資源簡(jiǎn)介

微專題18 基因編輯、酵母雙雜交和蛋白質(zhì)工程
考點(diǎn)1　基因編輯
【典例剖析】
1.(2022·福州高三期末)單細(xì)胞生物并沒(méi)有免疫系統(tǒng)，但是科學(xué)家發(fā)現(xiàn)細(xì)菌中存在清除入侵病毒DNA的功能系統(tǒng)，并發(fā)明了CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)。該系統(tǒng)主要包含單鏈向?qū)NA和Cas9蛋白兩個(gè)部分，能特異性識(shí)別并結(jié)合特定的DNA序列，從而引導(dǎo)Cas9蛋白到相應(yīng)位置并剪切DNA，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因序列的編輯。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
(1)如圖為CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用示意圖，該系統(tǒng)能精準(zhǔn)識(shí)別相關(guān)基因的原理是單鏈向?qū)NA與目標(biāo)DNA發(fā)生________________，Cas9蛋白可催化____________(化學(xué)鍵名稱)水解，剪切特定DNA片段。
(2)CRISPR/Cas9系統(tǒng)廣泛存在于原核生物中，細(xì)菌這種清除入侵病毒DNA的生理意義是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(3)真核生物中沒(méi)有編碼Cas9蛋白的基因，若要對(duì)真核生物的基因進(jìn)行編輯，要借助現(xiàn)代生物技術(shù)將CRISPR/Cas9基因?qū)胂嚓P(guān)細(xì)胞，此項(xiàng)技術(shù)的原理是____________。
(4)水稻不育系的選育是雜交水稻育種工作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，TMS5基因是控制水稻育性的關(guān)鍵基因。為了獲得某水稻品種的不育系，研究人員對(duì)該水稻品種的TMS5基因進(jìn)行編輯。
①Cas9蛋白將TMS5基因剪切后，斷裂后的DNA分子會(huì)自動(dòng)進(jìn)行修復(fù)，修復(fù)過(guò)程中斷點(diǎn)處插入堿基A之后兩個(gè)片段在____________酶作用下得到編輯成功的TMS5基因，此過(guò)程導(dǎo)致的變異屬于____________。
②在編輯成功的TMS5基因上游連接啟動(dòng)子后組裝形成基因表達(dá)載體。再通過(guò)農(nóng)桿菌侵染水稻愈傷組織，并整合到水稻細(xì)胞的____________上，愈傷組織再經(jīng)過(guò)________過(guò)程形成水稻幼苗。
③基因編輯中插入堿基A，會(huì)導(dǎo)致翻譯提前終止，使TMS5基因表達(dá)的蛋白質(zhì)不能產(chǎn)生，最終導(dǎo)致水稻花粉不育。用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測(cè)TMS5基因編輯是否成功，若________(填“出現(xiàn)”或“未出現(xiàn)”)雜交帶，則表明基因編輯成功。
(5)華人科學(xué)家張鋒是首個(gè)將CRISPR基因編輯技術(shù)應(yīng)用于哺乳動(dòng)物和人類細(xì)胞的科學(xué)家，為此項(xiàng)技術(shù)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域作出了不可磨滅的貢獻(xiàn)。但是更多的學(xué)者提出了CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)有時(shí)存在編輯對(duì)象出錯(cuò)而造成“脫靶”，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)RNA的序列長(zhǎng)短影響成功率，越短脫靶率越______。試分析脫靶最可能的原因是__________________。
【關(guān)鍵點(diǎn)撥】
1．基因編輯的含義
對(duì)基因進(jìn)行定點(diǎn)修改，以改變目的基因的序列和功能，進(jìn)行基因治療和物種改良。
2．應(yīng)用最廣泛的技術(shù)：CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)。
3．CRISPR/Cas9的組分及功能
短鏈RNA(sgRNA、向?qū)NA) 作為“向?qū)А保糠中蛄型ㄟ^(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)，與目的基因中希望被編輯的DNA序列結(jié)合
細(xì)菌的核酸酶Cas9 與短鏈RNA結(jié)合，切割與向?qū)NA結(jié)合的DNA，使DNA雙鏈斷裂
4.CRISPR/Cas9技術(shù)的主要應(yīng)用
(1)基因敲除；
(2)特異突變引入；
(3)定點(diǎn)轉(zhuǎn)基因。
5．CRISPR/Cas9技術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)
(1)基因編輯技術(shù)本身存在著識(shí)別準(zhǔn)確性等方面的問(wèn)題。
(2)對(duì)人類基因進(jìn)行“改造”時(shí)要嚴(yán)格遵守法律法規(guī)，不能違反人類的倫理道德。
【鞏固練習(xí)】
1．CRISPR/Cas9是一種基因編輯技術(shù)，科研人員對(duì)其進(jìn)行了一系列改造。
