資源簡(jiǎn)介

1.2.2微生物的選擇培養(yǎng)與計(jì)數(shù)的學(xué)案
【學(xué)習(xí)目標(biāo)】
解釋選擇培養(yǎng)基篩選微生物的原理
土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)
運(yùn)用無(wú)菌操作技術(shù)和微生物分離、培養(yǎng)的方法初步分離出目標(biāo)菌
嘗試解決生產(chǎn)、生活中與微生物選擇培養(yǎng)、計(jì)數(shù)等有關(guān)的實(shí)際問(wèn)題
【學(xué)習(xí)重難點(diǎn)】
教學(xué)重點(diǎn)
1.微生物純培養(yǎng)的基本操作要求，微生物選擇培養(yǎng)的原理。
2.酵母菌的純培養(yǎng)。
3.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)。
教學(xué)難點(diǎn)
1.酵母菌的純培養(yǎng)。
2.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)。
【預(yù)習(xí)新知】
選擇培養(yǎng)基
1、實(shí)例：尋找耐高溫的DNA聚合酶
1973年，科學(xué)家從美國(guó)黃石國(guó)家公園的熱泉中篩選出 ，進(jìn)而從這種菌中提取出 的 。
（PCR）是一種在 擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫的DNA聚合酶。
篩選原因：水生棲熱菌能在 高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存。
2、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選：
人為提供 目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。
在微生物學(xué)中，將允許 種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或組織其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱為 。
微生物的選擇培養(yǎng)
(1)稀釋涂布平板法分離分解尿素的細(xì)菌
土壤中細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物，必須要對(duì)土樣進(jìn)行________，然后再將菌液______到制備好的________________，操作過(guò)程如下。
①取樣：鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。
②稀釋涂布平板法
A．系列稀釋操作：將10 g土樣加入盛有90 mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1 mL上清液加入盛有9 mL無(wú)菌水的試管中，依次等比稀釋。
B．涂布平板操作
C．培養(yǎng)與觀察
待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板________，放入30 ℃～37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2 d。在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的________菌落。
微生物的數(shù)量測(cè)定
1、計(jì)數(shù)方法
(1)稀釋涂布平板法：統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用 而不是用 來(lái)表示。
一般統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際 ，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是 。
計(jì)算公式：每毫升樣品中的菌株數(shù)=(C÷V)xM,其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的 ，V代表涂布平板時(shí)所用的 （mL)，M代表 。
(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：是一種常用的、 的測(cè)定微生物數(shù)量的方法。
統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是 和 的總和。
計(jì)算公式：
每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)x400x103x 。
內(nèi)容 直接計(jì)數(shù)法 間接計(jì)數(shù)法
主要用具 顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板
計(jì)數(shù)依據(jù) 培養(yǎng)基上 數(shù)
優(yōu)點(diǎn) 計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單 計(jì)數(shù)的是
缺點(diǎn) 不能區(qū)分 操作較復(fù)雜且有一定誤差
計(jì)算公式 每毫升原液含菌株數(shù)＝400×1000×每小格平均菌株數(shù)×稀釋倍數(shù) 每毫升原液含菌株數(shù)＝平均菌落數(shù)/所用涂布液體積×稀釋倍數(shù)
【易錯(cuò)提示】
稀釋涂布平板法的注意事項(xiàng)
(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2 cm處。
(2)涂布平板時(shí)
①涂布器浸在體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將蘸有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。
②不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。
③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體。
【深化探究】
【任務(wù)驅(qū)動(dòng)一】　選擇培養(yǎng)基
1．目的：從眾多的微生物中分離所需要的微生物。
2．三種篩選方法的特點(diǎn)及舉例
方法 特點(diǎn) 舉例
利用微生物的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)進(jìn)行選擇培養(yǎng) 通過(guò)控制培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，使某種微生物能生長(zhǎng)，其他微生物不能生長(zhǎng) 利用只含有尿素一種氮源的培養(yǎng)基，可篩選出分解尿素的細(xì)菌
