物質來誘導
B．iPS細胞的體外培養(yǎng)需要在無菌的CO2培養(yǎng)箱中進行
C．T細胞、B細胞能被誘導為iPS細胞，說明體內(nèi)細胞的分化是可逆的
D．與胚胎干細胞相比，iPS細胞具有細胞來源廣泛，不需要破壞胚胎等優(yōu)點
答案　C
解析　目前已采用多種方法來制備iPS細胞，包括借助載體將特定的基因導入細胞中，直接將特定蛋白導入細胞中或者用小分子化合物等來誘導形成iPS細胞，A正確；iPS細胞的體外培養(yǎng)是利用動物細胞培養(yǎng)技術，需要在無菌的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，B正確；T細胞、B細胞能被誘導為iPS細胞，說明離體的、已分化的細胞經(jīng)過誘導可轉化為未分化的狀態(tài)，C錯誤。
13．(2024·重慶高三月考)一種雜交瘤細胞只能產(chǎn)生一種抗體，抗體由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈構成。科研人員通過動物細胞融合技術將兩種不同的雜交瘤細胞(A和B)融合形成雙雜交瘤細胞AB，雙雜交瘤細胞能夠懸浮在液體培養(yǎng)基中生長繁殖，產(chǎn)生的雙特異性抗體AB如圖所示。下列相關說法不正確的是(　　)
A．若雙特異性抗體應用于腫瘤治療，則α、β抗原中至少有一種為癌細胞表面抗原
B．雙雜交瘤細胞無需識別α、β抗原，就能產(chǎn)生雙特異性抗體
C．對培養(yǎng)到一定密度的雙雜交瘤細胞進行傳代培養(yǎng)時，無需使用胰蛋白酶處理
D．雙雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體可與α、β兩種抗原同時結合，說明該抗體不具備特異性
答案　D
解析　若雙特異性抗體應用于腫瘤治療，則α、β抗原中至少有一種為癌細胞表面抗原，這樣才能保證藥物定向作用于癌細胞，A正確；雜交瘤細胞是由已免疫的B細胞和骨髓瘤細胞融合得到的，無需接觸抗原就能產(chǎn)生抗體，B正確；雜交瘤細胞是懸浮培養(yǎng)的細胞，在進行傳代培養(yǎng)時，懸浮培養(yǎng)的細胞直接用離心法收集，無需使用胰蛋白酶處理，C正確；雙雜交瘤細胞產(chǎn)生的抗體可與α、β兩種抗原同時結合，但不能與其他抗原結合，因此該抗體具備特異性，D錯誤。
14．(2024·長沙高三模擬)在體細胞克隆猴培育過程中，為調(diào)節(jié)相關基因的表達，提高胚胎的發(fā)育率和妊娠率，研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重構胚，同時用組蛋白脫乙酰酶抑制劑(TSA)處理，具體流程如圖所示。下列相關敘述錯誤的是(　　)
A．常用顯微操作法去除由核膜包被的卵母細胞的細胞核
B．去核時使用的梯度離心、紫外光照射和化學物質處理等方法都沒有穿透卵母細胞透明帶
C．滅活的仙臺病毒可使細胞膜上的蛋白質和脂質分子重新排布，利于融合
D．組蛋白去甲基化和乙酰化的表觀遺傳修飾都有利于重構胚的分裂和發(fā)育
答案　A
解析　常用顯微操作法去除卵母細胞的細胞核，而此處的細胞核是紡錘體—染色體復合物，不具有核膜，A錯誤；目前動物細胞核移植技術中普遍使用的去核方法是顯微操作法，也有人采用梯度離心、紫外線短時間照射和化學物質處理等方法，這些方法是在沒有穿透卵母細胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性，B正確；滅活的仙臺病毒可使細胞膜上的蛋白質和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，C正確；研究人員將組蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重構胚，同時用組蛋白脫乙酰酶抑制劑TSA處理，有利于重構胚的分裂和發(fā)育，使其完成細胞分裂和發(fā)育進程，D正確。
二、非選擇題
15．(2022·福建，13節(jié)選)美西螈具有很強的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細胞的作用機制，科研人員制備了抗巨噬細胞表面標志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下。回答下列問題：
(1)步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射____________和________________________________。
(2)步驟②所用的SP2/0細胞的生長特點是________________。
(3)吸取③中的上清液到④的培養(yǎng)孔中，根據(jù)抗原—抗體雜交原理，需加入____________進行專一抗體檢測，檢測過程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細胞不能分泌抗CD14抗體，原因是___________
______________________________________________________________________________。
(4)步驟⑥從____________中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測巨噬細胞。
答案　(1)CD14蛋白(CD14抗原)　分泌抗CD14抗體的雜交瘤細胞　(2)能無限增殖　(3)CD14蛋白　參與形成雜交瘤細胞的B淋巴細胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體　(4)小鼠腹水

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