資源簡介

2.2 動物細(xì)胞工程 一 動物細(xì)胞培養(yǎng)
【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1.簡述動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件和過程,構(gòu)建動物細(xì)胞培養(yǎng)的流程圖。
2.舉例說明動物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用。
3.簡述干細(xì)胞的種類及其應(yīng)用價(jià)值。
【重點(diǎn)難點(diǎn)】說明動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件和動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)胞生長的特點(diǎn)。
預(yù)學(xué)案---教材研讀 （自主學(xué)習(xí)）
動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)包括 、 和
等，其中 是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。
1.動物細(xì)胞培養(yǎng)
（1）概念：動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物體中取出相關(guān)的 ，將它分散成 ，然后在適宜的 下，讓這些細(xì)胞 的技術(shù)。
（2）動物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件
①營養(yǎng)：將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按 和 嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基，稱為合成培養(yǎng)基，使用時(shí)通常需加入 等天然成分。培養(yǎng)動物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基，也稱為 _______。
② 、 的環(huán)境：培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具應(yīng)進(jìn)行 處理以及在無菌環(huán)境下進(jìn)行操作。 需要定期更換，以便清除代謝物。
③溫度、pH和滲透壓：哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的溫度多是 ℃；多數(shù)細(xì)胞適宜pH為 ； 也是動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需要考慮的重要環(huán)境參數(shù)。
④氣體環(huán)境：95% ＋5% 。O2是 所必需的，CO2的主要作用是________________。
2.動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：
取動物組織→用 的方法或用 等處理的方法，將組織分散成_________ →制成__________________→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行_______代培養(yǎng)→分瓶后進(jìn)行_______代培養(yǎng)。
（1）．懸浮生長：細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖，會因__________________、
積累和培養(yǎng)液中 等因素而分裂受阻。
（2）．細(xì)胞貼壁：多數(shù)細(xì)胞貼附在 _____ 上生長。
（3）．接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面 時(shí)，細(xì)胞通常會停止
的現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。
（4）．原代培養(yǎng)：指動物組織經(jīng)處理后的 。
（5）．傳代培養(yǎng)：分瓶后的細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)時(shí)，懸浮生長的細(xì)胞直接用 法收集；貼壁生長的細(xì)胞要先用 等處理，再用 法收集。
3.干細(xì)胞培養(yǎng)及其應(yīng)用
（1）．干細(xì)胞功能：在一定條件下，可以分化成 。
（2）．干細(xì)胞的存在： 、 和 等多種組織和器官中。
（3）．干細(xì)胞的種類
判斷對錯：
1．多數(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中其培養(yǎng)液所需的適宜pH為6.8～7.0。 ( )
2．動物細(xì)胞培養(yǎng)要定期更換培養(yǎng)液，其目的是便于清除代謝物，防止代謝物積累對細(xì)胞自身造成傷害。 ( )
3．動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是動物細(xì)胞的全能性。 ( )
4．制備肝細(xì)胞懸液時(shí)用胃蛋白酶處理。 ( )
5．培養(yǎng)動物細(xì)胞的第一代(即第一次細(xì)胞增殖)被稱為原代培養(yǎng)。 ( )
6．培養(yǎng)保留接觸抑制的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細(xì)胞。 ( )
