資源簡介

高二 年級 生物 學(xué)科 選擇性必修二 課時教學(xué)設(shè)計
課題 基因工程的基本操作程序 課時 2
主備 輔備
課型 新授課 □復(fù)習(xí)課 □習(xí)題/試卷講評課 □實(shí)踐活動課
一、教學(xué)內(nèi)容分析
課程標(biāo)準(zhǔn)要求： 1.運(yùn)用系統(tǒng)思想解釋基因工程的基本步驟和原理 2.結(jié)合資料和示意圖闡明PCR的原理，說出PCR所需的條件及其反應(yīng)過程 3.結(jié)合模式圖說出基因表達(dá)載體的組成，并理解構(gòu)建目的基因 （二）核心素養(yǎng)要求： 1.文化基礎(chǔ)：明確基因工程的操作步驟及PCR擴(kuò)增技術(shù)的應(yīng)用。 2.自主發(fā)展：嘗試進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲取產(chǎn)品。 （三）前后知識聯(lián)系： 學(xué)生已經(jīng)學(xué)過(重組DNA技術(shù)的工具)，本節(jié)課的內(nèi)容就是在此基礎(chǔ)上的發(fā)展。由于它還與后面的基因工程的基本操作程序（第2課時）有聯(lián)系,所以在本學(xué)科中的作用是（承上啟下）。
二、學(xué)情分析
在本節(jié)課的教學(xué)中，學(xué)生可能遇到的問題是：（不能正確理解基因工程的操作步驟及PCR擴(kuò)增技術(shù)的應(yīng)用），產(chǎn)生這一問題的原因是（基因工程的操作步驟及PCR擴(kuò)增技術(shù)的應(yīng)用比較難），解決的關(guān)鍵辦法是（理論聯(lián)系生活實(shí)際，多使用多媒體，激發(fā)學(xué)生的興趣。）
三、重點(diǎn)難點(diǎn)分析
1.教學(xué)重點(diǎn)是(說出PCR所需的條件及其反應(yīng)過程)，解決重點(diǎn)的關(guān)鍵是(在教學(xué)中要善于聯(lián)系生活，從生活中來，到生活中去 )。 2.教學(xué)難點(diǎn)是說出基因表達(dá)載體的組成()，解決難點(diǎn)的關(guān)鍵是( 運(yùn)用圖示和演示實(shí)驗(yàn)等方法闡釋，以及利用生活實(shí)際中的問題與生物知識相聯(lián)系)。
四、教學(xué)活動設(shè)計 基于問題解決的設(shè)計 □講授式設(shè)計 □自主探究式設(shè)計 □合作交流式設(shè)計
活動程序一 【深度學(xué)習(xí)】 課前自學(xué)、導(dǎo)學(xué)（用時5分鐘內(nèi)）
師生 活動 教師對上次課限時訓(xùn)練講評。 圖文情境導(dǎo)入： 展示圖片 自上個世紀(jì)90年代以來，由于棉鈴蟲在我國大部分棉區(qū)持續(xù)性大發(fā)生或爆發(fā)，給棉花生產(chǎn)帶來了巨大的威脅，棉農(nóng)談“蟲”色變，僅1992年一年即造成直接經(jīng)濟(jì)損失60多億元，間接損失超過100億元，對整個國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成了很大影響。同時由于棉鈴蟲的大爆發(fā)，防蟲治蟲使棉花的生產(chǎn)成本增加，植棉的比較效益降低。 1997年，我國政府首次批準(zhǔn)商業(yè)化種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉。到2015年，我國已育成轉(zhuǎn)基因抗蟲棉新品種100多個，減少農(nóng)藥用量40萬噸，增收節(jié)支社會經(jīng)濟(jì)效益450億元。 展示學(xué)習(xí)目標(biāo)： 4、學(xué)生自主梳理本課知識，發(fā)現(xiàn)問題：
【設(shè)計意圖】激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣
活動程序二 【深度學(xué)習(xí)】即本課學(xué)習(xí) 教師根據(jù)本次課教學(xué)需要組合選用自學(xué)、互學(xué)、模仿等相關(guān)環(huán)節(jié)，用時25-40分鐘。