利用某種化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行的選擇培養(yǎng) 在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)，利用加入的化學(xué)物質(zhì)對(duì)微生物產(chǎn)生的影響，抑制某些微生物，同時(shí)選擇所需的微生物 加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌
利用培養(yǎng)條件進(jìn)行的選擇培養(yǎng) 改變微生物的培養(yǎng)條件 將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物
【合作探究：】
(1)如何從大豆田土壤中分離出固氮微生物？
(2)要分離出分解纖維素的微生物，應(yīng)在什么樣的環(huán)境中取土樣？應(yīng)配制什么樣的培養(yǎng)基？
(3)根據(jù)選擇培養(yǎng)基的原理，如何篩選出耐酸菌？
【任務(wù)驅(qū)動(dòng)二】　微生物計(jì)數(shù)的方法
微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，但是一般使用計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。二者的比較如下表所示：
項(xiàng)目 直接計(jì)數(shù)法 間接計(jì)數(shù)法
原理 利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌
主要用具 顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板 培養(yǎng)基
計(jì)數(shù)數(shù)據(jù) 菌體本身 培養(yǎng)基上菌落數(shù)
優(yōu)點(diǎn) 計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單 計(jì)數(shù)的是活菌
缺點(diǎn) 死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi) 操作較復(fù)雜，有一定誤差
計(jì)算公式 每毫升原液含菌數(shù)＝每小格平均菌體數(shù)×400×10 000×稀釋倍數(shù) 每毫升原液含菌數(shù)＝培養(yǎng)基上平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)÷涂布液體積
【合作探究：】
1.在用稀釋涂布平板法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是什么？
2．在稀釋涂布平板法中，為何需要涂布3個(gè)平板？
3．為什么一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)？
4．為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果？
5．稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法對(duì)微生物計(jì)數(shù)產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)誤差如何？試分析原因。
【鞏固訓(xùn)練】
1.濫用抗生素會(huì)導(dǎo)致“超級(jí)細(xì)菌”（對(duì)多種抗生素有高耐藥性）的產(chǎn)生。某興趣小組探究了細(xì)菌產(chǎn)生青霉素抗性與青霉素之間的關(guān)系，過(guò)程及結(jié)果見(jiàn)下圖。下列相關(guān)的說(shuō)法中，錯(cuò)誤的是( )
A.細(xì)菌培養(yǎng)基在使用前、后都要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的滅菌處理
B.結(jié)果表明細(xì)菌的青霉素抗性出現(xiàn)在接觸青霉素之前
C.結(jié)果表明抗生素的使用是“超級(jí)細(xì)菌”產(chǎn)生的原因
D.提高青霉素的濃度，培養(yǎng)基上菌落的位置和數(shù)量可能不變
2.下列敘述錯(cuò)誤的是( )
A.因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量不同，所以獲得不同類型的微生物要按不同的稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離
B.測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍不同
C.只有得到了3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板，才說(shuō)明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)
D.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些細(xì)菌菌落
3.下圖為能分解尿素的微生物的獲取過(guò)程，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( )
A.①②③的目的是選擇能夠分解尿素的微生物并且增加該微生物的數(shù)量
B.過(guò)程④需在酒精燈火焰旁進(jìn)行，其中接種環(huán)一共需要灼燒6次
C.通過(guò)選擇培養(yǎng)得到的不一定都是能夠分解尿素的微生物，所以還需做進(jìn)一步的鑒定
D.通過(guò)④獲得純種微生物后，再利用涂布平板法接種至試管斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行保存
4.黑茶是以肉食為主的中國(guó)邊疆游牧民族的主要飲品。在一系列微生物的作用下,黑茶會(huì)產(chǎn)生一種對(duì)人體非常有益的金黃色顆粒“金花”。研究人員對(duì)“金花”中的微生物進(jìn)行了分離和鑒定,過(guò)程如圖。下列說(shuō)法不正確的是( )
A.向“金花”樣品中加入蒸餾水制成樣品懸液
B.可根據(jù)菌落特征對(duì)菌種進(jìn)行初步鑒定
C.涂布平板上長(zhǎng)出的菌落可通過(guò)劃線進(jìn)一步純化
D.可通過(guò)基因組測(cè)序?qū)N進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定
5.微生物的計(jì)數(shù)方法有多種，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是( )
A.用濾膜法測(cè)定飲用水中大腸桿菌數(shù)目時(shí)，需利用鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)后計(jì)數(shù)
B.用平板劃線法和稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，結(jié)果往往比實(shí)際少
C.用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯微計(jì)數(shù)時(shí)，高倍鏡下觀察不到完整的計(jì)數(shù)室