(1)Cas9蛋白能與人工設(shè)計(jì)的sgRNA形成復(fù)合體(如圖1)。復(fù)合體中的________與目的基因特異性結(jié)合，________切割目的基因造成雙鏈斷裂，細(xì)胞在修復(fù)斷裂的DNA時(shí)會(huì)隨機(jī)插入、刪除或替換部分堿基，從而引發(fā)_________________________________________________。
(2)將編碼Cas9蛋白的基因改造后形成新基因dCas9，與Cas9蛋白相比，dCas9蛋白失去剪切活性，但與sgRNA結(jié)合等功能不變。構(gòu)建能夠表達(dá)dCas9蛋白的質(zhì)粒A，設(shè)計(jì)一系列與紅色熒光蛋白基因(RFP基因)上游不同部位結(jié)合的sgRNA序列(如圖2)，并以此為依據(jù)構(gòu)建能表達(dá)sgRNA的質(zhì)粒B，將質(zhì)粒A、B共同導(dǎo)入含有RFP基因的大腸桿菌，測(cè)定大腸桿菌紅色熒光強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組的紅色熒光強(qiáng)度約為sgRNA 3組的________倍。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出：______________________________________________________________________________。
(3)VP64蛋白可結(jié)合RNA聚合酶，激活基因的轉(zhuǎn)錄，但VP64蛋白無(wú)法識(shí)別或結(jié)合特定的DNA片段。科研人員欲利用上述系統(tǒng)和VP64蛋白促進(jìn)特定基因表達(dá)，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)促進(jìn)細(xì)胞中已存在的基因X表達(dá)的方案。
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
(4)請(qǐng)寫出CRISPR/Cas9及其改造產(chǎn)品在科學(xué)研究中的應(yīng)用___________________________
______________________________________________________________________________。
2．CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)由sgRNA和Cas9蛋白(能夠切割DNA的酶)組成。CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用原理如圖所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
(1)將sgRNA基因和Cas9編碼基因重組到質(zhì)粒并利用____________技術(shù)導(dǎo)入受精卵，在受精卵內(nèi)sgRNA基因通過(guò)________產(chǎn)生sgRNA，Cas9編碼基因通過(guò)____________產(chǎn)生Cas9蛋白。sgRNA和Cas9蛋白共同構(gòu)成基因編輯系統(tǒng)，對(duì)靶向基因?qū)崿F(xiàn)定點(diǎn)編輯。可通過(guò)________技術(shù)在體外獲得大量的Cas9編碼基因。
(2)據(jù)圖可知，sgRNA是一段________________________________的單鏈RNA，從而定向引導(dǎo)Cas9蛋白與靶向基因結(jié)合，并在特定位點(diǎn)切割DNA。
(3)靶向基因中的PAM序列是sgRNA的重點(diǎn)識(shí)別區(qū)域，以幫助Cas9蛋白實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的切割和后續(xù)編輯。由于________________________，因此CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)能夠?qū)Υ蠖鄶?shù)基因進(jìn)行定點(diǎn)編輯。
考點(diǎn)2　酵母雙雜交和蛋白質(zhì)工程
【典例剖析】
2.(2023·天津高三質(zhì)檢)甜柿鮮果肉中含豐富的可溶性糖、微量元素、維生素和β－胡蘿卜素等多種成分，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，深受消費(fèi)者喜愛(ài)。甜柿自然脫澀的澀味程度與乙醛代謝關(guān)鍵酶基因(PDC)的表達(dá)情況有關(guān)。為篩選PDC基因調(diào)控蛋白，科研人員利用質(zhì)粒A和質(zhì)粒G(如圖甲、圖乙所示)，進(jìn)行了相關(guān)研究。
(1)啟動(dòng)子位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，同時(shí)啟動(dòng)子區(qū)域存在著許多調(diào)控蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，RNA聚合酶和調(diào)控蛋白共同影響了基因的________水平。
(2)PDC基因的啟動(dòng)子序列未知，為獲得大量該基因啟動(dòng)子所在的片段，可利用限制酶將基因組DNA進(jìn)行酶切，然后在__________的作用下將已知序列信息的接頭片段連接在PDC基因的上游，根據(jù)__________________________________設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在擴(kuò)增過(guò)程中使用的DNA聚合酶具有________的特點(diǎn)，在該酶的作用下可以將4種脫氧核苷酸加到引物的一端。