大問題一（請列出具體學(xué)習(xí)任務(wù)簡稱）：目的基因的篩選與獲取
呈現(xiàn)知識小問題串或情境或知識清單 問題1 利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需要提供哪些條件？ 問題2 什么是引物？PCR過程中為什么需要引物？ 問題3 PCR過程中兩種引物的堿基序列能否互補(bǔ)？說明理由。
【模仿變通】變式、訓(xùn)練 例題1. 1.目的基因就是指編碼蛋白質(zhì)的基因(　 　) 2.從已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中篩選目的基因是獲取目的基因的一種有效方法。（ ） 3.用PCR方法擴(kuò)增目的基因時不必知道基因的全部序列(　 　) 4.用PCR方法擴(kuò)增目的基因時需要設(shè)計兩種引物(　 　) 5．Taq酶是用PCR儀對DNA分子擴(kuò)增過程中常用的一種耐高溫的DNA連接酶。（ ）6．基因表達(dá)載體中啟動子是DNA聚合酶識別和結(jié)合的部位。 ( ) 變式題1利用PCR技術(shù)從某種生物的基因組DNA中獲取目的基因。有關(guān)這一過程下列說法錯誤的是(　　) A.有目的基因的DNA片段作為模板 B.目的基因的一段核苷酸序列已知,以便根據(jù)這一序列合成兩種引物 C.有足夠的脫氧核苷酸作為原料 D.加入足夠數(shù)量的DNA連接酶進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)
【師生活動】 【布置任務(wù)】 任務(wù)一：學(xué)生自主閱讀課本，完成下列問題。 （一）閱讀課本76頁和77頁1-3段及第一個相關(guān)信息，明確目的基因的概念和實(shí)例；篩選合適的目的基因的方法。 1.目的基因 （1）概念：用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因； （主要是編碼特定蛋白質(zhì)的基因，也可以是具有調(diào)控作用的因子） （2）實(shí)例：與生物抗逆性、優(yōu)良品質(zhì)、生產(chǎn)藥物、毒物降解和工業(yè)用酶等相關(guān)的基因。（Bt抗蟲蛋白基因：轉(zhuǎn)基因抗蟲棉）。 2.篩選合適的目的基因 方法：從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中篩選。 （二）閱讀課本77頁第4-6段和表3-1及第二個相關(guān)信息，閱讀78和79頁，明確目的基因獲取的方法，并對這種方法的概念、條件和過程進(jìn)行詳細(xì)分析。 3.目的基因的獲取 （一）方法：利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因 通過閱讀，培養(yǎng)學(xué)生獲取信息的能力，加深學(xué)生對概念的理解，激發(fā)學(xué)生的科學(xué)研究的興趣。 （二）概念 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。 【舊知回顧】 （三）條件 （四）過程：變性→復(fù)性→延伸 【當(dāng)溫度上升到90℃以上時，雙鏈DNA解聚為單鏈。】 變性：加熱至90～95℃，雙鏈DNA間的氫鍵斷裂，解旋為單鏈。使用耐高溫的Taq酶保證高溫條件下仍具有活性。 【當(dāng)溫度下降到50℃左右時，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合。】 通過回憶體內(nèi)DNA復(fù)制所需的基本條件及每個組分在復(fù)制過程中所發(fā)揮的作用，類比PCR激素所需要的條件，提高學(xué)生分析問題，解決問題的能力。 復(fù)性：冷卻至55～60℃，兩條引物與單鏈DNA結(jié)合 引物結(jié)合在模板DNA鏈的3’端，新合成的子鏈方向?yàn)?’到3’。 【當(dāng)溫度上升到72℃左右時，溶液中的4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。】 延伸：加熱至70～75℃，以目的基因?yàn)槟０澹铣苫パa(bǔ)的新DNA鏈。 