導(dǎo)學(xué)案---課堂探究（疑難點(diǎn)撥）
探究一：動物細(xì)胞培養(yǎng)
1.概念：動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)條件下，讓這些細(xì)胞生長和增殖的技術(shù)。
2.目的：獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物；不能獲得完整動物個體。
3.原理：
探究二：動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件
1．營養(yǎng)
2．無菌、無毒的環(huán)境
3．溫度和pH
4．氣體環(huán)境
添加血清、血漿的作用：血清和血漿中含有多種維持細(xì)胞正常代謝和生長的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、氨基酸、未知的促生長因子等。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，一般需添加10%～20%的血清或血漿。
探究三：動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程
1.應(yīng)選擇什么樣的組織或器官進(jìn)行培養(yǎng)？
為什么？
2.分散成單個細(xì)胞培養(yǎng)的原因？
3.用酶兩次處理的目的分別是什么？
能否用胃蛋白酶處理？
【典例1】實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程如圖所示。下列敘述錯誤的是(　　)
A．甲過程需要在無菌條件下進(jìn)行 B．乙過程可用胰蛋白酶處理皮膚組織
C．丙過程是原代培養(yǎng)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象 D．丁過程是傳代培養(yǎng)細(xì)胞，不出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象
探究四：植物組織培養(yǎng)與動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較
項(xiàng)目 植物組織培養(yǎng) 動物細(xì)胞培養(yǎng)
理論基礎(chǔ) 植物細(xì)胞全能性 細(xì)胞增殖
培養(yǎng)基 類型 固體或半固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基
成分 礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、氨基酸、植物激素等 無機(jī)鹽、葡萄糖、維生素、氨基酸、促生長因子、動物血清等
取材 植物幼嫩部位或花藥等 動物胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織
過程 脫分化、再分化 原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)
相同點(diǎn) ①都需要人工條件下的無菌操作，無菌培養(yǎng)；②都需要配制合成培養(yǎng)基；③都需要適宜的溫度、pH等條件
1.動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的目的有什么不同？
2．動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)過程中細(xì)胞分裂的方式相同嗎？
【典例2】下列屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)區(qū)別的是(　　)
A．動物細(xì)胞培養(yǎng)基與植物細(xì)胞培養(yǎng)基的成分有所不同
B．動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行
C．動物細(xì)胞培養(yǎng)可發(fā)生遺傳物質(zhì)改變，而植物組織培養(yǎng)不能
D．植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)都體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性
探究五：干細(xì)胞的種類及功能
來源 功能及應(yīng)用
胚胎干細(xì)胞 (ES細(xì)胞) 早期胚胎 能夠分化成為動物體內(nèi)的任何細(xì)胞，并進(jìn)一步形成組織、器官甚至生物個體
成體干細(xì)胞 成體組織或器官 只能分化成特定的細(xì)胞或組織，不具有發(fā)育成完整個體的潛能
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (iPS細(xì)胞) 體外誘導(dǎo)體細(xì)胞產(chǎn)生 能分化成為具有特定功能的細(xì)胞，用于治療疾病
1.誘導(dǎo)多能干細(xì)胞用于治療人類的某些頑癥的原理是什么？
2.誘導(dǎo)多能干細(xì)胞為什么可以解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題？
固學(xué)案---課后訓(xùn)練（能力提升）
2.2.1 動物細(xì)胞培養(yǎng)
1.一般來說,動物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足以下哪些條件(　　)
①無毒的環(huán)境　②無菌的環(huán)境　③合成培養(yǎng)基需加入血清　④溫度與動物體溫相近　⑤需要O2,不需要CO2　⑥適宜的滲透壓
A.①②③④⑤⑥　　　B.①②③④
C.①③④⑤⑥　　　D.①②③④⑥