(3)AD基因表達(dá)出的 AD蛋白與啟動(dòng)子足夠靠近時(shí)，能夠激活后續(xù)基因轉(zhuǎn)錄，據(jù)此可利用與AD蛋白形成的融合蛋白來(lái)篩選待測(cè)蛋白。利用質(zhì)粒A構(gòu)建含有PDC基因啟動(dòng)子片段的重組質(zhì)粒并導(dǎo)入代謝缺陷型酵母菌，用不含____________的培養(yǎng)基可篩選出成功轉(zhuǎn)化的酵母菌Y1。將從甜柿中提取的總mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成不同片段的cDNA，然后分別插入質(zhì)粒G中的__________(填序號(hào)1～5)位點(diǎn)以獲得不同的重組質(zhì)粒(G1、G2……)，理由是___________
______________________________________________________________________________。
(4)將攜帶不同 cDNA 片段的重組質(zhì)粒 G1 、G2……分別導(dǎo)入酵母菌 Y1 中，然后分別置于含____________的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。若能在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，則該酵母菌含有的cDNA 所表達(dá)的蛋白質(zhì)即為PDC基因調(diào)控蛋白。請(qǐng)結(jié)合圖丙簡(jiǎn)述作出該推測(cè)的理由：_________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________。
(5)篩選出PDC基因的調(diào)控蛋白后，為滿足生產(chǎn)上的需要對(duì)其進(jìn)行改良，這種技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程，該工程是指以______________________________________作為基礎(chǔ)，通過(guò)對(duì)______的修飾或合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造出一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求，該工程的起點(diǎn)是_______________________________________________________。
【關(guān)鍵點(diǎn)撥】
1．酵母雙雜交原理
酵母雙雜交系統(tǒng)的建立是基于對(duì)真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程的認(rèn)識(shí)。真核生物中基因轉(zhuǎn)錄需要轉(zhuǎn)錄激活因子的參與，真核生物的轉(zhuǎn)錄激活因子含有兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA binding domain，DNA－BD)和DNA轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation domain，AD)，這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域可以獨(dú)立分開，功能互不影響。BD和AD分別單獨(dú)作用并不能激活轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，只有當(dāng)二者在空間上充分接近時(shí)，才呈現(xiàn)完整的轉(zhuǎn)錄激活因子活性，使下游基因得到轉(zhuǎn)錄。根據(jù)這一原理，可設(shè)計(jì)酵母雙雜交系統(tǒng)。
將兩待研究蛋白(蛋白X與蛋白Y)分別與BD、AD結(jié)構(gòu)域構(gòu)建融合質(zhì)粒。將構(gòu)建好的兩個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入同一酵母細(xì)胞中表達(dá)，如果兩蛋白之間不存在相互作用，則下游基因(報(bào)告基因)不會(huì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)；如果兩個(gè)蛋白存在相互作用，則BD與AD兩結(jié)構(gòu)域空間上很接近，從而下游基因(報(bào)告基因)得到轉(zhuǎn)錄。通過(guò)報(bào)告基因表達(dá)與否，即可判斷兩蛋白之間是否存在相互作用。原理如圖所示。
2．蛋白質(zhì)工程
【鞏固練習(xí)】
3．(2023·南通高三調(diào)研)酵母雙雜交技術(shù)是篩選能與已知蛋白互作的蛋白質(zhì)的方法，其主要原理如圖1。黃瓜花葉病毒(CMV)可侵染200多種植物，病毒的外殼蛋白(CMV CP)直接參與病毒的細(xì)胞間轉(zhuǎn)移、癥狀表現(xiàn)等。研究人員利用酵母雙雜交技術(shù)，從CMV感染的番茄葉片cDNA文庫(kù)中篩選出CMV CP互作蛋白基因，圖2為構(gòu)建CMV CP誘餌載體(能表達(dá)出BD－CP融合蛋白)的流程。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：
(1)圖1中，獲得BD－X蛋白的關(guān)鍵是將相應(yīng)序列連接形成融合基因。X與Y的結(jié)合能使轉(zhuǎn)錄因子的BD和AD同時(shí)結(jié)合到啟動(dòng)子上，進(jìn)而招募酶X催化LacZ基因的轉(zhuǎn)錄，酶X是