【第一輪循環(huán)的產(chǎn)物作為第二輪反應(yīng)的模板，經(jīng)過變性、復(fù)性和延伸三步產(chǎn)生第二輪循環(huán)的產(chǎn)物。】 第一輪結(jié)束：此時目的基因的量是原始的2倍。 【布置任務(wù)】 任務(wù)一：學(xué)生自主閱讀課本，完成下列問題。 （一）閱讀課本76頁和77頁1-3段及第一個相關(guān)信息，明確目的基因的概念和實(shí)例；篩選合適的目的基因的方法。 1.目的基因 （1）概念：用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因； （主要是編碼特定蛋白質(zhì)的基因，也可以是具有調(diào)控作用的因子） （2）實(shí)例：與生物抗逆性、優(yōu)良品質(zhì)、生產(chǎn)藥物、毒物降解和工業(yè)用酶等相關(guān)的基因。（Bt抗蟲蛋白基因：轉(zhuǎn)基因抗蟲棉）。 2.篩選合適的目的基因 方法：從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中篩選。 （二）閱讀課本77頁第4-6段和表3-1及第二個相關(guān)信息，閱讀78和79頁，明確目的基因獲取的方法，并對這種方法的概念、條件和過程進(jìn)行詳細(xì)分析。 3.目的基因的獲取 （一）方法：利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因 （二）概念 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。 【舊知回顧】 （三）條件 （四）過程：變性→復(fù)性→延伸 【當(dāng)溫度上升到90℃以上時，雙鏈DNA解聚為單鏈。】 變性：加熱至90～95℃，雙鏈DNA間的氫鍵斷裂，解旋為單鏈。使用耐高溫的Taq酶保證高溫條件下仍具有活性。 【當(dāng)溫度下降到50℃左右時，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合。】 復(fù)性：冷卻至55～60℃，兩條引物與單鏈DNA結(jié)合 引物結(jié)合在模板DNA鏈的3’端，新合成的子鏈方向?yàn)?’到3’。 【當(dāng)溫度上升到72℃左右時，溶液中的4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。】 延伸：加熱至70～75℃，以目的基因?yàn)槟０澹铣苫パa(bǔ)的新DNA鏈。 【第一輪循環(huán)的產(chǎn)物作為第二輪反應(yīng)的模板，經(jīng)過變性、復(fù)性和延伸三步產(chǎn)生第二輪循環(huán)的產(chǎn)物。】 第一輪結(jié)束：此時目的基因的量是原始的2倍。 【第二輪循環(huán)的產(chǎn)物作為第三輪反應(yīng)的模板，經(jīng)過變性、復(fù)性和延伸三步產(chǎn)生第三輪循環(huán)的產(chǎn)物。】 第二輪結(jié)束：此時目的基因的量是原始的22倍。 （五）擴(kuò)增方式：以指數(shù)方式擴(kuò)增，即2n（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)） （1）若開始只有一個DNA提供模板，則循環(huán)n次后獲得的子代DNA數(shù)目為2n個。 （2）若開始有N個DNA提供模板，則循環(huán)n次后獲得的子代DNA數(shù)目為NX2n個。 （三）對比PCR與DNA復(fù)制過程，完成下表
【設(shè)計意圖】從實(shí)例中概括概念，培養(yǎng)學(xué)生溝通、交流能力，增強(qiáng)團(tuán)隊合作意識，提升學(xué)生的概括總結(jié)能力。
大問題二（請列出具體學(xué)習(xí)任務(wù)簡稱）：基因表達(dá)載體的構(gòu)建
呈現(xiàn)知識小問題串或情境或知識清單 問題1 為什么必須構(gòu)建基因表達(dá)載體？ 問題2 假設(shè)圖中利用同一種限制酶切割質(zhì)粒和外源DNA片段，分別產(chǎn)生幾個黏性末端？ 問題3 構(gòu)建基因表達(dá)載體時往往用兩種限制酶分別切割目的基因的兩端以及載體，請分析原因。作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？