D.用已知密度紅細(xì)胞懸液對(duì)待測(cè)菌液以比例計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，兩種液體需混合均勻
6.如圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析錯(cuò)誤的是( )
A.某一稀釋度下至少涂3個(gè)平板，該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果常會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目少
B.3號(hào)試管中的樣品溶液稀釋倍數(shù)為104倍
C.5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×108個(gè)
D.該實(shí)驗(yàn)需設(shè)置未接種的培養(yǎng)基直接培養(yǎng)作對(duì)照，用以判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染
7.為了判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染和選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需要設(shè)置的對(duì)照組的培養(yǎng)基分別是( )
A.未接種的選擇培養(yǎng)基、未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
B.未接種的培養(yǎng)基、接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
C.接種了的選擇培養(yǎng)基、接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
D.接種了的培養(yǎng)基、未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基
8.微生物馴化是指在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，逐步加入某種物質(zhì)，讓微生物逐漸適應(yīng),從而得到對(duì)此物質(zhì)高耐受或能降解該物質(zhì)的微生物。科研人員采用微生物馴化結(jié)合傳統(tǒng)接種的方法篩選能高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥——敵敵畏的微生物，并設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)流程。請(qǐng)據(jù)此回答以下問(wèn)題:
(1)已知馴化培養(yǎng)基成分為蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉、磷酸二氫鉀、水等，馴化時(shí)逐步加入的物質(zhì)X是______。依照物理性質(zhì)劃分.馴化培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基。
(2)用于篩選的樣品應(yīng)來(lái)自______的土壤。將馴化后的微生物接種于培養(yǎng)基B的方法為_(kāi)_____，該方法不需要梯度稀釋也能獲得單菌落,原因是______。
(3)將培養(yǎng)基B中分離得到的單菌落分別接種于以敵敵畏為唯一碳源的培養(yǎng)基C中，培養(yǎng)24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)定培養(yǎng)基中______,可篩選分解敵敵畏能力較強(qiáng)的微生物。為統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基C中的微生物數(shù)量，在如圖所示的稀釋度下涂布了4個(gè)平板D,統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為250、247、312、253,測(cè)得培養(yǎng)基C中活菌數(shù)為1.25×107個(gè)/mL,則涂布的菌液Y為_(kāi)____mL。
參考答案
1.答案：C
解析：A、細(xì)菌培養(yǎng)基在使用前要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的滅菌處理，防止雜菌的污染，在使用后要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的滅菌處理，防止對(duì)環(huán)境造成污染，A正確；
B、由圖可知，多個(gè)含青霉素的培養(yǎng)基在相同的位置長(zhǎng)出了細(xì)菌，說(shuō)明細(xì)菌的青霉素抗性出現(xiàn)在接觸青霉素之前，B正確；
C、抗生素的使用是對(duì)“超級(jí)細(xì)菌”進(jìn)行選擇，不是“超級(jí)細(xì)菌”產(chǎn)生的原因，C錯(cuò)誤；
D、經(jīng)過(guò)抗生素的長(zhǎng)期選擇，使得有的細(xì)菌已不再受抗生素的影響，提高青霉素的濃度，培養(yǎng)基上菌落的位置和數(shù)量可能不變，D正確。
故選C。
2.答案：C
解析：樣品的稀釋度直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目，土壤中各類微生物數(shù)量不同，含量最多的是細(xì)菌，其次是放線菌，最少的是真菌，所以為獲得不同類型的微生物，要按不同稀釋倍數(shù)進(jìn)行分離，以保證獲得菌落在30~300之間、適于計(jì)數(shù)的平板，A項(xiàng)正確；由以上分析可知，測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍不同，B項(xiàng)正確；如果涂布三個(gè)平板能夠得到2個(gè)菌落數(shù)目在30~300之間的平板，就說(shuō)明稀釋操作比較成功并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)的方法是舍棄相差很大的一個(gè)，然后取平均值，故C項(xiàng)錯(cuò)誤；驗(yàn)證選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基作為對(duì)照，若后者上的菌落數(shù)明顯大于前者，說(shuō)明前者具有篩選作用，D項(xiàng)正確。
3.答案：D
解析：A、①②③是選擇性富集培養(yǎng)，目的是選擇能夠分解尿素的微生物并且增加該微生物的數(shù)量，A正確;B、過(guò)程④需在酒精燈火焰旁進(jìn)行，以免造成污染，接種前后接種環(huán)均要進(jìn)行灼燒滅菌，共接種5次，需要灼燒6次，B正確;C、通過(guò)選擇培養(yǎng)得到的不一定都是能夠分解尿素的微生物，比如能利用空氣中氮源的固氮微生物，所以還需根據(jù)菌落特征等做進(jìn)一步的鑒定，C正確;D、獲得純種微生物后，利用劃線分離法接種至斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行低溫保存，D錯(cuò)誤。