2.(2023河南焦作月考)為解決大面積燒傷病人的植皮難題,科學(xué)家研制出人造皮膚,研制過程中需要將人的皮膚細(xì)胞置于培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)。配制培養(yǎng)液時(shí),除必需的已知成分外,還必須加入天然成分,細(xì)胞才能正常生長和增殖。下列相關(guān)敘述不正確的是(　　)
A.細(xì)胞培養(yǎng)過程中,應(yīng)將細(xì)胞置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中
B.為了避免動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中的污染,可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素
C.培養(yǎng)液中加入的天然成分可能是血清,用于補(bǔ)充細(xì)胞生長和增殖所需的物質(zhì)
D.經(jīng)培養(yǎng)可得到由多層細(xì)胞構(gòu)成的人造皮膚,能直接用于移植
3.如圖為動物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述正確的是(　　)
A.步驟①的操作不需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行
B.步驟②中用鹽酸溶解細(xì)胞間物質(zhì)使細(xì)胞分離
C.步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理
D.步驟④培養(yǎng)過程中不會發(fā)生細(xì)胞癌變
4.(2023貴州銅仁一中月考)如圖表示某學(xué)習(xí)小組利用正常的小鼠細(xì)胞進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程,①~④表示相關(guān)過程。下列相關(guān)敘述正確的是(　　)
A.過程①可以使用機(jī)械法或酶解法改變細(xì)胞的通透性
B.過程②為原代培養(yǎng),培養(yǎng)細(xì)胞1一般會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象
C.培養(yǎng)細(xì)胞2需要貼附于基質(zhì)表面生長,直接用離心法進(jìn)行收集
D.進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中,不會發(fā)生基因的選擇性表達(dá)
5.(2023廣東深圳外國語學(xué)校月考)在動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中,貼壁的細(xì)胞不一定都能增殖并形成克隆(單個細(xì)胞繁殖形成的細(xì)胞群體),而形成克隆的細(xì)胞必為有增殖活力的細(xì)胞,這一特點(diǎn)可用于測定動物細(xì)胞的增殖能力。大致流程如下圖,相關(guān)敘述不正確的是(　　)
A.出現(xiàn)接觸抑制后,細(xì)胞克隆停止增殖
B.克隆細(xì)胞與接種的細(xì)胞的遺傳信息可能不同
C.胰蛋白酶可使細(xì)胞分散成單個,利于計(jì)數(shù)
D.采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)才能形成細(xì)胞克隆
6.(2022湖北監(jiān)利中學(xué)月考)如圖是某同學(xué)設(shè)計(jì)的有關(guān)紫杉醇抗腫瘤實(shí)驗(yàn)的研究流程,下列相關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A.酶X可以是胃蛋白酶
B.物質(zhì)Y是生理鹽水,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可與加入紫杉醇的甲組形成對照
C.培養(yǎng)時(shí)需要定期更換培養(yǎng)液,目的是清除代謝物
D.若甲組腫瘤細(xì)胞的數(shù)目少于乙組,可以說明紫杉醇具有抗腫瘤作用
7.(2023河南安陽一中階段練習(xí))下列關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的敘述,不正確的是(　　)
A.動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基不同
B.動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)不同
C.煙草葉片細(xì)胞離體培養(yǎng)能產(chǎn)生新個體,小鼠的ES細(xì)胞離體培養(yǎng)可分化成心肌細(xì)胞、神經(jīng)元等細(xì)胞
D.動物細(xì)胞培養(yǎng)需要添加激素,植物組織培養(yǎng)需要添加血清
8.下列關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的敘述,錯誤的是(　　)
A.培養(yǎng)過程中都會發(fā)生有絲分裂
B.培養(yǎng)過程都需要在無菌條件下進(jìn)行
C.培養(yǎng)過程中都存在貼壁生長和接觸抑制現(xiàn)象
D.培養(yǎng)過程中都易受培養(yǎng)條件和外界壓力的影響而發(fā)生變異
9.(2023福建永安三中月考)我國科學(xué)家通過體細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)出了類似受精卵發(fā)育3天狀態(tài)的人類全能干細(xì)胞,它能夠形成各類組織、器官。這是目前全球在體外培養(yǎng)的“最年輕”的人類細(xì)胞。下列有關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A.體細(xì)胞誘導(dǎo)成全能干細(xì)胞的過程導(dǎo)致遺傳物質(zhì)發(fā)生改變