【模仿變通】變式、訓(xùn)練 例題2.下列對基因工程中基因表達(dá)載體的敘述,錯誤的是(　　) A.基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因不一定是抗生素抗性基因 B.基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心 C.基因表達(dá)載體中一定不含有起始密碼子和終止密碼子 D.基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要使用限制性內(nèi)切核酸酶和DNA聚合酶等特殊工具 變式題2.在基因表達(dá)載體的構(gòu)建中,下列說法中不正確的是(　　) ①一個表達(dá)載體的組成只需目的基因、啟動子、終止子　②表達(dá)載體有了啟動子才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA　③終止子的作用是使轉(zhuǎn)錄在相應(yīng)地方停止　④所有基因表達(dá)載體的構(gòu)建是完全相同的 A.②③ B.①④ C.①② D.③④
【師生活動】任務(wù)二：學(xué)生自主閱讀課本，完成下列問題。 （一）閱讀課本80頁1-3段，結(jié)合圖3-6，明確基因表達(dá)載體的目的、組成和過程。 1.基因表達(dá)載體的目的 （1）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，且可以遺傳給下一代； （2）使目的基因能夠在受體細(xì)胞中表達(dá)和發(fā)揮作用。 2.基因表達(dá)載體的組成 3.基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程 【思考】使用一種DNA限制酶進(jìn)行切割，共有幾種連接情況？ 應(yīng)用過程中往往選擇2種不同的限制酶同時對目的基因和質(zhì)粒切割，減少自連情況出現(xiàn)。
【設(shè)計意圖】通過問答式教學(xué)引發(fā)學(xué)生求知欲望，通俗易懂 理解到位
活動程序三【學(xué)以致用】：檢測反饋 約占本次課的10分鐘內(nèi)
【目標(biāo)檢測題】 白細(xì)胞介素是一類淋巴因子。研究人員將人白細(xì)胞介素的基因?qū)氲浇湍妇?xì)胞中，使其分泌出有活性的白細(xì)胞介素。 (1)為增加白細(xì)胞介素基因的數(shù)量，可使用______________技術(shù)，但前提是必須知道基因的已知序列，目的是__________________。 (2)在重組載體導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞之前，需用________處理酵母菌，白細(xì)胞介素基因進(jìn)入酵母菌細(xì)胞內(nèi)，并且在其細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程，稱為________。在表達(dá)過程中，啟動子需與________________識別和結(jié)合，從而驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程。 (3)在體液免疫過程中，白細(xì)胞介素是由________細(xì)胞分泌的，為了能成功表達(dá)出白細(xì)胞介素，不使用細(xì)菌，而使用酵母菌細(xì)胞作為受體細(xì)胞，原因可能是____________________。 (4)在分泌型表達(dá)載體和白細(xì)胞介素基因所在的DNA分子上均有多個限制酶的酶切位點(diǎn)，圖示過程為獲得有效表達(dá)的重組載體，使用了EcoRl和EcoR52兩種限制酶，比使用單一的限制酶，其優(yōu)點(diǎn)是____________________________。 2．下列有關(guān)人胰島素基因表達(dá)載體的敘述，正確的是(　　) A．表達(dá)載體中的胰島素基因可通過人肝細(xì)胞mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得 B．表達(dá)載體的復(fù)制和胰島素基因的表達(dá)均啟動于復(fù)制原(起)點(diǎn) C．借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來 D．啟動子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用 八、配餐作業(yè)