4.答案：A
解析：為防止雜菌污染,應(yīng)向“金花”樣品中加入無(wú)菌水制成樣品懸液,A錯(cuò)誤;在一定的培養(yǎng)條件下,不同種微生物形成的菌落的特征不同,可根據(jù)菌落特征對(duì)菌種進(jìn)行初步鑒定,B正確;涂布平板上長(zhǎng)出的菌落可通過(guò)劃線進(jìn)一步純化,C正確;可通過(guò)基因組測(cè)序?qū)N進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定,D正確。
5.答案：B
解析：測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目可取一定量的飲用水，之后按一定倍數(shù)稀釋，再用加入伊紅﹣亞甲藍(lán)的鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)，對(duì)深紫色金屬光澤菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，A正確；平板劃線法常用來(lái)篩選分離微生物，不用于計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行微生物顯微計(jì)數(shù)時(shí)，高倍鏡下觀察不到完整的計(jì)數(shù)室，C正確；將已知顆粒(如霉菌孢子或紅細(xì)胞)濃度的液體與一待測(cè)細(xì)胞濃度的菌液按一定比例均勻混合，在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目，即可得未知菌液的細(xì)胞濃度，D正確。
6.答案：C
解析：A、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，故某一稀釋度下至少涂3個(gè)平板。稀釋涂布平板得到的菌落可能存在兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌細(xì)胞長(zhǎng)成一個(gè)菌落，使該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要少，A正確；
B、據(jù)圖可知，將10g土樣加入到90mL無(wú)菌水中定容至100mL后，此時(shí)土樣稀釋倍數(shù)為10倍，再經(jīng)3次10倍稀釋得到3號(hào)試管中的樣品，故3號(hào)試管中樣品的稀釋倍數(shù)是104倍，B正確；
C、5號(hào)試管進(jìn)行稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為(168+175+167)÷3×106÷0.1=1.7×109個(gè)，C錯(cuò)誤；
D、為了判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染，需要設(shè)置的對(duì)照組是未接種的培養(yǎng)基，即將未接種的培養(yǎng)基與接種的培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng)，若未接種的培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落，說(shuō)明其被污染，否則沒(méi)有被污染，D正確。
故選C。
7.答案：B
解析：要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染，可將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)，一段時(shí)間后，若有菌落產(chǎn)生，說(shuō)明培養(yǎng)基被污染，若無(wú)菌落產(chǎn)生，說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有被污染。要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，接種了的選擇培養(yǎng)基是實(shí)驗(yàn)組，將等量的稀釋相同倍數(shù)的菌液接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，作為對(duì)照組，在相同的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，觀察比較對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中的菌落數(shù)，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目。綜上所述，B正確。
8.答案：（1）敵敵畏；液體
（2）（常年）施用敵敵畏（或被敵敵畏污染）；平板劃線法劃線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著劃線的延伸，菌體數(shù)目逐漸被稀釋（減少），最后可能形成單個(gè)菌落
（3）敵敵畏的剩余量；0.2
解析：（1）該實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖呛Y選抗敵敵畏或高效分解敵敵畏的微生物，故馴化時(shí)往培養(yǎng)液中逐步加入的物質(zhì)X是敵敵畏。由圖可知，該馴化培養(yǎng)基中并未加入凝固劑（如瓊脂），故依照物理性質(zhì)劃分，該馴化培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基。
（2）為了篩選能高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥一敵敵畏的微生物，用于篩選的樣品應(yīng)來(lái)自常年施用敵敵畏的土壤，這樣能夠增加獲得目的菌的概率。結(jié)合題圖可知，將馴化后的微生物接種于培養(yǎng)基B的方法為平板劃線法；該方法中，劃線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著劃線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落，故用該方法接種不需要梯度稀釋也能獲得單菌落。
（3）單位時(shí)間內(nèi)剩余的敵敵畏越少，說(shuō)明篩選出的微生物分解敵敵畏的能力越強(qiáng)，故通過(guò)測(cè)定培養(yǎng)基C中敵敵畏的剩余量，可篩選出分解敵敵畏能力較強(qiáng)的微生物。微生物計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選擇菌落數(shù)目在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，故選擇菌落數(shù)分別為250、247、253的平板，菌落的平均數(shù)（250+247+253）÷3=250（個(gè)），由圖可知培養(yǎng)基C中的1mL菌液的稀釋倍數(shù)是104，可得算式250/Y×104=1.25×107（個(gè)/ml），放涂布的菌液Y=0.2（mL）。

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