B.全能干細(xì)胞可分化為胎盤組織,并有可能發(fā)育為更成熟的其他組織
C.全能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成各種組織細(xì)胞的基礎(chǔ)是基因的選擇性表達(dá)
D.此項(xiàng)研究成果在解決器官短缺和器官移植免疫排斥等問題上有重要意義
10.(2023湖北宜昌月考)小鼠的成纖維細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)可成為iPS細(xì)胞,為新型再生療法帶來希望。下列敘述正確的是(　　)
A.經(jīng)誘導(dǎo)形成的iPS細(xì)胞增殖能力強(qiáng),分化能力弱
B.分化后的細(xì)胞蛋白質(zhì)種類和數(shù)量相同
C.iPS細(xì)胞屬于成體干細(xì)胞
D.與ES細(xì)胞相比,iPS細(xì)胞用于再生醫(yī)學(xué)可回避倫理爭議
11.一名嬰兒在出生后,醫(yī)院為他保留了臍帶血,在他以后生長發(fā)育過程中如果出現(xiàn)了某種難以治療的疾病,就可以利用血液中的干細(xì)胞進(jìn)行治療,下列關(guān)于這個實(shí)例的說法不正確的是(　　)
A.用干細(xì)胞培育出人體需要的組織或器官用來移植治病,不需要激發(fā)細(xì)胞的全能性
B.用臍帶血中的干細(xì)胞并不能治療這個孩子所有的疾病
C.如果要移植用他的干細(xì)胞培育出的器官,需要用到細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
D.如果要移植用他的干細(xì)胞培育出的器官,應(yīng)該長期給他使用免疫抑制藥物
12.(2023北京豐臺一模)懸浮培養(yǎng)的動物細(xì)胞會因細(xì)胞密度過大、有害代謝產(chǎn)物積累等因素而分裂受阻。生產(chǎn)上常用灌流式培養(yǎng)避免這些現(xiàn)象出現(xiàn)。灌流式培養(yǎng)是在細(xì)胞培養(yǎng)管內(nèi),一邊不斷注入新鮮培養(yǎng)基,一邊將培養(yǎng)液的上清液不斷移出。下列相關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A.灌流式培養(yǎng)的細(xì)胞會貼壁生長,但不會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象
B.灌流是在細(xì)胞密度達(dá)到一定濃度或者營養(yǎng)物質(zhì)低于一定濃度時(shí)進(jìn)行
C.過高的灌流速率會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)不能得到充分利用,造成培養(yǎng)基浪費(fèi)
D.配制灌流式培養(yǎng)所需培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)考慮細(xì)胞生存的液體環(huán)境的滲透壓
13.為研究血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用,某小組進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)并得到了如圖所示的結(jié)果。下列有關(guān)敘述正確的是(　　)
A.正常細(xì)胞在培養(yǎng)過程中可存在接觸抑制的現(xiàn)象,癌細(xì)胞則不存在該現(xiàn)象
B.血清應(yīng)在加入培養(yǎng)液后與培養(yǎng)液一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌
C.由圖示結(jié)果可知,血清的有無對癌細(xì)胞的影響小于對正常細(xì)胞的影響
D.利用含細(xì)胞懸液的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞的過程中應(yīng)定期更換培養(yǎng)液
14.(2023河南鄭州二中聯(lián)考)某團(tuán)隊(duì)利用化學(xué)小分子成功地將已高度分化的小鼠體細(xì)胞誘導(dǎo)成了可以重新分化發(fā)育為各種組織器官類型的“多潛能性”細(xì)胞,并將其命名為“化學(xué)誘導(dǎo)的多潛能干細(xì)胞(CiPS細(xì)胞)”,開辟了一條全新的體細(xì)胞“重編程”途徑。下列相關(guān)敘述錯誤的是(　　)
A.小鼠體細(xì)胞誘導(dǎo)成CiPS細(xì)胞是形態(tài)、結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程
B.與小鼠體細(xì)胞相比,誘導(dǎo)形成的CiPS細(xì)胞全能性較高
C.體細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化為CiPS細(xì)胞的過程類似于植物細(xì)胞的脫分化過程
D.體細(xì)胞轉(zhuǎn)化成CiPS細(xì)胞后,細(xì)胞內(nèi)部分不表達(dá)的基因可能會重新表達(dá)
15．2012年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎獲得者發(fā)現(xiàn)，利用逆轉(zhuǎn)錄病毒將Oct4等4個關(guān)鍵基因?qū)胍逊只捏w細(xì)胞中并表達(dá)，可使這個細(xì)胞成為類似干細(xì)胞的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS細(xì)胞）。下圖為該技術(shù)在人體細(xì)胞中的實(shí)驗(yàn)示意圖。下列相關(guān)敘述中，錯誤的是（　　）