活動程序四 【課堂小結(jié)】用時5分鐘內(nèi)
基因工程的基本操作程序 1.目的基因的篩選和獲得 篩選合適目的基因、PCR、 2.基因表達(dá)載體的構(gòu)建 目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子
【學(xué)以致用】作業(yè)設(shè)計之限時訓(xùn)練 分ABC三層，學(xué)生選擇AB或BC題做。用時30-45分鐘，限時完成
A組 1．將兩對PCR引物作特殊的設(shè)計，外側(cè)兩個引物大小為25bp，復(fù)性溫度較高（68℃）；內(nèi)側(cè)兩個引物大小為17bp，復(fù)性溫度較低（46℃）。通過控制復(fù)性溫度（68℃）使外側(cè)引物先行擴(kuò)增，經(jīng)過20～30次循環(huán)后（第一輪PCR結(jié)束），再降低復(fù)性溫度（46℃）使內(nèi)側(cè)引物以第一輪PCR產(chǎn)物為模板進(jìn)行再次擴(kuò)增，整個過程被稱為巢式PCR，該技術(shù)更適用于DNA含量低的待擴(kuò)增的樣品。兩輪PCR反應(yīng)均在一個PCR管中進(jìn)行。下列說法錯誤的是（ ） A．與常規(guī)PCR技術(shù)相比，兩套引物的使用提高了擴(kuò)增的特異性和敏感性 B．第二輪PCR反應(yīng)能否進(jìn)行，是對第一輪PCR反應(yīng)正確性的鑒定 C．復(fù)性溫度與引物長度成正相關(guān) D．在一個PCR管中進(jìn)行兩輪PCR反應(yīng)均使用了相同的模板 2．抗原檢測陰性但臨床仍然高度懷疑甲型流感病毒感染的患者，醫(yī)生會建議做核酸檢測。但等待核酸檢測出報告需較長時間，該檢測實(shí)際采用的技術(shù)是逆轉(zhuǎn)錄PCR，病毒刺突蛋白編碼序列如下圖所示，科研人員為該P(yáng)CR分別設(shè)計了引物A（5'-CCC…TGTATGGGGTTCTAA-3'）和引物B（5'-ACG…ACT①TTA②CTGGTGCAG-3'），已知引物A中ATG對應(yīng)起始密碼子，引物B中TTA對應(yīng)終止密碼子，標(biāo)記基因可以插入刺突蛋白編碼序列的首端或末端。DNA編碼鏈為轉(zhuǎn)錄時所用模板鏈的互補(bǔ)鏈。下列敘述正確的是（ ） A．獲取甲流病毒的遺傳物質(zhì)后直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增以節(jié)省出報告時間 B．?dāng)U增后的基因產(chǎn)物中引物A所在的子鏈?zhǔn)窃摶虻木幋a鏈 C．若標(biāo)記基因需要插入引物B的①或②位置中則應(yīng)選擇①位置 D．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳后在瓊脂糖凝膠中將出現(xiàn)寬度不同的5個條帶 3．綠蘿是一種常見的觀葉植物，幾乎沒有開花的記錄。EaLFY是決定綠蘿開花的關(guān)鍵基因。在研究綠蘿不開花原因的實(shí)驗(yàn)中，科學(xué)家將長勢相同的綠蘿均勻地分為六組，三組不施加赤霉素（-GA3，不開花），另外三組施加赤霉素（+GA3，開花），然后分別取綠蘿的mRNA進(jìn)行RT-PCR處理，得到下圖電泳結(jié)果。已知RT-PCR技術(shù)是將RNA的反轉(zhuǎn)錄（RT）和DNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。下列敘述錯誤的是（ ） A．RT-PCR需要逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA模板、DNA聚合酶、脫氧核苷酸、引物和能量等條件 B．