資源簡介

微生物的基本培養技術
學習目標 1.能概述培養基的成分和配制方法2.能區分消毒和滅菌，掌握不同物品的滅菌方法3.能概述微生物純培養的基本操作要求
學習任務
目標一：能概述培養基的成分和配制方法任務1：結合提供的資料，分析不同培養基營養成分的異同資料一：配制培養酵母菌的培養基：稱取去皮的馬鈴著200g，切成小塊，加水1000 mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20 g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000 mL。（100 g馬鈴薯中含有80 g水、2g蛋白質、16 g碳水化合物，還有維生素、無機鹽等。）資料二：1000 mL 牛肉膏蛋白胨培養基的營養構成組分含量提供的主要營養牛肉膏5 g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10 g氮源和維生素等NaCl5 g無機鹽H2O定容至1 000 mL水任務2：現有4種微生物：藍細菌、硝化細菌、根瘤菌、大腸桿菌，請任選一種微生物，設計一份培養該種微生物的培養基成分表。
目標二：能區分消毒和滅菌，掌握不同物品的滅菌方法任務：閱讀課本P10—11，完成相關表格，比較消毒和滅菌的不同項目條件結果常用方法應用范圍消毒滅菌【思考與討論】在新冠肺炎疫情期間,人們對環境和食品的衛生重視程度空前高。在疫情期間,護士在離開病區時進行自我清潔,普通人對食物、快遞的外包裝和電梯的墻壁等外表面和空氣進行消毒。思考以下問題。（1）對食物、快遞的外包裝和電梯的墻壁等外表面、空氣、培養基、培養皿進行消毒或滅菌的方法分別用什么 （2）以上這些消毒或滅菌的原理是什么 目標三：能概述微生物純培養的基本操作要求任務：觀看倒平板和平板劃線操作的視頻，進行倒平板和平板劃線操作演練 【思考與討論】1.倒平板時，培養基冷凝后，為什么要將平板倒置？2.接種操作時每次劃線接種前與接種后都要灼燒接種環或接種針，其目的分別是什么？3.在做第二次劃線以及其后的操作時,為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線 為何最后一次劃線不能與第一次劃線相連 【練一練】微生物接種方法很多,平板劃線法是最常用的一種。右圖是平板劃線示意圖,劃線的順序為①②③④。下列操作方法錯誤的是(　　)。A.劃線操作時,將蘸有菌種的接種環插入培養基B.不能將第④區域的劃線與第①區域的劃線相連C.在②~④區域中劃線前后都要對接種環進行滅菌D.正常情況下,①區域的菌落數量最多
總結：
2微生物的基本培養技術
學習目標 1.能概述培養基的成分和配制方法2.能區分消毒和滅菌，掌握不同物品的滅菌方法3.能概述微生物純培養的基本操作要求
學習任務
引入： 創設情境：
目標一：能概述培養基的成分和配制方法任務1：結合提供的資料，分析不同培養基營養成分的異同資料一：配制培養酵母菌的培養基：稱取去皮的馬鈴著200g，切成小塊，加水1000 mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20 g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000 mL。（100 g馬鈴薯中含有80 g水、2g蛋白質、16 g碳水化合物，還有維生素、無機鹽等。）資料二：1000 mL 牛肉膏蛋白胨培養基的營養構成組分含量提供的主要營養牛肉膏5 g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10 g氮源和維生素等NaCl5 g無機鹽H2O定容至1 000 mL水【提示】都含有水、碳源、氮源、無機鹽和維生素等，其中培養酵母菌的培養基中主要由糖類提供碳源，蛋白質提供氮源，牛肉膏蛋白胨培養基中主要由牛肉膏提供碳源，主要由蛋白胨提供氮源。【知識總結】培養基需要的成分及其作用和主要來源營養物質功能主要來源碳源能為微生物代謝提供碳元素①構成生物體的細胞物質和一些代謝產物②有機碳既是異養生物的碳源又是能源物質①無機碳源：CO2、NaHCO3等；②有機碳源：糖類、脂質、蛋白質、有機酸等氮源能為微生物的代謝提供氮元素合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物①無機氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；②有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等水①優良的溶劑②維持生物大分子結構的穩定外界攝入無機鹽①細胞內的組成成分②生理調節物質③某些化能自養菌的能源④酶的激活劑無機化合物任務2：現有4種微生物：藍細菌、硝化細菌、根瘤菌、大腸桿菌，請任選一種微生物，設計一份培養該種微生物的培養基成分表。