A．由iPS細(xì)胞產(chǎn)生其他種類細(xì)胞的過程稱為細(xì)胞分化
B．利用患者的iPS細(xì)胞對其自身受損器官進(jìn)行修復(fù)，與傳統(tǒng)器官移植相比，成功率更高
C．iPS細(xì)胞的增殖難以控制，具有衰老細(xì)胞的特征
D．與ES細(xì)胞相比，iPS細(xì)胞用于再生醫(yī)學(xué)可回避倫理爭議
16．下圖表示人體干細(xì)胞發(fā)生的變化過程。下列有關(guān)此圖的敘述，正確的是(　　)
A．a(chǎn)、b、c均代表細(xì)胞分化過程
B．圖中各細(xì)胞中蛋白質(zhì)種類相同
C．b、c過程產(chǎn)生的細(xì)胞一般都具有細(xì)胞周期
D．a(chǎn)、b、c過程產(chǎn)生的各細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化
17.（不定項(xiàng)）下列關(guān)于小鼠成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程及原理的敘述不正確的是（　　）
A．用胰蛋白酶將組織細(xì)胞的膜蛋白消化可獲得單個的細(xì)胞
B．在培養(yǎng)基中添加胰島素可促進(jìn)細(xì)胞對葡萄糖的攝取
C．培養(yǎng)到一定時(shí)期的細(xì)胞停止增殖的主要原因是營養(yǎng)枯竭
D．培養(yǎng)過程中二倍體細(xì)胞可能會經(jīng)脫分化形成癌細(xì)胞
18.（不定項(xiàng)）如圖為動物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過程示意圖。下列敘述不正確的是（　　）
A．步驟①的操作不需要在無菌環(huán)境中進(jìn)行
B．步驟②中用鹽酸溶解細(xì)胞間物質(zhì)使細(xì)胞分離
C．步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理
D．步驟④培養(yǎng)過程中，一定要用到胰蛋白酶處理
19．（不定項(xiàng)）下列有關(guān)干細(xì)胞的敘述中，正確的是（　　）
A．胚胎干細(xì)胞可以分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞
B．造血干細(xì)胞分化形成紅細(xì)胞和白細(xì)胞的過程是不可逆的
C．肝臟干細(xì)胞分化形成肝臟細(xì)胞的過程表現(xiàn)了細(xì)胞的全能性
D．各種干細(xì)胞分化形成不同組織細(xì)胞是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果
20.(2023山東煙臺招遠(yuǎn)一中期中)科學(xué)家將小鼠多能干細(xì)胞的4種基因Oct3/4、Sox2、c-Myc和Klf4,同時(shí)導(dǎo)入已分化的小鼠成纖維細(xì)胞中,結(jié)果后者被誘導(dǎo)成為多能干細(xì)胞,稱為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞),此類細(xì)胞能分裂并產(chǎn)生皮膚細(xì)胞﹑神經(jīng)細(xì)胞以及可以搏動的心肌細(xì)胞等。請分析回答下列問題:
(1)④過程表示細(xì)胞發(fā)生了分化,原因是D、E和F細(xì)胞中的　　 　　　　　　(填2種化合物名稱)種類不完全相同。
(2)動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中需通入CO2,其作用是　　　　 　　　　　　　　。
(3)利用自變量控制的減法原理,要了解Oct3/4、Sox2,c-Myc和Klf4基因在誘導(dǎo)iPS細(xì)胞時(shí),每個基因作用的相對大小,請你給出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的思路。_________________________________________________________________________。
_________________________________________________________________________。
_________________________________________________________________________。
21.請回答下面有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的問題。
（1）在動物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，將細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)按其種類和所需數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基稱為 　 　培養(yǎng)基。通常在培養(yǎng)培養(yǎng)過程中保證環(huán)境是 　 　。
（2）細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含O2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，O2的作用是 　 　。