綠蘿EaLFY基因突變導(dǎo)致無法正常表達(dá) C．據(jù)上述實(shí)驗(yàn)可知，綠蘿無法開花的原因可能是自身赤霉素合成障礙 D．赤霉素的合成受基因控制，也會影響基因的表達(dá)過程 4．CD163蛋白是PRRSV病毒感染家畜的受體。為實(shí)時監(jiān)控CD163蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)過程，將紅色熒光蛋白RFP基因與CD163基因拼接在一起（如下圖），使其表達(dá)成一條多肽。該拼接過程的關(guān)鍵步驟是除去（ ） A．CD163基因中編碼起始密碼子的序列 B．CD163基因中編碼終止密碼子的序列 C．RFP基因中編碼起始密碼子的序列 D．RFP基因中編碼終止密碼子的序列 B組 5．大腸桿菌pSC101質(zhì)粒中含有四環(huán)素抗性基因，金黃色葡萄球菌p1258質(zhì)粒中含有氨芐青霉素抗性基因。用限制酶EcoRI分別處理pSC101和p1258，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后分別得到1個和4個條帶。將酶切產(chǎn)物混合后用DNA連接酶處理，然后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中。下列敘述錯誤的是（ ） A．pSC101中至少含有1個EcoRI識別位點(diǎn)，p1258中至少含有4個EcoRI識別位點(diǎn) B．進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時，分子大小相同的DNA片段所形成的條帶可能會重疊在一起 C．DNA連接酶處理酶切產(chǎn)物后，若僅考慮兩種不同DNA片段連接，可得到10種不同序列的DNA片段 D．能在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中存活的大腸桿菌含有p1258的部分基因 6．β-淀粉樣前體蛋白（APP） 基因是一種重要的阿爾獲海默病（AD）發(fā)病關(guān)聯(lián)基因。科學(xué)家嘗試構(gòu)建含人APP基因的轉(zhuǎn)基因小鼠動物模型（如圖），以研究 AD疾病的發(fā)病機(jī)制。 限制性內(nèi)切核酸酶BamHI XhoIBclISacI識別序列及切割位點(diǎn)5'-C↓GATCG-3' 5'C↓TCGAG-3'5'-↓GATC-3'5'-GAGCT↓C3'
注：Ampr為氨芐青霉素抗性基因 若對質(zhì)粒pUC18選用了XhoI和BclI進(jìn)行切割，為實(shí)現(xiàn)其與目的基因相連，可在人APP基因兩端分別添加 。 A．XhoI和BclI的識別序列 B．SacI和BclI的識別序列 C．BclI和BamHI的識別序列 D．SacI和BamHI的識別序列 7．為了制備鵝細(xì)小病毒VP2蛋白的特異性單克隆抗體，科研人員構(gòu)建了含有融合基因（VP2基因與一段引導(dǎo)序列NES）的大腸桿菌表達(dá)載體，受體細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)后能表達(dá)VP2蛋白并將其分泌到細(xì)胞外。利用純化的VP2蛋白兔疫小鼠，采用雜交瘤技術(shù)制備了3株可穩(wěn)定分泌VP2蛋白的單克隆抗體（VP2單抗）的雜交瘤細(xì)胞株。下列敘述錯誤的是（ ） A．引導(dǎo)序列NES的作用可能是介導(dǎo)VP2蛋白分泌到細(xì)胞外 B．VP2單抗的制備利用了重組DNA技術(shù)、細(xì)胞融合等技術(shù) C．體外培養(yǎng)該免疫小鼠的單個B淋巴細(xì)胞也能得到VP2單抗 D．VP2單抗可用于鵝細(xì)小病毒病的診斷和治療 8．為探討發(fā)菜噬菌體休克蛋白A(PspA)基因的功能，根據(jù)NCBI上已發(fā)表的該基因的序列設(shè)計引物PI(橫線部分為KpnⅠ酶切位點(diǎn))和P2(橫線部分為XbaI酶切位點(diǎn))進(jìn)行目的基因的擴(kuò)增，如圖所示。