【提示】微生物碳源氮源其他成分藍細菌CO2NH4+、NO3-等水、無機鹽、其他特殊營養物質、提供光能硝化細菌CO2NH3水、無機鹽、其他特殊營養物質根瘤菌糖類等有機物N2水、無機鹽、其他特殊營養物質大腸桿菌糖類、蛋白質等有機物蛋白質等水、無機鹽、其他特殊營養物質【方法指導】不同種類的微生物代謝特點不同,對培養基中營養物質的需求也不同,因此培養不同的微生物,需按其營養特點配制培養基。如:(1)自養型微生物所需的主要營養物質是無機鹽,碳源可來自大氣中的CO2,氮源可由含氮無機鹽提供。(2)異養型微生物所需的營養物質主要是有機物,即碳源必須由有機物提供,氮源也主要由有機物提供,部分異養型微生物也可以利用無機氮源。【知識總結】1.培養基的配制原則(1)目的要明確:配制時應根據微生物的種類、培養目的等確定配制的培養基種類。(2)營養要協調:注意各種營養物質的濃度和比例,要根據微生物對營養的需求特點合理調整,自養型微生物的培養基主要以無機營養為主,異養型微生物的培養基主要以有機營養為主。(3)pH要適宜:細菌為7.0~8.0,放線菌為7.5~8.5,真菌為5.0~6.0,培養不同微生物所需的pH不同。
目標二：能區分消毒和滅菌，掌握不同物品的滅菌方法任務：閱讀課本P10—11，完成相關表格，比較消毒和滅菌的不同項目條件結果常用方法應用范圍消毒較為溫和的物理、化學或生物等方法僅殺死物體表面或內部的部分微生物煮沸消毒日常用品巴氏消毒不耐高溫的液體化學藥劑消毒用酒精擦拭雙手,用氯氣消毒水源滅菌強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物,包括芽孢和孢子灼燒滅菌接種工具干熱滅菌玻璃器皿、金屬工具濕熱滅菌培養基及容器【思考與討論】在新冠肺炎疫情期間,人們對環境和食品的衛生重視程度空前高。在疫情期間,護士在離開病區時進行自我清潔,普通人對食物、快遞的外包裝和電梯的墻壁等外表面和空氣進行消毒。思考以下問題。（1）對食物、快遞的外包裝和電梯的墻壁等外表面、空氣、培養基、培養皿進行消毒或滅菌的方法分別用什么 【提示】許多食物一般通過加熱煮沸消毒,對牛奶等為了保留食物的營養可進行巴氏消毒,對快遞的外包裝和電梯的墻壁等外表面可通過噴灑化學藥劑進行消毒,對空氣可通過紫外線進行消毒、培養基是高壓蒸汽滅菌，培養皿用干熱滅菌。（2）以上這些消毒或滅菌的原理是什么 【提示】　煮沸消毒、巴氏消毒是利用高溫導致蛋白質變性,從而導致微生物死亡;化學藥劑消毒是利用化學藥劑殺死各種微生物;紫外線可以破壞微生物DNA的結構,從而導致微生物死亡。滅菌都是利用高溫使微生物的蛋白質變性。目標三：能概述微生物純培養的基本操作要求任務：觀看倒平板和平板劃線操作的視頻，進行倒平板和平板劃線操作演練 【思考與討論】1.倒平板時，培養基冷凝后，為什么要將平板倒置？【提示】既可以防止培養基表面的水分揮發；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。2.接種操作時每次劃線接種前與接種后都要灼燒接種環或接種針，其目的分別是什么？【提示】取菌種前：殺死接種環上原有的微生物。每次劃線前：殺死上次劃線時殘留的菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數目逐漸減少，直至得到單個細胞。 接種結束后：殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。3.在做第二次劃線以及其后的操作時,為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線 為何最后一次劃線不能與第一次劃線相連 【提示】劃線后末端含有的細菌數目較少,每次從上一次的末端開始劃線能夠使細菌的數目隨劃線次數的增加而逐漸減少,最終分散成單個細胞。最后一次劃線已經將細菌稀釋成單個細胞,如果與第一次劃線相連則增加了細菌的數目,達不到純化的效果。【歸納總結】平板劃線法操作的注意事項(1)第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環滅菌,劃線操作結束后仍需灼燒接種環,每次灼燒的目的如下表所示。項目第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結束后灼燒目的避免接種環上可能存在的微生物污染培養物殺死上次劃線結束后接種環上殘留的菌種,使每次劃線的菌種來自上次劃線的末端殺死接種環上殘留的菌種,避免菌種污染環境和感染操作者(2)灼燒接種環后,要待其冷卻才能伸入菌液,以免溫度太高殺死菌種。(3)劃線時最后一區不要與第一區相連。(4)劃線時用力要大小適當,防止用力過大將培養基劃破。【練一練】微生物接種方法很多,平板劃線法是最常用的一種。右圖是平板劃線示意圖,劃線的順序為①②③④。下列操作方法錯誤的是(　A　)。A.劃線操作時,將蘸有菌種的接種環插入培養基B.不能將第④區域的劃線與第①區域的劃線相連C.在②~④區域中劃線前后都要對接種環進行滅菌D.正常情況下,①區域的菌落數量最多
總結：
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