________________。
(2)圖2中，過(guò)程①提取總RNA時(shí)選擇有明顯感染癥狀葉片的原因是________________。過(guò)程②中通常利用RT－PCR技術(shù)獲得cDNA，上述技術(shù)中不同循環(huán)次數(shù)的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖3，則最適宜的循環(huán)次數(shù)是________次，依據(jù)是___________________________________
______________________________________________________________________________。
(3)圖2過(guò)程③構(gòu)建誘餌載體時(shí)，為保證CP cDNA能定向插入到指定位置，需要在過(guò)程②設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)，______________________________________________________________。用獲得的誘餌載體先轉(zhuǎn)化大腸桿菌，再用____________法將菌液接種到含________的選擇培養(yǎng)基上，挑取陽(yáng)性單菌落細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序，確認(rèn)插入的基因序列正確。
(4)獲得CMV CP誘餌載體轉(zhuǎn)化的酵母菌后，研究人員進(jìn)一步開展CMV CP互作蛋白的篩選研究，其主要實(shí)驗(yàn)流程是：構(gòu)建感染CMV的番茄cDNA文庫(kù)→構(gòu)建一系列靶蛋白載體→______________________________________→接種培養(yǎng)，獲取呈________色的菌落細(xì)胞→篩選、鑒定互作蛋白。
4．(2022·湖南，22)水蛭是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用。擬通過(guò)蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu)，提高其抗凝血活性。回答下列問(wèn)題：
(1)蛋白質(zhì)工程流程如圖所示，物質(zhì)a是________________，物質(zhì)b是__________。在生產(chǎn)過(guò)程中，物質(zhì)b可能不同，合成的蛋白質(zhì)空間構(gòu)象卻相同，原因是________________________。
(2)蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸，基因工程中獲取目的基因的常用方法有______________、______________和利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。PCR技術(shù)遵循的基本原理是__________________。
(3)將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性，結(jié)果如圖所示。推測(cè)兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的______(填“種類”或“含量”)有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因是
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素的抗凝血活性差異，簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路。
________________________________________________________________________
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________________________________________________________________________
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參考答案
考點(diǎn)1
典例剖析
1．(1)堿基互補(bǔ)配對(duì)　磷酸二酯鍵　(2)防止外源基因插入并表達(dá)，保證了細(xì)菌遺傳性狀的穩(wěn)定　(3)基因重組　(4)①DNA連接　基因突變　②染色體DNA　再分化　③未出現(xiàn)　(5)高　其他DNA序列也含有與向?qū)NA互補(bǔ)配對(duì)的序列，造成向?qū)NA錯(cuò)誤結(jié)合而脫靶
鞏固練習(xí)
1．(1)sgRNA　Cas9蛋白　基因突變　(2)100　sgRNA結(jié)合部位距離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)越近，抑制目的基因表達(dá)的作用越強(qiáng)　(3)根據(jù)基因X的序列設(shè)計(jì)sgRNA，使其能識(shí)別X基因的RNA聚合酶識(shí)別序列，讓VP64蛋白與該sgRNA結(jié)合形成復(fù)合體　(4)可實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)誘變、特異性抑制某些有害基因或致病基因的表達(dá)