研究發(fā)現(xiàn)，在干旱脅迫下，轉(zhuǎn)PspA基因擬南芥生長狀態(tài)明顯好于野生型。下列相關(guān)敘述錯誤的是 A．?dāng)U增引物上酶切位點(diǎn)序列應(yīng)連在引物的5'端，保證識別位點(diǎn)在目的基因兩側(cè) B．只有轉(zhuǎn)基因擬南芥的根細(xì)胞中存在PspA基因，干旱時基因表達(dá)可提高抗旱性 C．質(zhì)粒上也存在KpnI酶和XbaⅠ酶的識別位點(diǎn)，同時切割以便構(gòu)建基因表達(dá)載體 D．引物上存在兩種限制酶識別序列可防止酶切后目的基因自身環(huán)化以及DNA片段任意連接 C 組 9．風(fēng)肉一般是以鮮肉為原料，用食鹽腌制后，經(jīng)風(fēng)干和微生物后發(fā)酵而成。在后發(fā)酵期，風(fēng)肉含有耐鹽的微生物。某實(shí)驗(yàn)小組為研究耐鹽微生物的耐鹽基因，設(shè)計實(shí)驗(yàn)如下。回答下列問題。 (1)實(shí)驗(yàn)小組為獲得耐鹽純培養(yǎng)物A，使用的培養(yǎng)基應(yīng)是 （選填“普通培養(yǎng)基”或“選擇培養(yǎng)基”），使用的接種方法是 。 (2)為獲得純培養(yǎng)物A的耐鹽基因X，實(shí)驗(yàn)小組應(yīng)用純培養(yǎng)物提取了DNA。在一定溫度下，用二苯胺試劑對DNA進(jìn)行檢測，二苯胺檢測DNA的原理是 。獲得PCR產(chǎn)物后，用瓊脂糖凝膠電泳對PCR產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，影響DNA分子遷移速率的主要因素有 （答出兩點(diǎn)即可）。 (3)構(gòu)建成功的表達(dá)載體將運(yùn)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)技術(shù)轉(zhuǎn)入某農(nóng)作物，可獲得耐鹽轉(zhuǎn)基因植株。與同種非轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA序列相比，轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA含有 。 (4)為驗(yàn)證已獲得的耐鹽轉(zhuǎn)基因植株具有耐鹽性，需設(shè)計實(shí)驗(yàn)。寫出實(shí)驗(yàn)思路 。 10．宮頸癌的發(fā)生與人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染有關(guān)，其中HPV16、18、31、45型是宮頸癌的高危型，E7蛋白是HPV16型重要的抗原標(biāo)志蛋白。我國研究人員以釀酒酵母菌為表達(dá)載體，成功構(gòu)建表達(dá)HPV16型E7蛋白的轉(zhuǎn)基因重組全釀酒酵母疫苗。圖1表示擬轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒上某片段及其上的酶切位點(diǎn)分布，圖2表示各限制酶識別序列和切割位點(diǎn)。 (1)研究人員首先需要利用PCR技術(shù)從HPV16型的基因組中獲取E7蛋白基因的DNA序列，以 為原料合成子鏈，擴(kuò)增6次需要引物B 個。 (2)為了將獲得的E7蛋白基因準(zhǔn)確連接至圖1中的質(zhì)粒上，需要在引物A和引物B的 （填“5′”或“3'”）端分別添加 限制酶的識別序列。若決定E7蛋白的mRNA的堿基序列為5'-AUGAGCTAC…（中間序列）…CAACGTAGA—3',理論上應(yīng)設(shè)計引物A的前12個堿基序列為5' -3'。 (3)控制表達(dá)載體大量擴(kuò)增的組成元件是 ,該結(jié)構(gòu)發(fā)揮作用時通常需要的酶是 。 (4)HPV16型E7蛋白疫苗注入人體后作為抗原，可以刺激機(jī)體的B淋巴細(xì)胞增殖分化成為 。在預(yù)防接種疫苗時通常需要多次注射，但是相鄰的兩次注射之間需要間隔一定的時期，原因是 。
六、課后教學(xué)反思

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