（3）培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般取自幼體或胚胎組織，原因是_____________________________
_________________________________________________________________________。
（4）細(xì)胞原代培養(yǎng)的過程中，貼壁細(xì)胞分裂受阻的原因是 　 　
。
（5）原代培養(yǎng)的細(xì)胞停止分裂增殖后，需對細(xì)胞進(jìn)行___________________，才能讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)，對細(xì)胞進(jìn)行____________法收集，之后制成細(xì)胞懸液，分瓶培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)至50以后，少數(shù)細(xì)胞會克服細(xì)胞自然壽命的極限，獲得不死性，與正常細(xì)胞相比，其遺傳物質(zhì)已發(fā)生 　 　。
2.2.1 動物細(xì)胞培養(yǎng)
預(yù)學(xué)案答案
動物細(xì)胞培養(yǎng) 動物細(xì)胞融合 動物細(xì)胞核移植 動物細(xì)胞培養(yǎng)
1.（1）組織 單個細(xì)胞 培養(yǎng)條件 生長和增殖
（2）①種類 所需量 血清 培養(yǎng)液 ②無菌 無毒 滅菌 培養(yǎng)液③36.50.5 7.2-7.4 滲透壓④ 空氣 CO2 細(xì)胞代謝 維持培養(yǎng)液的pH
2.機(jī)械 胰蛋白酶、膠原蛋白酶 單個細(xì)胞 細(xì)胞懸液 原 傳
（1）細(xì)胞密度過大 有害代謝物 營養(yǎng)物質(zhì)缺乏 （2）培養(yǎng)瓶的瓶壁
（3）相互接觸 分裂增殖 （4）初次培養(yǎng) （5） 離心 胰蛋白酶 離心
3.（1）其他類型的細(xì)胞 （2）早期胚胎 骨髓 臍帶血
（3）① 早期胚胎 所有組織 器官 個體 ②造血干細(xì)胞 神經(jīng)干細(xì)胞 精原干細(xì)胞 特定的細(xì)胞或組織 完整個體 ③免疫排斥反應(yīng)
判斷對錯：×√××××
導(dǎo)學(xué)案答案
探究一：3.細(xì)胞增殖（有絲分裂）
探究二：1．氨基酸、無機(jī)鹽 血清2.培養(yǎng)用具 無菌 培養(yǎng)液 3. 36.50.5℃ 7.2-7.4
4. O2 pH
探究三：
1.一般取自幼齡動物的器官或組織，因?yàn)檫@些組織或器官生命力旺盛，分裂能力強(qiáng)。
2. 一是使每個細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸，保證細(xì)胞所需要的營養(yǎng)供應(yīng)；二是能保證細(xì)胞內(nèi)有害代謝產(chǎn)物的及時(shí)排出。
3. 第一次使用的目的是使組織細(xì)胞分散開；第二次使用的目的是使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來，便于分散后繼續(xù)培養(yǎng)。
胃蛋白酶發(fā)揮作用的最適pH為2.0左右，由于大多數(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中失活，因此不能用胃蛋白酶使細(xì)胞分散開。
探究四：
1.動物細(xì)胞培養(yǎng)是為了獲得大量的動物細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物；植物組織培養(yǎng)是為了獲得新個體。
2．相同，都是有絲分裂。
探究五：
1.誘導(dǎo)多能干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性，可以被誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞，經(jīng)移植可使壞死或退化部位得以修復(fù)并恢復(fù)正常功能。
2. 通過干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化，可以培育出人造器官，從而解決供體器官不足的問題。另一方面，由于是自身細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化形成的，所以無免疫排斥反應(yīng)。
典例1、D 典例2、A
2.2.1 動物細(xì)胞培養(yǎng)
固學(xué)案答案
1.D 2.D 3.C 4.B 5.D 6.A 7.D 8.C
9.A 10.D 11.D 12.A 13.ACD 14.A 15.C 16.D
17.ACD 18.ABD 19.ABD
20.
　(1)RNA、蛋白質(zhì)　(2)維持培養(yǎng)液的pH　(3)依次去掉1個基因,將其他3個基因轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細(xì)胞中,通過與轉(zhuǎn)入4個基因的小鼠成纖維細(xì)胞的誘導(dǎo)情況進(jìn)行比較,來推測缺失的基因?qū)φT導(dǎo)iPS細(xì)胞的影響,進(jìn)而判斷每個基因作用的相對大小。
21.
（1）合成 無菌、無毒（2）細(xì)胞代謝必需的
（3）動物細(xì)胞培養(yǎng)利用細(xì)胞增殖的原理，胚胎或幼齡動物的器官分裂增殖能力強(qiáng)
（4）細(xì)胞密度過大、有害代謝物積累、 培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏、接觸抑制
（5）分瓶培養(yǎng) 離心法 突變

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