解析　(1)sgRNA可通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與目的基因特異性結(jié)合，進(jìn)而特異性地識(shí)別目的基因；隨機(jī)插入、刪除或替換部分堿基將導(dǎo)致基因結(jié)構(gòu)的改變，屬于基因突變。(3)VP64蛋白可結(jié)合RNA聚合酶，激活基因的轉(zhuǎn)錄，但VP64蛋白無(wú)法識(shí)別或結(jié)合特定的DNA片段，而sgRNA具有識(shí)別作用，可根據(jù)基因X的序列設(shè)計(jì)sgRNA，使其能識(shí)別X基因的RNA聚合酶識(shí)別序列，讓VP64蛋白與該sgRNA結(jié)合形成復(fù)合體。
2．(1)顯微注射　轉(zhuǎn)錄　轉(zhuǎn)錄和翻譯(表達(dá))　PCR　(2)能與靶向基因上的特定序列互補(bǔ)配對(duì)　(3)大多數(shù)基因中都含PAM序列
解析　(1)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞利用顯微注射技術(shù)。在受精卵內(nèi)sgRNA基因通過(guò)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生sgRNA，Cas9編碼基因通過(guò)表達(dá)(轉(zhuǎn)錄和翻譯)產(chǎn)生Cas9蛋白。可通過(guò)PCR技術(shù)在體外大量擴(kuò)增目的基因。(2)據(jù)圖可知，sgRNA是一段能與靶向基因上的特定序列互補(bǔ)配對(duì)的單鏈RNA，從而定向引導(dǎo)Cas9蛋白與靶向基因結(jié)合。(3)靶向基因中的PAM序列是sgRNA的重點(diǎn)識(shí)別區(qū)域，由于大多數(shù)基因中都含PAM序列，因此CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)能夠?qū)Υ蠖鄶?shù)基因進(jìn)行定點(diǎn)編輯。
考點(diǎn)2
典例剖析
2．(1)轉(zhuǎn)錄　(2)DNA連接酶　接頭片段和PDC基因編碼序列　耐高溫　(3)尿嘧啶　2　插入位點(diǎn)需要在AD基因的啟動(dòng)子和終止子之間，且不能破壞AD基因　(4)金擔(dān)子素　 待測(cè)蛋白與AD蛋白形成了融合蛋白，若待測(cè)蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白，就能與PDC基因啟動(dòng)子結(jié)合，AD蛋白也能靠近PDC基因啟動(dòng)子并激活金擔(dān)子素基因的表達(dá)，使酵母菌表現(xiàn)出金擔(dān)子素抗性　(5)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系　基因　預(yù)期蛋白質(zhì)的功能
鞏固練習(xí)
3．(1)RNA聚合酶　(2)感染癥狀明顯的葉片細(xì)胞中含有大量CMV病毒，有豐富的CMV CP基因　18　2號(hào)條帶比1號(hào)條帶寬，而3號(hào)條帶較彌散(或2號(hào)條帶最明亮、整齊)　(3)在兩種引物的5′端分別添加BamHⅠ和EcoRⅠ識(shí)別序列　稀釋涂布平板　卡那霉素　(4)分別將靶蛋白載體導(dǎo)入誘餌載體轉(zhuǎn)化后的酵母菌　藍(lán)
解析　(3)由圖2可知，CP基因插入到BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位點(diǎn)間，所以引物設(shè)計(jì)需要在兩種引物的5′端分別添加BamHⅠ和EcoRⅠ識(shí)別序列；接種菌液用稀釋涂布平板法，載體上的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，所以培養(yǎng)基中添加卡那霉素。
4．(1)氨基酸序列(多肽鏈)　mRNA　密碼子的簡(jiǎn)并性　(2)從基因文庫(kù)中獲取目的基因　通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成　DNA半保留復(fù)制　(3)種類　提取的水蛭蛋白的酶解時(shí)間和處理所用的酶的種類不同，導(dǎo)致水蛭蛋白空間結(jié)構(gòu)有不同程度破壞　(4)取3支試管，分別加入等量的蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素；用酒精消毒，用注射器取同一種動(dòng)物(如家兔)血液，立即將等量的血液加入1、2、3號(hào)3支試管中，靜置相同時(shí)間，統(tǒng)計(jì)3支試管中血液凝固時(shí)間
解析　(3)將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，據(jù)圖可知，水解產(chǎn)物中的肽含量隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)均上升，且差別不大。水解產(chǎn)物中抗凝血活性有差異，經(jīng)酶甲處理后，隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，抗凝血活性先上升后相對(duì)穩(wěn)定；經(jīng)酶乙處理后，隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，抗凝血活性先上升后下降。經(jīng)酶甲處理后的酶解產(chǎn)物的抗凝血活性最終高于經(jīng)酶乙處理后的酶解產(chǎn)物的抗凝血活性，且差異明顯。據(jù)此推測(cè)兩種酶處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的種類有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因是提取的水蛭蛋白的酶解時(shí)間和酶的種類不同，導(dǎo)致水蛭蛋白空間結(jié)構(gòu)有不同程度破壞。

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